Date asociate

Abstract

Obezitatea este o problemă gravă de sănătate publică în țările dezvoltate și se știe că crește riscul apariției mai multor boli precum diabetul, evenimentele cardiovasculare și arterioscleroza. Aceste fenomene sunt strâns corelate cu deteriorarea oxidativă. Recent, mai multe linii de dovezi au demonstrat că bolile neurodegenerative, cum ar fi Alzheimer și Parkinson, sunt, de asemenea, legate de deteriorarea oxidativă. Pentru a clarifica relația dintre obezitate și vătămarea oxidativă a creierului, am investigat rețelele antioxidante ale creierului la șoarecii tratați cu diete bogate în grăsimi (HF) în prezența sau absența tocotrienolilor (T3) și a tărâțelor. Tratamentul concomitent cu T3 și tărâțe a inhibat semnificativ creșterea în greutate corporală la șoarecii tratați cu dietă HF. Nivelurile serice și cortexului T3, precum și activitățile enzimei antioxidante ale creierului și expresiile proteinelor nu au diferit între grupuri, cu excepția expresiei proteinei SOD din cerebel. Expresiile de proteine ​​p-mTOR și p-Akt ale creierului, care sunt legate de autofagie, nu au diferit între grupuri. Aceste rezultate indică faptul că tratamentul cu T3 timp de opt săptămâni a arătat un efect anti-obezitate la șoarecii tratați cu dietă HF. Cu toate acestea, modificări semnificative ale nivelurilor T3 nu au fost observate la nivelul serului și creierului șoarecilor.

efectele

1. Introducere

2. Materiale și metode

2.1. Animale și diete

2.2. Selecția probelor de grâu din cereale integrale

Pentru a compara conținutul T3, cinci rase diferite de amestec de cereale integrale disponibile în comerț, inclusiv făină de tort (Kitahonami), făină de grâu semidure (Usuyume, Sumurera și Haruyutaka), făină de pâine (Haruyokoi) și tărâțe (constând din epidermă și germeni) au fost cumpărate de pe o piață.

2.3. Măsurarea conținutului de vitamina E

Concentrațiile VE (α-, β-, γ-, δ-tocoferol (Toc), α-, β-, γ-, δ-T3) au fost măsurate folosind cromatografie lichidă de înaltă performanță cu detecție electrochimică (HPLC-ECD) așa cum a fost descris anterior cu unele modificări [23]. Regiunile cerebrale (cortexul cerebral, cerebelul și hipocampul), serul, ficatul, diferite probe de grâu și tărâțele zdrobite au fost amestecate individual cu soluție de NaCI 1% (0,5 ml), soluție de pirogalol 6% (2 ml) și soluție KOH 35% 2 mL) și 2,2,5,7,8-pentametil-6-cromanol (PMC) a fost utilizat ca standard intern. Amestecul a fost saponificat la 100 ° C timp de 45 min. După răcire, s-au adăugat soluție de NaCI 1% și un amestec de hexan-acetat de etil (9: 1, în volum). După amestecare, extractele au fost evaporate sub azot gazos și s-a adăugat metanol (0,15 ml) la reziduu. Soluțiile au fost analizate prin HPLC (NanoSpace SI-2; Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Japonia) utilizând un Develosil C30-UG-3 (2,0 × 250 mm; Nomura Chemical Co., Ltd., Aichi, Japonia) HPLC coloană. Faza mobilă a constat dintr-un amestec de metanol de calitate HPLC și H2O (97: 3, în volum), incluzând 0,7% NaClO4 · H2O. Vârfurile fiecărei izoforme VE au fost analizate utilizând software-ul SMC-21 (Shiseido Co., Ltd.).

2.4. Conținut total de colesterol seric

Conținutul total de colesterol seric a fost măsurat folosind un kit comercial (# 437-17501; E-test de colesterol Wako), conform protocolului producătorului. Colesterolul este oxidat de colesterol oxidaza pentru a produce peroxid de hidrogen. N-etil-N- (2-hidroxi-3-sulfopropil) -3,5-dimetoxianilină, sare de sodiu, H2O2 și 4-aminoantipirină suferă condensare oxidativă în prezența peroxidazei, ceea ce duce la producerea unui colorant albastru care poate fi măsurat prin monitorizarea absorbanței la 600 nm folosind un spectrofotometru.

2.5. Măsurarea activităților enzimei antioxidante

Cuantificarea activității superoxid dismutazei (SOD) a fost efectuată folosind un kit de determinare SOD (# S311; Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japonia) conform protocolului producătorului. Această metodă se bazează pe reacția xantin oxidazei, care induce producția de superoxid. Sărurile de tetrazoliu solubile în apă (WST: 5- [2,4-Bis (sodiooxisulfonil) fenil] -2- (4-nitrofenil) -3- (4-iodofenil) -2H-tetrazol-3-il) -1 reacționează cu superoxid și este redus la formazan WST-1. Cu toate acestea, în prezența SOD, superoxidul reacționează cu SOD și produce peroxid de hidrogen, cu o scădere consecventă a generației de formazan WST-1. În această analiză, activitatea SOD a fost exprimată ca raportul formazanului WST-1 scăzut și a fost determinată la o absorbanță de 450 nm folosind un cititor de microplăci (# 51119300. Multiskan GO; Thermo Fisher Scientific Inc., Hercules, CA, SUA).

Activitatea glutation peroxidazei (GPx) a fost determinată prin monitorizarea nivelurilor de β-nicotinamidă adenină dinucleotid fosfat (NADPH) utilizând un kit comercial (set de testare a activității celulare glutation peroxidază; Sigma-Aldrich), conform protocolului producătorului. Probele au fost amestecate cu glutation redus (GSH), glutation reductază (GR) și NADPH și apoi incubate rapid cu peroxid de hidrogen terț-butilic. Peroxidul de hidrogen este redus cu GPx, în timp ce GSH este oxidat la glutation (GSSG). GR reduce GSSG la GSH și oxidează concomitent NADPH la NADP +. Reducerile ulterioare ale nivelurilor de NADPH au fost măsurate la 340 nm absorbanță la fiecare 10 s timp de 1 min. Activitățile SOD și GPx au fost exprimate pe mg de proteină în probe. Activitatea catalazei (CAT) poate fi determinată prin monitorizarea nivelurilor de peroxid de hidrogen (H2O2). Omogenatele de probă au fost amestecate cu tampon K-fosfat 5 mM, care a fost apoi incubat rapid cu apă oxigenată. Peroxidul de hidrogen este redus cu CAT. Nivelurile de H2O2 au fost măsurate prin monitorizarea absorbanței la 240 nm.

2.6. Western Blotting

2.7. Analiza peroxidării lipidelor

Pentru a analiza oxidarea lipidelor, am măsurat substanțele reactive ale acidului tiobarbituric (TBARS). Peroxizii lipidici au fost măsurați folosind metoda lui Yagi, așa cum a fost descris anterior cu unele modificări [24]. O alicotă (50 μL) din omogenizații probei a fost amestecată cu 100 μL EDTA 5 mM, 2 ml acid fosforic 1% și 1 ml acid tiobarbituric 0,7%. Amestecul a fost încălzit la 100 ° C într-un bloc de încălzire timp de 45 de minute. După răcire pe gheață, proba a fost incubată cu 2 ml butanol timp de 3 minute. După centrifugare la 3000 rpm timp de 10 min la 4 ° C, stratul superior a fost izolat și absorbanța la 535 nm a fost măsurată folosind un spectrofotometru (UV-1200; Shimadzu Corp., Kyoto, Japonia). Acest marker al stresului oxidativ a fost exprimat pe mg de proteină în probe.

2.8. Analize statistice

Datele au fost trasate ca medii ± SE și au fost analizate folosind testul de respingere Smirnoff-Grubbs. După aceea, datele au fost analizate folosind metoda lui Tukey-Kramer sau o analiză bidiară a varianței; * p Figura 1 A, izoformele VE standard mixte-8 au fost complet separate prin HPLC-ECD. Apoi, am investigat capacitatea de a detecta T3 în probele de țesut de șoarece și am confirmat prezența α-Toc și α- și γ-T3 în creierul normal al șoarecelui (Figura 1 B). Cu toate acestea, nivelurile maxime ale α- și γ-T3 au fost foarte scăzute comparativ cu α-Toc.