Student în domeniul pescuitului, filiala Qaemshahr, Universitatea Islamică Azad, Qaemshahr, Iran
Departamentul pentru pescuit, filiala Qaemshahr, Universitatea Islamică Azad, Qaemshahr, Iran
Corespondenţă
Somayeh Bahram, Departamentul pentru pescuit, filiala Qaemshahr, Universitatea Islamică Azad, Qaemshahr, Iran. Tel: + 98‐911‐2226239; Fax: + 98‐21‐44867141;
Departamentul pentru pescuit, filiala Qaemshahr, Universitatea Islamică Azad, Qaemshahr, Iran
Student în domeniul pescuitului, filiala Qaemshahr, Universitatea Islamică Azad, Qaemshahr, Iran
Departamentul pentru pescuit, filiala Qaemshahr, Universitatea Islamică Azad, Qaemshahr, Iran
Corespondenţă
Somayeh Bahram, Departamentul pentru pescuit, filiala Qaemshahr, Universitatea Islamică Azad, Qaemshahr, Iran. Tel: + 98‐911‐2226239; Fax: + 98‐21‐44867141;
Departamentul pentru pescuit, filiala Qaemshahr, Universitatea Islamică Azad, Qaemshahr, Iran
Abstract
Peptona de pește a fost produsă utilizând hidroliza enzimatică a subproduselor de filetare a crapului de argint din alcalază și tripsină. De asemenea, eficiența hidrolizaților ca sursă de azot în Staphylococcus aureus mediu a fost comparat cu TSB comercial. Rezultatele au indicat faptul că hidrolizatul de proteine din alcalază și tripsină avea un conținut ridicat de proteine (92,92%, respectiv 91,53) și un grad de hidroliză (4,94%, respectiv 4,6%). producerea peptonei de pește ca sursă de azot pentru S. aureus mediu. Cu toate acestea, tipul enzimei proteolitice utilizate a afectat considerabil performanța peptonei rezultate, în ciuda aceluiași DH. Peptona de pește produsă de alcalese a avut rezultate semnificative (P
Introducere
Prezenta lucrare de hidroliză enzimatică a subproduselor de crap de argint se adresează în primul rând aplicării industriale a procesului. Acest lucru prezintă constrângeri, în special în ceea ce privește eficiența generală a costurilor procesului de extindere. Cost redus și simplitate în operare, prin reducerea costului materialului, a consumului de energie, atribute importante care conturează direcția acestei lucrări (Aristotelis et al. 2011).
Astfel, prezenta lucrare a avut ca scop dezvoltarea peptonei de pește din subprodusele de filetare a crapului de argint folosind hidroliza enzimatică cu diferite enzime și evaluarea adecvării acestora ca mediu de creștere microbiană pentru S. aureus.
Material si metode
Prepararea peptonei de pește
Crapul de argint proaspăt a fost cumpărat de la o fermă locală de acvacultură. În 1 oră, au fost transportați la laborator în cutii de polistiren spumant sigilate care conțin gheață fulgi. Apoi, peștele a fost eviscerat, jupuit, filetat, iar produsele secundare au fost adunate și spălate (cu apă de la robinet) cu mâna. Apoi, subprodusele de filetare (garnituri și tăieturi) au fost tocate de două ori la viteză medie folosind un mixer industrial (dimensiunea lamei de 5 mm; Yaltajhiz, Teheran, Iran). Produsele secundare tocate au fost congelate la -20 ° C pentru analiză ulterioară. Compoziția apropiată a probelor tocate a fost determinată în termen de 2 zile de la congelarea subproduselor tocate.
Pentru hidrolizarea probelor, subprodusele amestecate au fost decongelate peste noapte la 10 ° C și amestecate cu apă distilată (2: 1w/v). Apoi, amestecul a fost încălzit la 85 ° C într-o baie de apă (W614-B; Fater Rizpardaz, Teheran, Iran) timp de 20 de minute pentru a inactiva enzimele endogene. Alcalase 2.4L și tripsină (Sigma Aldrich, Darmstadt, Germania) au fost adăugate separat la substrat la 1,5% (v/w) și respectiv 1,5% (w/w). Apoi, condițiile optime pentru hidroliză au fost standardizate pentru fiecare enzimă care a inclus pH (8,5 pentru alcalază și 7 pentru tripsină), temperatură (55 ° C pentru alcalază și 37 ° C pentru tripsină). Toate reacțiile au fost efectuate în triplicat în flacoane Erlenmeyer de sticlă de 250 ml într-un incubator de agitare (GTSL20; Jaltajhiz) cu agitare constantă (la 150 rpm) timp de 2 și 4 ore despre alcalază și respectiv tripsină,.
După trecerea timpului de reacție, enzimele au fost dezactivate termic prin încălzirea la 95 ° C într-o baie de apă timp de 20 de minute pentru a termina reacțiile. Apoi, amestecurile hidrolizate au fost centrifugate (6700g, 20 min) folosind tuburi de 1,5 mL la 10 ° C într-o centrifugă (D - 7200; Hettich, Tuttlingen, Germania). În cele din urmă, supernatanții au fost colectați pentru a obține peptonii solubili pentru alte experimente (Safari și colab. 2011), apoi depozitați la -20 ° C, până când au fost liofilizați.
Tulpina și întreținerea bacteriană
S. aureus a fost utilizat în prezentul studiu. Bacteria a fost achiziționată de la Organizația de cercetare iraniană pentru știință și tehnologie (IROST), Iran. Tulpina PTTC a fost transferată pe bulion de soia triptic (Merck, Darmstadt, Germania) și a fost incubată la 30 ° C timp de 12-18 ore și apoi aceste culturi pregătite corespunzător au fost utilizate pentru alte experimente (Vazquez și colab. 2004).
Medii și cultură de creștere bacteriene
Compozițiile mediului bacterian au fost preparate în conformitate cu Safari și colab. (2012) și sunt prezentate în Tabelul 1. Mediul TSB a fost utilizat ca martor (mediu comercial), iar compușii proteinici din mediul TSB au fost înlocuiți cu peptoni din subprodusele de tundere hidrolizate pentru alte tratamente. Apoi, pH-ul inițial al mediului obținut a fost ajustat la 7,3 folosind NaOH 0,2N și soluțiile au fost sterilizate la 121 ° C timp de 15 min la o presiune de 1,1 atm. Bacteria a fost cultivată în baloane Erlenmeyer de 250 ml conținând 150 ml de medii diferite în triplicat, la 30 ° C cu o viteză de agitare de 150 rpm într-un incubator. Mediul fusese inoculat cu S. aureus la 3% (v/v) din culturi în vârstă de 18 h pe mediu TSB, ajustat la un ODλ = 600) de 0,50 folosind un spectrofotometru vizibil UV (Eppendorf, Hamburg, Germania).
| Clorura de sodiu | 5.00 | 5.00 |
| Peptonă din cazeină | - | Ora 15.00 |
| Peptona din soia | - | 5.00 |
| Peptona de crap argintiu (Biuret) | 20.00 | - |
Densitatea bacteriană în diferite medii a fost determinată prin măsurarea turbidității la intervale de 3 h la λ = 600 nm folosind spectrofotometrul. Toate mediile de cultură au fost ușor agitate timp de 5 sec înainte de eșantionare pentru a determina DO la 600 nm.
Analiza chimica
analize statistice
Diferențele dintre toate măsurătorile au fost evaluate prin analiza unică a varianței (ANOVA). Testele cu intervale multiple ale lui Duncan au fost utilizate pentru a compara mijloacele de identificare a grupurilor care au fost semnificativ diferite de alte grupuri. Semnificația a fost definită la P
Rezultate si discutii
Compoziție chimică
Conținutul total de proteine și grăsimi din subprodusele de filetare a crapului de argint a fost de 17,89 ± 0,20 și respectiv 2,53 ± 0,7. Deși compoziția produselor și subproduselor din pește depinde de nutriție, dimensiunea peștilor, sex, vârstă, mediu și sezon, rezultatele obținute coincid cu altele (Abdollahi et al. 2014). Cu toate acestea, compoziția corpului se schimbă foarte mult de la o specie la alta și de la un individ la altul. Astfel, variații notabile pot fi observate în componentele mușchiului peștilor (Pacheco - Aguilar și colab. 2000).
| Alcalase | 4,94 ± 0,15a | 3,50 ± 0,10a | 37,01 ± 0,20a | 92,92 ± 0,18a |
| Tripsină | 4,60 ± 0,38a | 3,7 ± 0,21a | 26,49 ± 0,40b | 91,53 ± 0,19a |
- Valorile din coloană cu litere diferite sunt semnificativ diferite la α = 0,05
Proteina solubilă a peptonei obținută de alcalază a fost mai mare decât peptona produsă de tripsină. Rezultatele au fost de acord cu rezultatele raportate de alții despre eficiența alcalazei în hidroliza subproduselor de pește (Ovissipour și colab. 2009). Cu toate acestea, Reissbrodt și colab. (1995) au menționat că pentru a evalua eficiența peptonei în mediile de creștere, datele fizice și chimice singure nu sunt suficiente pentru a înțelege efectul general asupra creșterii microbiene. În ceea ce privește faptul că peptonele din mediul microbian furnizează principalele surse de azot și carbon, o sursă de peptonă de succes este mai bine evaluată prin creșterea organismului de interes (Vieira și colab. 2005).
Curba de creștere microbiană
Pe de altă parte, în prezentul studiu, S. aureus a prezentat o rată de creștere mai mică cu mediul peptonic de pește produs de tripsină în comparație cu TSB. Poate fi legat de diferențele dintre lungimile lanțului peptidic din peptonele produse de diferite enzime.
Concluzii
Prezentul studiu relevă faptul că subprodusul de filetare a crapului de argint poate fi o sursă eficientă pentru producerea peptonei de pește ca sursă de azot pentru S. aureus mediu. Cu toate acestea, eficiența peptonilor ca creștere microbiană depinde de tipul enzimei utilizate pentru hidroliză. Peptona de pește produsă de alcalese a avut un rezultat mai bun decât TSB comercial ca mediu pentru bacterii, în timp ce performanța peptonei tripsinei nu a fost la fel de bună ca mediul comercial.
- Caracteristici pentru identificarea externă a crapului negru din Jurnalul de pește de iarbă și
- Poluarea apei din Chicago ar putea păstra crapul argintiu invaziv din Marile Lacuri - ScienceDaily
- Ficatul de pește poate fi o sursă de acizi grași esențiali Studiu
- Fapte nutriționale ale produselor lactate și beneficii pentru sănătate
- Daisy’s Steamed Fish - The Washington Post