Epigenetics Group, Agenția Internațională pentru Cercetarea Cancerului (IARC), Lyon, Franța,

acid

Instituto Nacional de Salud Pública, Cuernavaca, Morelos, México,

Grupul de epidemiologie nutrițională, IARC, Lyon, Franța;

Grupul de epidemiologie nutrițională, IARC, Lyon, Franța;

Queensland Children's Medical Research Institute, Royal Children's Hospital, Herston, Queensland, Australia și

Nutrition and Health Sciences și Departamentul Hubert de Sănătate Globală, Școala Rollins de Sănătate Publică, Universitatea Emory, Atlanta, Georgia

Instituto Nacional de Salud Pública, Cuernavaca, Morelos, México,

Epigenetics Group, Agenția Internațională pentru Cercetarea Cancerului (IARC), Lyon, Franța,

Instituto Nacional de Salud Pública, Cuernavaca, Morelos, México,

Nutriție și Științe ale Sănătății și Departamentul Hubert de Sănătate Globală, Școala Rollins de Sănătate Publică, Universitatea Emory, Atlanta, Georgia

Adresa pentru cereri de reimprimare și alte corespondențe: I. Romieu, Agenția Internațională pentru Cercetarea Cancerului, Grupul de Epidemiologie Nutrițională, 150, curs Albert Thomas, Lyon, 69372, Franța (e-mail: [e-mail protejat]).

Abstract

se consideră că modificările epigenetice stabilizează tiparele de exprimare a genelor în anumite tipuri de celule și joacă un rol în menținerea identității celulare și a destinelor de diferențiere. Cu toate acestea, modelele epigenetice sunt reconfigurate la nivel global atunci când gametii se fuzionează pentru a forma zigotul, iar precursorii gametului se dezvoltă și migrează în embrion (50). Reprogramarea epigenetică are loc în timpul dezvoltării și diferențierii embrionare și fetale normale și poate fi afectată de expunerea la mediu, rezultând modificări de lungă durată care ar putea afecta sănătatea și riscul de boli în viața ulterioară (2). Fereastra critică a vulnerabilității la expunerile de mediu relevante în timpul reprogramării epigenetice este crucială pentru a înțelege impactul deplin al acestor factori asupra sănătății (7). Au fost documentate expunerile de mediu care afectează reprogramarea epigenetică și menținerea identității celulare, inclusiv expunerea in utero la micronutrienți dietetici (31, 43), restricție calorică (10), restricție proteică (8) și fumatul de țigară (30). Prin urmare, reglarea epigenetică este considerată o explicație extrem de plauzibilă pentru legarea expunerilor dietetice în uter și în viața timpurie de apariția bolilor cronice în timpul copilăriei și la vârsta adultă (5).

acids-3 Acizii grași polinesaturați (PUFA), inclusiv acidul docosahexaenoic (DHA) și acidul eicosapentaenoic (EPA), sunt esențiali pentru dezvoltarea fetală, sunt furnizați sugarului prin transfer placentar din circulația mamei (18) și joacă un rol important în îmbunătățirea sănătății umane în ceea ce privește bolile cardiovasculare, răspunsul inflamator și dezvoltarea creierului (39). Unele rapoarte au sugerat că FA-3 PUFA joacă un rol important în metabolismul cu un singur carbon (21, 45), influențând astfel metilarea globală în placentă (22). Am raportat recent că suplimentarea cu DHA în timpul sarcinii a fost asociată cu modificări atât ale nivelurilor globale de metilare, cât și cu promotorul genelor inflamatorii mediate (23). În studiul de față, am evaluat efectul suplimentării cu DHA în timpul sarcinii asupra reglării epigenetice a genelor imprimate, în special IGF2/H19 DMR, la descendenți.

Studiați populația și proiectarea.

Studiul se bazează pe un studiu de intervenție dublu-orb, randomizat, controlat cu placebo, cu supliment de DHA efectuat în Mexic (17, 35). Femeile însărcinate au fost recrutate între iulie 2005 și mai 2007 la IMSS General Hospital 1 din Cuernavaca, Mexic (24). Un chestionar de screening a fost utilizat pentru a identifica femeile care îndeplineau criteriile de incluziune. Femeile eligibile aveau vârsta cuprinsă între 18 și 35 de ani, la gestație săptămâna 18–22, și locuitorii din Cuernavaca care intenționau să livreze la IMSS General Hospital 1 și să rămână în zonă pentru următorii 2 ani și care au acordat consimțământul informat. Femeile au fost randomizate pentru a primi 400 mg de algă DHA zilnic (2 capsule/zi) sau placebo până la naștere. Fiecare capsulă DHA a furnizat 200 mg de DHA sintetizat dintr-o sursă de algă, iar capsulele placebo conțineau un amestec de porumb și ulei de soia și erau similare ca aspect și gust cu capsulele DHA. Din cele 1.094 de femei randomizate, 1.040 au început tratamentul și 973 au finalizat studiul cu 486 de femei în grupul de control și 487 de femei în grupul de tratament (35).

Participanții la studiu și membrii echipei de studiu au rămas necunoscători ai schemei de tratament pe toată perioada de intervenție a studiului. După ce studiul a fost explicat oral și în scris, toată lumea din populația din studiu a dat acordul scris pentru a participa la acest studiu. Caracteristicile participanților au fost colectate la momentul inițial pe un chestionar standardizat, iar măsurătorile antropometrice au fost obținute de către personalul sanitar instruit. Indicele de masă corporală (IMC) înainte de sarcină a fost calculat ca greutate (kg) împărțit la înălțimea (m) pătrat, pe baza înălțimii măsurate la momentul inițial (22 săptămâni de sarcină) și a greutății auto-raportate înainte de sarcină.

Colectie de mostre.

Am colectat probe de sânge din cordonul ombilical de la sugari de mame suplimentate cu DHA și controlăm la naștere. Probele de sânge din cordonul ombilical au fost colectate prin puncția venoasă a vaselor de cordon după ce cordonul a fost prins și tăiat, plasat într-un tub cu EDTA și păstrat la temperatura camerei până la transferul la laboratorul Instituto Nacional de Salud Pública pentru izolarea celulelor mononucleare din sângele cordonului ). Procedura de izolare a fost finalizată în decurs de 12 ore de la colectare. CBMC-urile au fost crioconservate în urma unui protocol standard. Sângele din cordonul ombilical a fost stratificat pe Lymphoprep (Axis-Shield, Dundee, Marea Britanie). CBMC-urile au fost separate prin centrifugare de densitate și au fost depozitate într-un rezervor de stocare criogenică la -80 ° C pentru analize suplimentare. Pentru acest studiu am selectat aleator 131 de probe CBMC de la mame suplimentate și 130 de la mame de control.

Extracția ADN-ului.

Izolarea ADN-ului din CBMC a fost efectuată cu mini-kitul AllPrep ADN/ARN (Qiagen, Valencia, CA) conform protocolului AllPrep ADN/ARN cu modificări minore. Cantitatea și calitatea ADN-ului purificat au fost determinate cu un spectrofotometru ND-1000 (NanoDrop Technologies, Wilmington, DE). Tot ADN-ul a fost depozitat la -20 ° C înainte de utilizare.

Conversia bisulfitului și piroza secvențierea.

Tabelul 1. Exemplu de secvențe

Coordonate genomice bazate pe UCSC Genome Browser, februarie 2009, GRCh37/hg19.