De la Departamentul de Medicină Internă și Biocentru Oulu (M.-L.S., M.R., Y.A.K., S.H.), Universitatea din Oulu, Oulu, Finlanda; Institutul Național de Sănătate Publică (G.A., A.A.), Mannerheimintie, Helsinki, Finlanda; și Departamentul de Medicină (J.L.W.), Universitatea din California San Diego, La Jolla, California.

care

De la Departamentul de Medicină Internă și Biocentru Oulu (M.-L.S., M.R., Y.A.K., S.H.), Universitatea din Oulu, Oulu, Finlanda; Institutul Național de Sănătate Publică (G.A., A.A.), Mannerheimintie, Helsinki, Finlanda; și Departamentul de Medicină (J.L.W.), Universitatea din California San Diego, La Jolla, California.

De la Departamentul de Medicină Internă și Biocentru Oulu (M.-L.S., M.R., Y.A.K., S.H.), Universitatea din Oulu, Oulu, Finlanda; Institutul Național de Sănătate Publică (G.A., A.A.), Mannerheimintie, Helsinki, Finlanda; și Departamentul de Medicină (J.L.W.), Universitatea din California San Diego, La Jolla, California.

De la Departamentul de Medicină Internă și Biocentru Oulu (M.-L.S., M.R., Y.A.K., S.H.), Universitatea din Oulu, Oulu, Finlanda; Institutul Național de Sănătate Publică (G.A., A.A.), Mannerheimintie, Helsinki, Finlanda; și Departamentul de Medicină (J.L.W.), Universitatea din California San Diego, La Jolla, California.

De la Departamentul de Medicină Internă și Biocentru Oulu (M.-L.S., M.R., Y.A.K., S.H.), Universitatea din Oulu, Oulu, Finlanda; Institutul Național de Sănătate Publică (G.A., A.A.), Mannerheimintie, Helsinki, Finlanda; și Departamentul de Medicină (J.L.W.), Universitatea din California San Diego, La Jolla, California.

De la Departamentul de Medicină Internă și Biocentru Oulu (M.-L.S., M.R., Y.A.K., S.H.), Universitatea din Oulu, Oulu, Finlanda; Institutul Național de Sănătate Publică (G.A., A.A.), Mannerheimintie, Helsinki, Finlanda; și Departamentul de Medicină (J.L.W.), Universitatea din California San Diego, La Jolla, California.

De la Departamentul de Medicină Internă și Biocentru Oulu (M.-L.S., M.R., Y.A.K., S.H.), Universitatea din Oulu, Oulu, Finlanda; Institutul Național de Sănătate Publică (G.A., A.A.), Mannerheimintie, Helsinki, Finlanda; și Departamentul de Medicină (J.L.W.), Universitatea din California San Diego, La Jolla, California.

Vizualizați cea mai recentă versiune a acestui articol. Versiunile anterioare:

Abstract

Obiectiv- Pentru a evalua efectele modificărilor dietetice asupra lipoproteinelor oxidate cu densitate mică (LDL).

A existat un mare interes pentru agenții farmacologici și antioxidanți care scad oxidarea LDL in vitro 7-9 și scad ateroscleroza la modelele animale in vivo. 10 Datele la om, în primul rând cu vitamina E, au fost însă dezamăgitoare, deși motivele pentru aceasta au fost discutate recent. 11 Interesul sa concentrat, de asemenea, asupra agenților non-farmacologici și a antioxidanților, cum ar fi alimentele naturale, și capacitatea lor de a afecta oxidarea LDL. 12,13 Datele privind efectele dietelor întregi cu un aport ridicat de fructe și legume asupra oxidării LDL sunt limitate și contradictorii. 14-16

În studiul de față, am investigat modul în care modificările consumului alimentar de grăsimi, legume, fructe de pădure și fructe au afectat nivelurile plasmatice de antioxidanți și OxLDL. Am efectuat o intervenție dietetică încrucișată cu două diete, ambele cu un conținut scăzut de grăsimi dietetice, dar una cu un conținut scăzut de legume, iar cealaltă cu un conținut ridicat de legume, fructe de pădure și fructe, pentru a afla dacă un aport ridicat de antioxidanți naturali influențează nivelul plasmatic al OxLDL.

Metode

Subiecte

Am intervievat și examinat 86 de femei, dintre care 37 de voluntari sănătoși au fost selectați și au finalizat studiul. Criteriile de includere au fost: (1) indicele de masă corporală (IMC) 20 până la 29 kg/m 2; (2) glicemie de la 3,7 la 6,2 mmol/L; (3) colesterol plasmatic

figura 1. Proiectarea studiului.

Dietele

Lipide și lipoproteine ​​plasmatice (a)

Concentrațiile plasmatice totale de triacilglicerol și colesterol au fost determinate enzimatic folosind un analizor de chimie clinică specifică (truse de Boehringer Mannheim, GmbH, Germania). Precipitarea plasmatică cu heparină - clorură de mangan a fost utilizată pentru a măsura colesterolul lipoproteinelor cu densitate mare (HDL). Concentrația de colesterol LDL 18 a fost calculată prin formula Friedewald. 19 Concentrațiile plasmatice de Lp (a) au fost determinate cu o metodă comercială imunosorbentă legată de enzime (Biopool Ltd) conform instrucțiunilor producătorului.

Autoanticorpi la LDL oxidat

Nivelurile de autoanticorpi IgM și IgG care se leagă de cupru OxLDL (CuOx-LDL) au fost determinate în probe de plasmă prin ELISA pe bază de chemiluminescență. 20 CuOx-LDL a fost generat așa cum este descris. S-au adăugat 3 antigeni la 10 μg/ml în PBS-EDTA (PBS cu 0,27 mmol/L EDTA, pH 7,5) și s-au incubat peste noapte la 4 ° C. Probele de plasmă au fost diluate 1: 1000 pentru IgM și 1: 500 pentru IgG și cantitatea de imunoglobulină legată a fost detectată cu IgM de capră anti-IgM (Sigma) marcată cu fosfatază alcalină sau IgG de capră anti-umană (Sigma) folosind Lumi-Phos 530 (Lumigen) ca substrat. Luminiscența a fost determinată cu un luminometru Victor 2 (Wallac, PerkinElmer).

CRP sensibil

Pentru măsurarea CRP sensibilă s-au folosit doi anticorpi monoclonali diferiți anti-CRP anti-om de șoarece (HyTest Ltd) și CRP uman purificat (HyTest Ltd). Pe scurt, anticorpul CRP anti-uman a fost acoperit la 2 μg/ml în tampon PBS peste noapte la 4 ° C. Probele de plasmă au fost diluate 1: 2000 și cantitatea de legat de CRP a fost detectată cu anticorp CRP anti-uman biotinilat. O probă de control comercial CRP (Roche) a fost inclusă în fiecare test.

LDL oxidat

O imunoanaliză chimiluminiscentă sandwich folosind un anticorp monoclonal murin bine caracterizat EO6, care se leagă în mod specific de fosfolipide oxidate, a fost utilizată pentru a măsura LDL oxidat în plasmă. 20.21 În primul rând, un anticorp monoclonal anti-apolipoproteină B-100, MB47, a fost placat la 5 μg/ml peste noapte la 4 ° C. Probele de plasmă au fost diluate până la 1:50 și cantitatea de epitopi fosfolipidici oxidați a fost măsurată cu anticorpul biotinilat EO6. În godeuri paralele, cantitatea de LDL legată a fost detectată cu anticorp anti-apoB biotinilat policlonal. Rezultatele sunt exprimate ca cantitatea de EO6 legată împărțită la cantitatea de anti-apoB legată în godeuri, rezultând cantitatea relativă de fosfolipidă oxidată detectată de EO6/apoB-100 (OxLDL-EO6). Această măsurare normalizează conținutul de fosfolipide oxidate per particulă apoB-100.

Analiza tocoferolilor din plasmă, a carotenoizilor și a vitaminei C.

Concentrațiile plasmatice de tocoferoli 22 și carotenoizi 23 au fost analizate prin HPLC. Acidul ascorbic total a fost determinat cu o metodă fluorometrică automată folosind ortofenilendiamină. 24 Pentru această măsurare, s-au adăugat 4,5 mL de acid metafosforic 5% la 0,5 mL de plasmă în decurs de 1 oră după punerea venii și s-au depozitat la -70 ° C.

Analize dietetice

Aporturile dietetice de bază au fost calculate din înregistrări alimentare de 4 zile utilizând software-ul Nutrica (Instituția de asigurări sociale, Helsinki, Finlanda) pe baza bazei de date finlandeze cu nutrienți. Conținutul de nutrienți al dietelor de intervenție a fost analizat la Centrul de Cercetări Agricole din Finlanda. Porțiunile alimentare din ambele diete au fost colectate zilnic în timpul intervenției la un nivel de energie (7,5 MJ) și stocate la -20 ° C până la analiză. Înainte de analiză, probele au fost decongelate și combinate pentru fiecare perioadă de dietă. Analiza a inclus energie totală, grăsimi totale, carbohidrați, fibre, acizi grași, 25 colesterol dietetic, potasiu, sodiu, calciu, fier, α-caroten, 26 β-caroten, 26 acid ascorbic (vitamina C), 27 și α-tocoferol . 28

Analize statistice

Testul Saphiro-Wilk a fost folosit pentru a testa asimetria distribuțiilor. Carotenoidele din plasmă, trigliceridele, OxLDL-EO6, CRP sensibil și Lp (a) nu au fost distribuite în mod normal; prin urmare, au fost utilizate teste non-parametrice. Diferențele au fost testate mai întâi prin testul Friedman pentru măsurători repetate, iar ulterior prin testul de rang semnat de Wilcoxon. Variabilele sunt exprimate ca mediane cu cele mai mici și mai mari quartile. Colesterolul total, colesterolul LDL, colesterolul HDL, vitamina C și vitamina E, care au fost distribuite în mod normal, au fost testate de Student t test și sunt exprimate ca medie ± SD. Corelațiile au fost determinate utilizând coeficienții de corelație Spearman și Pearson. Toate diferențele au fost considerate semnificative la un nivel de 5%. Programul de calculator SPSS (9.0; SPSS Inc) a fost utilizat în analizele statistice.

Rezultate

Conținutul nutrienților dietelor

Diferențele majore dintre dieta de bază și dietele studiate s-au referit la cantitatea și calitatea grăsimilor alimentare și la cantitatea de legume, fructe de pădure și fructe consumate. Ambele diete de studiu au fost mai mici în grăsimea totală decât dieta inițială (Tabel). În plus, au existat modificări ușoare în calitatea grăsimilor dietetice între perioadele de dietă. Cantitățile de acizi grași saturați (SAFA) și acizi grași mononesaturați au fost mai mici în ambele diete de studiu comparativ cu dietele de bază ale subiecților. Cantitatea de acizi grași polinesaturați (PUFA) a crescut, în special ca răspuns la dieta cu conținut scăzut de grăsimi, cu conținut ridicat de legume (Tabel).

Consumul mediu zilnic de nutrienți al femeilor (n = 37) la perioada de referință și conținutul mediu de nutrienți din dietele studiate

Indicele de masa corporala

IMC mediu al subiecților a fost de 23,7 ± 2,2 kg/m2 la momentul inițial. La sfârșitul dietei cu conținut scăzut de grăsimi, cu conținut scăzut de legume și dietă cu conținut scăzut de grăsimi, cu conținut ridicat de legume, IMC mediu al subiecților a fost de 23,3 ± 3,2 kg/m 2 și respectiv 23,3 ± 3,3 kg/m 2.

Lipidele plasmatice

Colesterolul total și trigliceridele plasmatice și nivelurile de colesterol HDL au scăzut ușor ca răspuns la dieta cu conținut scăzut de grăsimi, cu conținut ridicat de legume (Figura 2). Interesant este faptul că dieta cu conținut scăzut de grăsimi, cu conținut scăzut de legume nu a afectat nivelul colesterolului total, dar a scăzut nivelul total al trigliceridelor plasmatice și al colesterolului HDL.

Figura 2. Concentrațiile plasmatice ale colesterolului total, HDL și LDL și trigliceridelor tuturor subiecților studiați (n = 37) în timpul dietelor studiate. Tot-Chol indică colesterolul total; TG, trigliceride; HDL-Chol, colesterol HDL; LDL-Chol, LDL colesterol. *P

Niveluri antioxidante plasmatice

Nivelurile plasmatice ale mai multor antioxidanți au crescut ca răspuns la dieta cu conținut scăzut de grăsimi, cu conținut ridicat de legume (Figura 3). Nivelurile plasmatice de α-caroten, β-caroten, β-criptoxantină și luteină-zeaxantină au crescut> de 2 ori în timpul dietei cu conținut scăzut de grăsimi, cu conținut ridicat de legume, comparativ cu dieta inițială (Figura 3). Cu toate acestea, dieta cu conținut scăzut de grăsimi, cu conținut scăzut de legume, conținea cantități destul de similare de antioxidanți în comparație cu dieta zilnică normală a subiecților; prin urmare, s-au produs mai puține modificări ale nivelurilor de antioxidanți plasmatici între dieta inițială și dieta cu conținut scăzut de grăsimi și slab vegetal.

Figura 3. Concentrațiile plasmatice de carotenoizi, vitamina C și alfa-tocoferol la toți subiecții studiați (n = 37) în timpul dietelor de studiu. Valorile sunt medii ± SD. *P

La momentul inițial, concentrația plasmatică de luteină - zeaxantină a fost corelată cu OxLDL plasmatic (r= 0,44, P 20,21 Am folosit anticorpi monoclonali EO6 care detectează epitopii fosfolipidici oxidați pentru a evalua dacă dietele studiului ar influența cantitatea de epitopi oxidați în particulele apoB-100 ale subiecților. În comparație cu nivelurile inițiale, OxLDL-EO6 plasmatic median a crescut cu 27% (Q1, Q4: -14, 67)P

Figura 4. Modificări mediane relative ale concentrațiilor plasmatice ale LDL oxidat (stânga) și lipoproteinei (a) (dreapta) la toți subiecții studiați (n = 37) de la linia de bază la dieta cu conținut scăzut de grăsimi, cu conținut scăzut de legume și de la linia de bază la scăzută în grăsimi, dietă bogată în legume.

O altă linie de studii care caută factori care influențează susceptibilitatea oxidativă a LDL au fost cei care analizează grăsimile din dietă. Se știe că dietele bogate în SAFA cresc nivelul total de colesterol plasmatic, în timp ce dietele bogate în PUFA au un efect favorabil în cea mai mare parte asupra profilurilor lipidice plasmatice: o scădere a nivelului total și LDL de colesterol și, de asemenea, o scădere a nivelului de colesterol HDL. 34 De exemplu, atunci când acidul linoleic înlocuiește SAFA în dietă, scade nivelul colesterolului seric. 35 În ciuda acestui efect favorabil al grăsimilor nesaturate asupra profilelor lipidice, există îngrijorarea că astfel de diete ar putea crește susceptibilitatea LDL la oxidare, negând astfel unele dintre efectele lor cardioprotectoare. Studiile anterioare arată că dietele bogate în acid linoleic duc la particule LDL îmbogățite cu acid linoleic, despre care se crede că sunt mai susceptibile la peroxidarea lipidelor și, de asemenea, mai aterogene. 36 În studiul nostru, când subiecții au consumat dietele studiului, aportul total de grăsimi a fost redus, iar SAFA a fost parțial înlocuit cu PUFA în comparație cu dieta inițială. Cantitatea de PUFA a fost în mod special crescută ca răspuns la dieta cu conținut scăzut de grăsimi, cu conținut ridicat de legume.

Rămâne întrebarea de ce nivelurile de Lp (a) au crescut ca răspuns la modificările dietetice. Nivelurile bazale ale Lp (a) sunt determinate în primul rând genetic, dar unele date sugerează că Lp (a) poate acționa ca reactant în fază acută în anumite situații. 40 Într-un studiu anterior, sa constatat că o dietă bogată în SAFA produce o concentrație de Lp (a) plasmatică cu 10% mai mică decât dietele bogate în acid oleic sau acizi grași trans. 41 Această observație este în concordanță cu studiul nostru prin aceea că ambele diete au condus la scăderea SAFA și, în consecință, la creșterea Lp (a).

În concluzie, am constatat că o dietă considerată în mod tradițional anti-aterogenă (cu conținut scăzut de grăsimi saturate și bogată în grăsimi polinesaturate și antioxidanți naturali) a crescut nivelurile plasmatice de LDL și Lp (a) oxidate circulante Întrebarea dacă modificările observate în prezentul studiu sunt, de fapt, pro-aterogene sau anti-aterogene rămâne de rezolvat.