Articol invitat: sărbătorim realizările profesorului Stan Heptinstall, fondator și redactor-șef al Trombocite (1990-2015)

  • Articol complet
  • Cifre și date
  • Referințe
  • Citații
  • Valori
  • Reimprimări și permisiuni
  • PDF

Trombocitele joacă un rol semnificativ în procesul fiziologic al hemostazei prin asigurarea integrității peretelui vasului și inițierea mecanismelor hemostatice primare atunci când peretele vasului este deteriorat. De asemenea, ele contribuie la formarea cheagurilor de sânge care dau naștere la infarct și accident vascular cerebral. Este bine cunoscut faptul că funcția trombocitelor poate fi afectată - fie crescută, fie scăzută - din cauza factorilor moșteniți sau dobândiți. Funcția redusă a trombocitelor este cel mai adesea rezultatul unor defecte moștenite în morfologia/funcția trombocitelor sau o consecință a utilizării unei varietăți de agenți farmacologici care fie inhibă în mod specific trombocitele pentru a reduce riscul de atacuri de cord sau accident vascular cerebral, fie a celor cu ținte terapeutice alternative care pot afectează, de asemenea, funcția trombocitelor. Se știe, de asemenea, că mai multe componente dietetice și plante medicinale afectează capacitatea de reacție a trombocitelor [1].

testarea

În consecință, există mai multe scenarii clinice când trebuie evaluată funcția trombocitelor. O gamă de tehnici sunt disponibile pentru a testa reactivitatea trombocitelor, cu toate acestea, una dintre limitările majore ale tuturor metodologiilor disponibile este că testarea trebuie efectuată pe o probă de sânge proaspăt în termen de 2-4 ore de la punerea venoasă [2]. Chiar dacă tehnica nu este prea complexă și consumă mult timp, ea limitează totuși testarea trombocitelor la un laborator specializat sau cel puțin la un laborator unde este instalat echipamentul adecvat și personalul experimentat este disponibil pentru efectuarea testelor. O astfel de limitare este un obstacol semnificativ. De exemplu, în cazul diagnosticării defectelor funcției plachetare, poate exista o subestimare a prevalenței acestora, cazurile care tind să fie grupate în apropierea centrelor de diagnostic specializate [3].

Pentru a depăși unele dintre aceste limitări, au fost dezvoltate tehnologii moderne, cum ar fi sistemul VerifyNow (Accumetrics, San Diego, CA) și Agregometria cu electrod multiplu (MEA, Multiplate®, Roche Diagnostics International Ltd, Rotkreuz, Elveția). În prezent, aplicarea lor se limitează în cea mai mare parte la evaluarea eficacității terapiei antiplachetare, deși MEA a fost utilizat în două studii pentru a diagnostica unul dintre cele mai proeminente defecte moștenite ale trombocitelor - trombastenia Glanzmann [7, 8]. Aceste teste sunt cu siguranță mai simple și, prin urmare, consumă mai puțin timp și necesită multă muncă, sunt efectuate pe sânge integral și sunt mult mai bine standardizate decât LTA tradițional. Cu toate acestea, dezavantajul lor este că utilizează o piesă dedicată de echipamente sofisticate și utilizarea unor consumabile specifice, care împreună fac aceste metodologii destul de costisitoare de rulat.

O altă aplicație importantă a testării funcției trombocitelor se află în zona de descoperire a medicamentelor, atunci când sunt dezvoltate medicamente noi concepute pentru a afecta funcția trombocitelor sau când efectul asupra trombocitelor trebuie exclus ca efect nedorit pentru un medicament cu ținta terapeutică diferită de trombocite. În acest scenariu, metodologia complexă sau costisitoare nu este ideală, deoarece studiile din industria farmaceutică necesită adesea prelucrarea mai multor eșantioane într-o perioadă limitată de timp, în mai multe centre și necesită ca metodologia să fie standardizată în toate centrele participante.

Profesorul Stan Heptinstall a condus grupul de cercetare a trombocitelor de la Universitatea din Nottingham de mai bine de 30 de ani și în acest timp grupul său a efectuat atât cercetări de bază pe trombocite, cât și proiecte multiple cu o serie de companii farmaceutice, îndeplinind cerințele diferite de evaluare a funcției trombocitelor și dezvoltarea de tehnologii și analize pentru a îndeplini aceste cerințe. Dezvoltarea unor proceduri concepute pentru a satisface nevoile de testare standardizată a funcției trombocitelor în mai multe centre a schimbat abordarea testării trombocitelor în cadrul grupului. Utilizarea citometriei de flux de ultimă generație pe celule fixe a devenit un focus major de cercetare pentru grup și a generat un interes larg pentru această abordare. Tehnologia oferă o modalitate unică de stabilizare a markerilor de activare a trombocitelor prin utilizarea unei soluții cunoscute sub numele de PAMFix (referință brevet PCT/GB2008/050169) care stabilizează markerii de activare a trombocitelor pe trombocitele activate în sânge integral timp de până la 9 zile. Markerii de activare pot fi apoi măsurați prin citometrie în flux într-o cantitate foarte mică de sânge integral. Studii recente au arătat că, cel puțin pentru exprimarea P-selectinei, se poate obține o stabilitate extinsă de 28 de zile folosind PAMFix (date nepublicate).

S-a demonstrat că măsurarea activării trombocitelor ca cantitate de P-selectină exprimată pe suprafața trombocitelor ca răspuns la stimularea cu agonist (i) specific (i) oferă o modalitate robustă și sensibilă de evaluare a nivelului de reactivitate a trombocitelor [9]. S-a demonstrat că reactivitatea ridicată a trombocitelor măsurată utilizând această abordare prezice riscul de evenimente trombotice recurente la pacienții care au dezvoltat sindrom coronarian acut (ACS) în timpul tratamentului cu agentul antiplachetar clopidogrel [10]. În general, tehnica a fost ușor de realizat, necesitând doar un volum mic de sânge, iar probele de sânge fixe au fost stabile și pot fi analizate în serie într-un stadiu ulterior. Cu toate acestea, la acea vreme, această tehnică era încă bazată pe laborator și necesita personal experimentat să efectueze manipularea sângelui și pipetarea.