Abstract

Podmore și colab. răspuns - În corespondența noastră științifică 1, am raportat modificări ale ADN-ului limfocitelor la doi „markeri” stabiliți ai deteriorării ADN-ului oxidativ după suplimentarea zilnică a voluntarilor sănătoși cu 500 mg vitamina C timp de șase săptămâni. Un marker, 8-oxoadenină, a crescut, în timp ce celălalt, 8-oxoguanină, a scăzut. Pe această bază, vitamina C pare să acționeze atât ca pro-oxidant, cât și ca antioxidant in vivo. Contribuția noastră a stimulat multe comentarii, majoritatea cărora le-am adresat în manuscrisul nostru original Natură, care a fost scurtat pentru publicare la cererea redactorilor. Detaliile complete sunt disponibile de la noi la cerere.

colab manuscris

Sugestia făcută mai sus de Poulsenși colab. și Levine și colab. că oxidarea artefactuală a avut loc în timpul izolării limfocitelor și extracția ADN se bazează în întregime pe măsurarea unui singur marker, 8-oxoguanină. În calitate de membri fondatori ai Comitetului european de standardizare pentru deteriorarea ADN-ului oxidativ (ESCODD), suntem conștienți de discrepanțele dintre măsurarea 8-oxo-guaninei prin diferite tehnici. Într-adevăr, având în vedere acest lucru, am măsurat 8-oxoguanină în probe de ADN de la voluntari sănătoși prin două teste suplimentare folosind cromatografie lichidă de înaltă performanță: una care măsoară baza, iar cealaltă, pe scară largă, derivatul său 2'-deoxinucleozidic, 8- oxo-2'-deoxiguanozină (Cooke, M. S. și colab., manuscris în pregătire). Toate cele trei teste arată aceeași scădere a 8-oxoguaninei la suplimentarea cu vitamina C.

Nu suntem de acord cu Poulsen și colab. despre necesitatea randomizării sau a unui studiu dublu-orb, deoarece nu raportam un studiu clinic care necesită o interpretare subiectivă a eficacității. Proiectarea studiului nostru a inclus un tratament placebo corect. Metodele de îmbunătățire a extracției ADN evoluează în prezent prin ESCODD. Întrebarea importantă rămâne de ce, dacă 8-oxoguanina și 8-oxoadenina sunt generate doar ca artefacte, una crește și cealaltă scade la suplimentare, dar ambele revin la valorile inițiale/placebo după spălare.

Nu luăm în considerare referințele citate de Poulsen și colab. să fie relevant pentru studiul nostru pe voluntari umani (toți nu au fost fumători, deoarece fumatul este cunoscut pentru a reduce nivelurile de ascorbat plasmatic). O citare se referă la un studiu care măsoară 8-oxo-guanina în ficatul de cobai pe „manipulare dietetică” 2. Celălalt a folosit numai măsuri de 8-oxo-2'-deoxiguanozină în urină 3, care nu s-a dovedit încă că derivă direct din ADN. Cu toate acestea, nu poate fi exclusă relevanța sa ca marker al ratei medii totale de oxidare a ADN-ului. Folosind un anticorp monoclonal pentru a detecta 8-oxo-2'-deoxiguanozina, observăm o creștere a urinei după suplimentarea voluntarilor cu vitamina C, o constatare care corespunde pierderii de 8-oxoguanină din ADN (Cooke, M. S. și colab., manuscris în pregătire).

Concentrația medie de ascorbat plasmatic pentru 30 de voluntari sănătoși (14 bărbați și 16 femele, cu vârste cuprinse între 17 și 49 de ani) în studiul nostru a fost de 51,3 μM, crescând la 80,4 μM la suplimentarea cu vitamina C (Cooke, M.S. și colab., manuscris în pregătire). Levine și colab. susține că limfocitele se satură atunci când nivelurile de ascorbat plasmatic ajung la 50 μM. Nu considerăm argumentul lor convingător, deoarece se pare că se bazează pe un studiu de epuizare-repletare a șapte voluntari sănătoși, toți bărbații cu vârste cuprinse între 20 și 26 de ani (ref. 4). În plus, găsim variații individuale considerabile ale ascorbatului plasmatic cu valori de presupplementare de până la 8 μM, echivalente cu o concentrație intracelulară de ascorbat de aproximativ 1,5 mM (mai puțin de 50% din valoarea de saturație declarată) 4. Prin urmare, este rezonabil să concluzionăm că saturația plasmatică cu vitamina C nu apare cu cel puțin 50% din voluntarii noștri înainte de suplimentare.

În plus, observăm corelații pozitive și negative semnificative între concentrația plasmatică de ascorbat și nivelurile de 8-oxoadenină și respectiv 8-oxoguanină, ceea ce credem că sugerează că vitamina C influențează nivelurile ambilor markeri într-un mod divergent (Cooke, M. S. și colab., manuscris în pregătire). Acest efect diferențial, care nu poate fi explicat ca un artefact metodologic, este legat de posibila inducere a reparării specifice a 8-oxoguaninei. Există un precedent pentru reglarea redox a reparării acestei leziuni 5 .

În concluzie, rezultatele noastre arată o creștere definitivă a 8-oxoadeninei după suplimentarea cu vitamina C. Această leziune este de cel puțin zece ori mai puțin mutagenă decât 8-oxo-guanina 6 și, prin urmare, studiul nostru arată un efect de protecție profund profund al acestei vitamine.

Referințe

Podmore, I. D.și colab. Natură 392, 559 (1998).

Cadenas, S., Barja, G., Poulsen, H. E. & Loft, S. Carcinogeneză 18, 1833–1836 (1997).

Prieme, H., Loft, S., Nyssönen, K., Salonen, J. T. și Poulsen, H. E. A.m. J. Clin. Nutr. 65, 503–507 (1997).

Levine, M.și colab. Proc. Natl Acad. Știință. Statele Unite ale Americii 93, 3704-3709 (1996).

Lee, H.-S.și colab. Rad liber. Biol. Med. 24, 1193-1201 (1998).

Wood, M. L.și colab. Acizi nucleici Res. 20, 6023–6032 (1992).