Izolarea și caracterizarea EV-urilor vechi și tinere. (A) Potrivirea spectrului peptidic pentru o singură probă de ser uman seric izolată utilizând fie cromatografie de excludere a mărimii (SEC), fie 8% polietilen glicol (PEG). Primele două fracțiuni EV (F1/F2) din izolarea SEC arată un număr mai mare de markeri EV cunoscuți comparativ cu izolarea PEG. (B) Cuantificarea Zetaview a mărimii particulelor serice EV de la donatori tineri (25-40 ani) și cu vârste (75-90 ani) caucazieni, femei. (C) Profilul lipidomic al ceramidei EV-urilor izolate din serul femeilor tinere și mai în vârstă (n = 5 per grup de vârstă, bare de eroare = SD) Rețineți că EV-urile de la femeile în vârstă sunt foarte bogate în ceramidă C24: 1. (D) Parcele de cutii și mustăți ale valorilor ceramidei C24: 1 transformate la rang ale EV de la maimuțele rhesus. EV-urile din serul maimuțelor în vârstă (n = 8) arată o creștere semnificativă a ceramidei C24: 1 comparativ cu EV-urile serice izolate de maimuțele mai tinere (n = 8). Valorile au fost convertite în ranguri și ANOVA cu un singur factor a fost efectuat cu vârsta ca factor.

EV-urile serice marcate cu PKH67 sunt endocitate de celulele stem mezenchimale ale măduvei osoase umane. EV-urile etichetate cu PKH67 (coloane verzi, stânga și dreapta) sunt endocitate de celule vizualizate folosind microscopie confocală. Celulele sunt prezentate cu mărire mare (A, 40 ×) și inferioară (B, 20 ×). Imaginile celulelor tratate cu nemarcate (fără colorant PKH67) sunt prezentate ca martori (CON). Colorarea albastră reprezintă colorarea nucleară DAPI. Barele de scalare = 20 µm.

EV-urile serice marcate cu PKH67 sunt endocitate de celulele stem mezenchimale ale măduvei osoase umane. EV-urile etichetate cu PKH67 (coloane verzi, stânga și dreapta) sunt endocitate de celule vizualizate folosind microscopie confocală. Celulele sunt prezentate cu mărire mare (A, 40 ×) și inferioară (B, 20 ×). Imaginile celulelor tratate cu nemarcate (fără colorant PKH67) sunt prezentate ca martori (CON). Colorarea albastră reprezintă colorarea nucleară DAPI. Barele de scalare = 20 µm.

EV-urile încărcate cu ceramidă C24: 1 induc senescența celulară. (A) Profilurile lipidomice ale apei deionizate singure (DIW), DIW + EVs, DIW + C24: 1 ceramidă sau DIW + EVs încărcate cu C24: 1 ceramidă. Barele reprezintă un singur eșantion. (B) Colorarea pentru β-gal a indicat o senescență crescută la BMSC-urile tratate cu EV-uri încărcate cu ceramidă C24: 1. Barele de scalare = 40 µm.

Expresia sfingomielinazei neutre (nSMase2) este semnificativ crescută odată cu vârsta în ficatul șoarecelui. Rezultatele qPCR care arată creșterea semnificativă a expresiei nSMase2 cu vârsta în ficatul șoarecelui în raport cu expresia CerS2 (n = 4 pe grupă de vârstă, barele de eroare reprezintă SEM). nSMase2 produce ceramidă C24: 1 prin hidroliza sfingomielinei.

Abstract

lanț

Izolarea și caracterizarea EV-urilor vechi și tinere. (A) Potrivirea spectrului peptidic pentru o singură probă de ser uman seric izolată utilizând fie cromatografie de excludere a mărimii (SEC), fie 8% polietilen glicol (PEG). Primele două fracțiuni EV (F1/F2) din izolarea SEC arată un număr mai mare de markeri EV cunoscuți comparativ cu izolarea PEG. (B) Cuantificarea Zetaview a mărimii particulelor serice EV de la donatori tineri (25-40 ani) și cu vârste (75-90 ani) caucazieni, femei. (C) Profilul lipidomic al ceramidei EV izolat din serul femeilor tinere și mai în vârstă (n = 5 pe grupă de vârstă, bare de eroare = SD). Rețineți că EV-urile de la femeile în vârstă sunt foarte bogate în ceramidă C24: 1. (D) Parcele de cutii și mustăți ale valorilor ceramidei C24: 1 transformate la rang ale EV de la maimuțele rhesus. EV-urile din serul maimuțelor în vârstă (n = 8) arată o creștere semnificativă a ceramidei C24: 1 comparativ cu EV-urile serice izolate de maimuțele mai tinere (n = 8). Valorile au fost convertite în ranguri și ANOVA cu un singur factor a fost efectuat cu vârsta ca factor.

EV-urile serice marcate cu PKH67 sunt endocitate de celulele stem mezenchimale ale măduvei osoase umane. EV-urile etichetate cu PKH67 (coloane verzi, stânga și dreapta) sunt endocitate de celule vizualizate folosind microscopie confocală. Celulele sunt prezentate cu mărire mare (A, 40 ×) și inferioară (B, 20 ×). Imaginile celulelor tratate cu nemarcate (fără colorant PKH67) sunt prezentate ca martori (CON). Colorarea albastră reprezintă colorarea nucleară DAPI. Barele de scalare = 20 µm.

EV-urile serice marcate cu PKH67 sunt endocitate de celulele stem mezenchimale ale măduvei osoase umane. EV-urile marcate cu PKH67 (coloane verzi, stânga și dreapta) sunt endocitate de celule vizualizate folosind microscopie confocală. Celulele sunt prezentate cu mărire mare (A, 40 ×) și inferioară (B, 20 ×). Imaginile celulelor tratate cu nemarcate (fără colorant PKH67) sunt prezentate ca martori (CON). Colorarea albastră reprezintă colorarea nucleară DAPI. Barele de scalare = 20 µm.

EV-urile încărcate cu ceramidă C24: 1 induc senescența celulară. (A) Profilurile lipidomice ale apei deionizate singure (DIW), DIW + EVs, DIW + C24: 1 ceramidă sau DIW + EVs încărcate cu C24: 1 ceramidă. Barele reprezintă un singur eșantion. (B) Colorarea pentru β-gal a indicat o senescență crescută la BMSC tratate cu EV încărcate cu ceramidă C24: 1. Barele de scalare = 40 µm.

Expresia sfingomielinazei neutre (nSMase2) este semnificativ crescută odată cu vârsta în ficatul șoarecelui. Rezultatele qPCR care arată creșterea semnificativă a expresiei nSMase2 cu vârsta în ficatul șoarecelui în raport cu expresia CerS2 (n = 4 pe grupă de vârstă, barele de eroare reprezintă SEM). nSMase2 produce ceramidă C24: 1 prin hidroliza sfingomielinei.