Analiza Western blot a extractelor din celule 293, NIH/3T3, C6 și COS, utilizând anticorp HP1beta.

Anticorp HP1β 2613

beta

Analiza Western blot a extractelor din celule 293, NIH/3T3, C6 și COS, utilizând anticorp HP1beta.

  • Reprezentantul local
  • Informațiile dvs. locale de cumpărare
  • Garantează anticorpii
  • FAQ
  • Suport tehnic
  • Date suport
  • produse asemanatoare
  • Utilizarea produsului
  • Protocoale
  • fundal
  • Căi și proteine
  • Referințe și recenzii

Date suport

REACTIVITATE H M R Mk
SENSIBILITATE Endogen
MW (kDa) 25
SURSĂ Iepure

Cheie de aplicare:

  • W-Occidental
  • IP-Imunoprecipitare
  • IHC-Imunohistochimie
  • CIP-Imunoprecipitarea cromatinei
  • DACĂ-Imunofluorescența
  • F-Citometrie în flux
  • E-P-ELISA-peptidă

Cheia de reactivitate încrucișată a speciilor:

  • H-Uman
  • M-Șoarece
  • R-Război
  • Hm-Hamster
  • Mk-Maimuţă
  • Noi-Nurcă
  • C-Pui
  • Dm-D. melanogaster
  • X-Xenopus
  • Z-Zebrafish
  • B-Bovin
  • Dg-Câine
  • Pag-Porc
  • Sc-S. cerevisiae
  • Ce-C. elegans
  • HR-Cal
  • Toate-Toate speciile așteptate
HP1β (D2F2) XP ® Rabbit mAb # 8676
Anticorp HP1γ # 2619
Anticorp HP1α # 2616
SUV39H1 (D11B6) Rabbit mAb # 8729
HP1α/β (C7F11) Rabbit mAb # 2623
Set de testare CUT & RUN # 86652
Histone H3 (K27M Mutant Specific) (D3B5T) Rabbit mAb (Alexa Fluor ® 488 Conjugate) # 85023
Anticorp Phospho-TIF1β (Ser824) # 4127
TIF1β (C42G12) Rabbit mAb # 4124
Tri-metil-histonă H3 (Lys27) (C36B11) Rabbit mAb (conjugat PE-Cy7 ®) # 91611

Informații despre utilizarea produsului

Depozitare

Livrat în 10 mM sodiu HEPES (pH 7,5), 150 mM NaCI, 100 μg/ml BSA și 50% glicerol. A se păstra la –20 ° C. Nu alicotați anticorpul.

Protocol

Protocolul Western Blotting

Pentru Western blots, incubați membrana cu anticorp primar diluat în 5% greutate/volum lapte uscat fără grăsime, 1X TBS, 0,1% Tween ® 20 la 4 ° C cu agitare ușoară, peste noapte.

NOTĂ: Vă rugăm să consultați pagina web a produsului anticorp primar pentru diluarea recomandată a anticorpilor.

A. Soluții și reactivi

NOTĂ: Pregătiți soluții cu osmoză inversă deionizată (RODI) sau apă de calitate echivalentă.

B. Blotarea proteinelor

Un protocol general pentru prepararea probei.

  1. Tratați celulele prin adăugarea de medii noi care conțin regulator pentru timpul dorit.
  2. Aspirați mass-media din culturi; spălați celulele cu 1X PBS; aspirat.
  3. Lizați celulele adăugând 1X tampon de probă SDS (100 perl per godeu de placă cu 6 godeuri sau 500 (l pentru o placă de 10 cm diametru). Îndepărtați imediat celulele de pe placă și transferați extractul într-un tub de microcentrifugă. Păstrați pe gheață.
  4. Sonicați timp de 10-15 secunde pentru a finaliza liza celulară și tăiați ADN-ul (pentru a reduce vâscozitatea probei).
  5. Se încălzește un eșantion de 20 de probe la 95-100 ° C timp de 5 minute; rece pe gheață.
  6. Microcentrifuga timp de 5 min.

Încărcați 20 de ontol pe gelul SDS-PAGE (10 cm x 10 cm).

NOTĂ: Se recomandă încărcarea markerilor de greutate moleculară preconizați (# 13953, 10 µl/bandă) pentru a verifica electrotransferul și scara de proteine ​​biotinilate (# 7727, 10 µl/bandă) pentru a determina greutățile moleculare.

  • Electrotransfer la membrana de nitroceluloză (# 12369).

    • C. Blocarea membranei și incubațiile de anticorpi

    NOTĂ: Volumele sunt pentru membrană de 10 cm x 10 cm (100 cm 2); pentru membrane de dimensiuni diferite, reglați volumele în mod corespunzător.

    I. Blocarea membranei

    1. (Opțional) După transfer, spălați membrana de nitroceluloză cu 25 ml TBS timp de 5 minute la temperatura camerei.
    2. Se incubează membrana în 25 ml de tampon de blocare timp de 1 oră la temperatura camerei.
    3. Se spală de trei ori timp de 5 min fiecare cu 15 ml TBST.

    II. Incubația primară a anticorpilor

    1. Incubați membrana și anticorpul primar (la diluarea și diluantul adecvat, așa cum se recomandă în pagina web a produsului) în 10 ml tampon de diluare a anticorpului primar cu agitare ușoară peste noapte la 4 ° C.
    2. Se spală de trei ori timp de 5 min fiecare cu 15 ml TBST.
    3. Incubați membrana cu IgG anti-iepure, anticorp legat de HRP (# 7074 la 1: 2000) și Anti-biotină, anticorp legat de HRP (# 7075 la 1: 1000–1: 3000) pentru a detecta markeri de proteine ​​biotinilate în 10 ml de tampon de blocare cu agitare ușoară timp de 1 oră la temperatura camerei.
    4. Se spală de trei ori timp de 5 min fiecare cu 15 ml TBST.
    5. Continuați cu detectarea (secțiunea D).

    D. Detectarea proteinelor

    Instrucțiunile de utilizare:

    1. Se spală HRP legat de membrană (anticorp conjugat) de trei ori timp de 5 minute în TBST.
    2. Pregătiți 1X Reactiv ECL SignalFire ™ (# 6883) prin diluarea unei părți Reactiv 2X A și o parte Reactiv B 2X (de exemplu, pentru 10 ml, adăugați 5 ml Reactiv A și 5 ml Reactiv B). Amesteca bine.
    3. Se incubează substratul cu membrană timp de 1 minut, se îndepărtează soluția în exces (membrana rămâne umedă), se înfășoară în plastic și se expune la film cu raze X.

    * Evitați expunerea repetată la piele.

    postat în iunie 2005

    revizuit în iunie 2020

    ID protocol: 263

    Specificitate/Sensibilitate

    Acest anticorp detectează nivelurile endogene de proteină beta HP1. Anticorpul nu reacționează încrucișat cu proteinele HP1 alfa sau HP1 gamma.

    Reactivitatea speciilor:

    Om, șoarece, șobolan, maimuță

    Speciile prezise să reacționeze pe baza omologiei secvenței 100%:

    Sursă/purificare

    Anticorpii policlonali sunt produși prin imunizarea animalelor cu o peptidă sintetică corespunzătoare capătului carboxi al HP1 beta uman. Anticorpii sunt purificați prin proteina A și cromatografia de afinitate peptidică.

    fundal

    Căi și proteine

    Explorează căi + proteine ​​legate de acest produs.