Informații despre articol

Chunbo Wang, Departamentul de Farmacologie, Colegiul de Medicină al Universității Qingdao, 308 Ningxia Road, Qingdao 266000, Provincia Shandong, China. E-mail: [e-mail protejat]

efectele

Abstract

Obiectiv

Identificarea genelor potențiale care pot fi implicate în metabolismul lipidic la șobolani după tratamentul cu extract apos de Arctium lappa L (brusture).

Metode

Șobolanii au fost împărțiți în mod aleatoriu în șase grupuri: (i) control (dietă standard); (ii) grupul model (numai dietă bogată în grăsimi); (iii) dietă bogată în grăsimi și extract de rădăcină apoasă de brusture în doză mică (2 g/kg); (iv) dietă bogată în grăsimi și extract de rădăcină apoasă de brusture în doză moderată (4 g/kg); (v) dietă bogată în grăsimi și extract apos din rădăcină de brusture în doză mare (8 g/kg); și (vi) un grup de control pozitiv expus la o dietă bogată în grăsimi și simvastatină (10 mg/kg). Analiza Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) a fost efectuată pentru a găsi potențialele gene candidate implicate în modularea lipidelor din sânge prin tratament cu extract de rădăcină apoasă de brusture.

Rezultate

Extractul de rădăcină de brusture a redus greutatea corporală și nivelul colesterolului la șobolani. Analiza KEGG a relevat 113 gene implicate în căile metabolice. Dintre acestea, au fost identificate 27 de gene potențiale asociate cu metabolismul lipidelor din sânge.

Concluzii

Extractul apos de rădăcină de brusture a redus greutatea corporală și colesterolul la șobolani, posibil prin modularea expresiei diferențiale a genelor.

Introducere

Obezitatea este o boală epidemică care reprezintă o amenințare severă pentru sănătatea publică prin creșterea incidenței diabetului zaharat de tip 2, a hipertensiunii și a bolilor de inimă. 1 Prevalența supraponderalității și a obezității este mai mare de 60% la adulții din SUA, iar rata crește rapid în rândul copiilor și adolescenților. 2 Mecanismul de bază al obezității la nivel individual este un dezechilibru al aportului de calorii și al influențelor asupra mediului. 3 Cu toate acestea, mecanismul molecular exact al obezității nu este încă bine definit.

Tulburările glucozei și ale metabolismului lipidic au fost considerate factori de risc pentru obezitate. De exemplu, secreția hepatică excesivă de colesterol, care are ca rezultat bile suprasaturate, a fost considerată a fi legată de patogeneza obezității. 4 Curcumina joacă un rol central în dezvoltarea obezității și a complicațiilor acesteia prin modularea metabolismului lipidic. 5 Până în prezent, puține gene au fost identificate ca fiind responsabile pentru dezvoltarea obezității, deoarece este o tulburare complexă. Într-adevăr, este o provocare identificarea genelor care sunt responsabile de obezitate. Odată cu apariția tehnicilor de exprimare diferențială a genelor, este posibil să se identifice genele care sunt exprimate diferențial la indivizii normali în comparație cu cei care sunt obezi. Acestea ne determină să investigăm rolurile metabolismului lipidic în apariția obezității la nivel molecular.

Arctium lappa L. (brusture mai mare), o medicină tradițională chineză și o plantă perenă comestibilă din familia Asteraceae, 6 a fost de asemenea folosită pentru terapie în Europa, America de Nord și Asia de sute de ani. Rădăcina de brusture a fost utilizată în mod tradițional în remedii pe bază de plante pentru tratarea multor boli, inclusiv dureri în gât, artrită, amigdalită, erupții cutanate 7, precum și boli cardiovasculare. S-a demonstrat că atenuează acumularea de colesterol în ficat și ser și poate reduce lipidele din sânge la cei cu ateroscleroză. 9 Din câte știm, s-au efectuat puține studii pentru a investiga rolurile rădăcinii de brusture în metabolismul lipidelor. Acest studiu a investigat expresia diferențială a genelor după tratamentul cu diferite concentrații de extract de rădăcină apoasă de brusture la șobolani pentru a identifica genele potențiale care ar putea fi implicate în metabolismul lipidelor.

Materiale și metode

Animale

Șobolani Sprague - Dawley sănătoși, cu patogeni specifici masculin, în vârstă de 6 săptămâni (interval de greutate, 187-209 g) au fost cumpărați de la Centrul pentru animale al Academiei Chineze de Științe Medicale (Beijing, China). Animalele (n = 60) au fost adăpostite într-un ciclu de 12 ore de lumină/12 ore de întuneric, la o temperatură de 20-24 ℃ și umiditate de 40-70%. Toate animalele aveau acces gratuit la alimente și apă.

Animalele au fost manipulate în conformitate cu liniile directoare de la Institutele Naționale de Sănătate și Ghidul pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator. Protocoalele de studiu au fost aprobate de Comitetul Etic al Colegiului de Medicină al Universității Qingdao, Qingdao, provincia Shandong, China. Au fost luate toate măsurile pentru a reduce la minimum suferința animalelor.

Proiectare experimentală

Șobolanii au fost împărțiți aleatoriu în următoarele șase grupuri folosind un generator de numere aleatorii: (i) grupul de controln = 8), care a fost hrănită cu o dietă standard achiziționată de la Shandong Experimental Animal Center (Jinan, China); (ii) grup de modele (n = 7), care a fost hrănită cu o dietă bogată în grăsimi care conțin o dietă standard, colesterol, grăsime de porc, pudră de custard și ciocolată; (iii) grup cu doze mici (n = 6), care a fost alimentat cu o dietă bogată în grăsimi și extract apos din rădăcină de brusture (2 g/kg); (iv) grup cu doză moderată (n = 6), care a fost alimentat cu o dietă bogată în grăsimi și extract apos din rădăcină de brusture (4 g/kg); (v) grup cu doze mari (n = 6), care a fost alimentat cu o dietă bogată în grăsimi și extract apos din rădăcină de brusture (8 g/kg); și (vi) grupul de control pozitiv (n = 7), care a fost alimentat cu o dietă bogată în grăsimi și simvastatină (10 mg/kg) printr-o injecție intragastrică. Administrarea extractului apos de rădăcină de brusture a fost, de asemenea, administrată printr-o injecție intragastrică. Grupurilor de control și model le-a fost administrată soluție salină normală (10 ml/kg) printr-o injecție intragastrică. Toate cele șase grupuri au primit injecții intragastrice o dată pe zi timp de 8 săptămâni.

Măsurători ale greutății corporale

Greutatea corporală a fost determinată utilizând un bilanț comercial înainte de începerea tratamentului (valoarea inițială înainte de orice modificare a dietei) și imediat după studiu și la săptămânile 2, 6 și 8 după tratament. Intervalul dintre momentul inițial și săptămâna 0 a fost de aproximativ 5-7 zile, timp în care șobolanii au fost hrăniți cu dieta standard. Șobolanii au primit dieta standard sau bogată în grăsimi pe parcursul perioadei de tratament de 8 săptămâni. Toate determinările greutății au fost efectuate cel puțin în triplu exemplar.

Determinarea profilului lipidic seric

Sângele venos proaspăt a fost colectat de la fiecare animal după un post de 12 ore în timpul căruia apa a fost furnizată liber. Probele au fost centrifugate la 1600 g într-o centrifugă Eppendorf 5424 (Eppendorf, Mississauga, Ontario, Canada) timp de 10 minute la temperatura camerei pentru a colecta supernatantul, care a fost apoi depozitat la -80 ℃ până la o analiză ulterioară. Nivelurile serice de lipide, inclusiv colesterolul total (TC), trigliceridele (TG), colesterolul lipoproteic cu densitate mică (LDL-C), colesterolul cu lipoproteine ​​cu densitate ridicată (HDL-C) și colesterolul (CHOL), au fost determinate folosind kituri comerciale Fisher Scientific, Rockford, IL, SUA) conform instrucțiunilor producătorului.

Secvențierea ARN

Sângele venos a fost colectat din cantul medial al ochiului fiecărui animal după un post de 12 ore în timpul căruia apa a fost furnizată liber. Sângele a fost amestecat cu un volum de 3 ori de reactiv TRIzol® (Invitrogen, Carlsbad, CA, SUA) urmat de depozitare la -80 (. ARN-ul total a fost extras din întregul sânge de șobolani folosind reactiv TRIzol® (Invitrogen, Carlsbad, CA, SUA) conform instrucțiunilor producătorului. Pregătirea bibliotecii de ARN a fost efectuată în conformitate cu procedurile de operare standard (Directional mARN-Seq Sample Preparation, Part # 15018460 Rev. A, octombrie 2010; Illumina Inc., San Diego, CA, SUA). Secvențierea ARN a fost efectuată așa cum s-a descris anterior. Au fost acceptate 10 fragmente de secvență scurtă brute dacă au trecut parametrii de filtrare a calității.

Analiza KEGG

Analiza Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) a fost realizată prin referirea la baza de date a căii KEGG conform unui studiu anterior care a folosit KEGG Automatic Annotation Server (versiunea 1.68 x). 11 Analiza a fost utilizată pentru a determina mecanismele potențiale care pot fi implicate în metabolismul lipidelor din sânge.

Analize statistice

Tabelul 1. Efectele extractului apos de rădăcină de brusture asupra greutății corporale (g) a șobolanilor.

Tabelul 1. Efectele extractului apos de rădăcină de brusture asupra greutății corporale (g) a șobolanilor.

Tabelul 2. Efectele extractului apos de rădăcină de brusture asupra nivelului de lipide din sânge al șobolanilor.

Tabelul 2. Efectele extractului apos de rădăcină de brusture asupra nivelului de lipide din sânge al șobolanilor.

Tabelul 3. Expresia diferențială a genelor între grupurile de șobolani tratați cu sau fără extract de rădăcină de brusture apoasă.

Tabelul 3. Expresia diferențială a genelor între grupurile de șobolani tratați cu sau fără extract de rădăcină de brusture apoasă.

Figura 1. Numărul de gene implicate în diferite procese biologice, astfel cum a fost identificat de către Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes analysis. HTLV-1, virus limfotropic al celulelor T uman 1; TCA, acid tricarboxilic.

Tabelul 4. Identificarea genelor implicate în căile metabolice utilizând analiza Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes.

Tabelul 4. Identificarea genelor implicate în căile metabolice utilizând analiza Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes.

Discuţie

Proiectul KEGG constă dintr-o bază de date de cale de referință. Proiecția rezultată a căilor de referință asupra organismelor cu genomuri secvențiate a fost utilizată pe scară largă pentru a prezice căile metabolice prezente într-un organism din genom. 12 Prezentul studiu a avut ca scop screeningul genelor asociate cu metabolismul lipidelor din sânge la șobolani, pentru a identifica mecanismele potențiale responsabile de modificările nivelurilor de lipide din sânge. Rezultatele actuale au demonstrat că extractul de rădăcină de brusture ar putea reduce greutatea corporală în mod dependent de doză la șobolanii hrăniți cu o dietă bogată în grăsimi și a redus nivelul colesterolului.

Principala limitare a acestui studiu a fost că, deși au fost identificate 27 de gene potențiale asociate cu metabolismul lipidelor din sânge, nu a fost posibil să se determine mecanismele exacte implicate în timpul acestui studiu de cercetare actual. În viitor, cercetarea se va concentra pe eliminarea expresiei genelor pentru a identifica care genă (e) joacă roluri cruciale în aceste procese biologice.

În concluzie, acest studiu a arătat că un extract apos de rădăcină de brusture ar putea atenua greutatea corporală a șobolanilor într-o manieră dependentă de doză, după administrarea unei diete bogate în grăsimi. În plus, ar putea reduce și nivelul colesterolului la aceiași șobolani. Pentru a realiza aceste modificări, extractul de rădăcină de brusture pare să inducă expresia diferențială a genelor la șobolani.

Declarația de interese conflictuale

Autorii declară că nu există conflicte de interese.