Marie-Thérèse Ruf

un institut elvețian de sănătate tropicală și publică, Basel, Elveția

b Universitatea din Basel, Basel, Elveția

Christina Steffen

c Departamentul de Chirurgie, Spitalul Cairns, Cairns, QLD, Australia

Miriam Bolz

un institut elvețian de sănătate tropicală și publică, Basel, Elveția

b Universitatea din Basel, Basel, Elveția

Peter Schmid

un institut elvețian de sănătate tropicală și publică, Basel, Elveția

b Universitatea din Basel, Basel, Elveția

Gerd Pluschke

un institut elvețian de sănătate tropicală și publică, Basel, Elveția

b Universitatea din Basel, Basel, Elveția

tabelul 1.

Numărul pacientului Vârsta (ani) Gen Localizarea corpului leziunii Existența leziunii (săptămâni)
17FPiciorul stâng 1 Fotografiile au fost realizate fie cu o cameră Leica DFC 420C, fie cu un Aperio ScanScope XT. Limita zonei țesuturilor afectate de boală este indicată cu o linie neagră în colorația HE (A, D, G, J, M). Pentru pacienții sunt prezentate una și 2 secțiuni transversale prin întreaga leziune (A, D), leziunile pacienților de la 3 la 5 (G, J, M) au fost prea mari pentru a fi procesate complet și, prin urmare, doar jumătate din leziune este prezentată cu nucleul leziunii necrotice în colțul din dreapta sus. Colorarea ZN (B, E, H, K, N) a dezvăluit că AFB s-au găsit exclusiv în zonele necrotice (stele roșii). Au fost prezente predominant grupuri de bacterii extracelulare (C, I, O), cu toate acestea aproape de centura de infiltrare au fost observate atât bacterii intracelulare, cât și intracelulare (F, L). Rezultate similare au fost făcute pentru toate cele 12 leziuni analizate.

infiltrante

Colorarea TUNELULUI. Protocolul TUNEL permite colorarea fragmentelor de ADN cu greutate moleculară mică care apar de obicei în timpul apoptozei (colorare maro). Secțiunile de pacienți de la unu la 5 au fost colorate cu „In Situ Cell Death Detection Kit, POD” (nr. Cat. 11684817910) de la Roche conform protocolului producătorului (protocolul utilizat a fost pentru secțiunile de țesut cu un fundal nespecific ridicat). Contra pata a fost făcută cu hematoxilină. Fotografiile au fost realizate fie cu o cameră Leica DFC 420C, fie cu un Aperio ScanScope XT. Privire de ansamblu asupra secțiunilor de țesut relevă o colorare difuză a nucleului leziunii necrotice (A1-A4, B1) și nicio colorare a zonei țesutului sănătos. Mărirea crescută (B2, B3) a arătat o colorare distinctă a celulelor unice din centura celulelor infiltrante (stea verde B1, B2) reprezentând celule în curs de apoptoză și o colorare mai dispersată în interiorul miezului necrotic (stea roșie B1, B3) reprezentând resturi Fragmente de ADN din infiltrația inițială. Rezultate similare au fost făcute pentru toate cele 12 leziuni analizate.

Compoziția infiltratului imun care înconjoară nucleul necrotic. Secțiunile seriale din leziunea pacientului 5 au fost colorate prin imunohistochimie. Următorii anticorpi au fost folosiți conform protocolului producătorului: Elastază (neutrofile polimorfonucleare, NP57, Dako, M0752), CD3 (limfocite T, Dako, A0452), CD68 (macrofage/monocite, KP1, Dako, M0814) și limfocite CD20, 7D1, Novocastra, NCL - CD20–7D1). Fotografiile au fost realizate fie cu o cameră Leica DFC 420C, fie cu un Aperio ScanScope XT. Celulele B CD20 pozitive (A1, B1) au fost prezente în clustere în timp ce celulele T CD3 pozitive (A2, B2), neutrofilele N-elastază pozitive (A3, B3) și macrofagele CD68 pozitive (A4, B4) au fost prezente pe tot parcursul infiltrării centură în mod stratificat. Acumularile de neutrofile au fost prezente în plus aproape de infecția secundară (A3, cerc cu puncte roșii).

Răspunsurile imune timpurii pot ajuta în multe cazuri la conținerea infecțiilor cu M. ulcerans și la prevenirea bolii clinice BU, așa cum este indicat de dezvoltarea unui răspuns serologic împotriva M. ulcerans la mulți indivizi sănătoși care trăiesc în zonele endemice BU africane. 38–40 Presupunem că pentru dezvoltarea unei infecții cronice după inocularea cu M. ulcerans poate fi esențial să se dezvolte un grup bacterian suficient de mare care să genereze un nor protector de miccolactonă. După multiplicarea intracelulară și uciderea celulei gazdă, acumulările bacteriene asemănătoare globilor pot reprezenta un punct de plecare pentru dezvoltarea unor grupuri extracelulare mari de M. ulcerans. 41–43 În leziunile timpurii, dar totuși stabilite, așa cum sunt analizate aici, celulele imune infiltrante nu mai pot ajunge la micobacteriile extracelulare din centrul necrotic, în ciuda extravazării masive a leucocitelor. Pe de altă parte, stratul de celule infiltrante în jurul nucleului leziunii poate - împreună cu alți factori, cum ar fi formarea unei matrice extracelulare abundente 44 - să împiedice răspândirea micobacteriilor în limfă și sânge. Acest lucru poate contribui la faptul că majoritatea pacienților cu BU prezintă o singură leziune. 2

Modul de transmitere a M. ulcerans nu este în prezent clar. 45 Au fost implicate atât mușcăturile de insecte, cât și inocularea directă a bacteriilor în piele dintr-un rezervor de mediu după un traumatism cutanat. După inoculare, o fază de creștere intra-macrofagă timpurie poate juca un rol în dezvoltarea bolii. 15, 46 În leziunile timpurii analizate aici, AFB s-au găsit exclusiv în nucleul necrotic al leziunilor (stele roșii din Fig. 1B, E, H, K, N) și au apărut în principal ca grup extracelular (Fig. 1I, O) . Cu toate acestea, atunci când sunt prezente aproape de centura de infiltrare, unele micobacterii păreau a fi localizate intracelular (Fig. 1C, F, L). Ca și în leziunile mai avansate, 47 AFB s-au găsit de obicei în țesutul subcutanat și numai rar în derm. Localizarea preferențială a M. ulcerans în subcutanat mai profund poate reflecta calea de inoculare sau un tropism legat de nevoile nutriționale furnizate numai de țesutul adipos distrus. 47

Când răspunsurile imune timpurii nu elimină inoculul M. ulcerans, se poate dezvolta o infecție cronică și grupurile extracelulare ale micobacteriilor nu mai pot fi atinse de celulele infiltrante. Cu toate acestea, formarea centurii de infiltrare în jurul nucleului necrotic al leziunii descrise aici, cel mai probabil ajută la prevenirea răspândirii sistemice a infecției; dar nu poate preveni multiplicarea locală a bacteriilor urmată de ulcerație progresivă.

Dezvăluirea potențialelor conflicte de interese

Nu au fost dezvăluite potențiale conflicte de interese.

Mulțumiri

Dorim să-i mulțumim Dr. Lindsay Wyndham, Pathology Queensland, Cairns și Dr. Jan Kencian, Sullivan & Nicolaides Pathology Pty Ltd pentru pregătirea și verificarea diapozitivelor. În plus, mulțumim lui Vincent Romanet, Caroline Stork, Ernesta Dammassa și Patricia Barzaghi Rinaudo de la Novartis Basel pentru suport tehnic excelent și oferirea accesului la echipamentele de laborator pentru histopatologie.

Finanțarea

Această lucrare a fost susținută de Fundația Medicor.