1 Departamentul de Chirurgie Plastică, Spitalul Zhujiang, Universitatea de Medicină din Sud, 253 GongYe Middle Avenue, Guangzhou, Guangdong 510280, China

dimetilaminoetanolului

2 Departamentul de Chirurgie Plastică și Estetică, Spitalul Afiliat al Școlii Medicale, Universitatea Qingdao, Qingdao, Shandong 266003, China

3 Departamentul de dermatologie, spitalul de chirurgie estetică Huang-Si, Beijing 100120, China

4 Center for Advanced Orthopedic Studies, Beth Israel Deaconess Medical Center, Harvard Medical School, Boston, MA 02215, SUA

5 Institutul de Chirurgie Plastică și Reconstructivă, Universitatea de Medicină Weifang, Shandong 261042, China

Abstract

Un vis de durată al ființelor umane este inversarea sau amânarea îmbătrânirii. În acest studiu, dimetilaminoetanolul (DMAE) și compusul de aminoacizi (AA) din mezoterapie au fost investigate pentru efectele lor potențiale anti-îmbătrânire asupra pielii îmbătrânite induse de D-galactoză. La 18 zile după inducția D-gal, fiecare șobolan a fost tratat cu microinjecție intradermică de soluție salină, AA, 0,1% DMAE, 0,2% DMAE, 0,1% DMAE + AA sau respectiv 0,2% DMAE + AA. La 42 de zile după tratament, rana cutanată a fost recoltată și testată. Măsurarea grosimii epidermice și cutanate în grupuri 0,1% DMAE + AA și 0,2% DMAE + AA a apărut semnificativ mai groasă decât șobolanii martori de îmbătrânire. Nu s-au găsit diferențe în ceea ce privește conținutul de apă tisulară între grupuri. Hidroxiprolina în 0,1% DMAE + AA, 0,2% DMAE + AA și grupurile de control simulate a fost mult mai mare decât toate celelalte grupuri. Expresia de colagen de tip I, tip III și MMP-1 a fost puternic reglată în sus atât în ​​grupurile 0,1% DMAE + AA, cât și în 0,2% DMAE + AA, comparativ cu controlul îmbătrânirii. În schimb, nivelurile de exprimare TIMP-1 ale diferitelor grupuri de îmbătrânire au fost reduse semnificativ în comparație cu controlul fals. Coinjecția DMAE și AA în țesutul țintă a avut efecte anti-îmbătrânire marcate asupra modelului de îmbătrânire a pielii indus de D-galactoză.

1. Introducere

Îmbătrânirea este un subiect etern și un vis al ființei umane. Modificările cutanate legate de vârstă sunt inevitabile și includ subțierea, lăsarea, încrețirea, pierderea elasticității, zonele de uscăciune și o rotație inversă a raportului de colagen de tip I/III în piele, care s-a prezentat ca sinteză redusă a colagenului de tip I, dar producția reglementată în sus de colagen de tip III [1]. În prezent, mezoterapia a trezit interesul tuturor ca strategie antiaging. Este o procedură minim invazivă, care constă în microinjecția intradermică a substanțelor farmacologice, cum ar fi nutrienții, hormonii, vitaminele, enzimele și alți reactivi, care au fost diluați și sunt administrați direct în regiunea de tratat. Sub manipulare sterilă și profesională, mezoterapia provoacă foarte rar probleme de infecție a pielii și necroză, cu excepția unor riscuri minore, cum ar fi umflarea și durerea în timpul injecției. Ca o procedură sigură, simplă, mai puțin dureroasă, care este una dintre așa-numitele „proceduri cosmetice la prânz”, nu necesită timp de recuperare și este perfectă pentru profesioniști și oameni de succes în viața modernă rapidă [2-4].

Pentru a evalua efectele potențiale anti-îmbătrânire ale dozei mici de DMAE administrate intradermic prin microinjecție localizată (mezoterapie), structura țesuturilor și metabolismul colagenului pielii îmbătrânite induse de D-gal au fost măsurate în acest studiu. Între timp, a fost studiată, de asemenea, co-injectarea compusului aminoacid (AA), ducând la o toxicitate celulară redusă prin injecție cu DMAE și să fie o sursă de nutriție locală. De asemenea, a fost descris mecanismul lor de acțiune considerat în piele.

2. Materiale și metode

2.1. Animale

Șobolanii masculi Wistar au fost cumpărați de la Institutul de Științe Farmaceutice (Qingdao, China). Toate animalele aveau o greutate de 180-220 g în momentul operației. Îngrijirea animalelor și protocolul experimental au fost aprobate de Comitetul instituțional de îngrijire și utilizare a animalelor din cadrul școlii medicale a Universității Qingdao.

Total 80 de șobolani Wistar au fost împărțiți în mod aleatoriu în fiecare grup experimental (așa cum este detaliat în Tabelul 1). Animalelor din fiecare grup de tratament, cu excepția grupului de control fals, li s-a administrat injecție subcutanată cu D-galactoză (D-gal) la doza de 125 mg/kg · d timp de 6 săptămâni pentru a induce modelul de îmbătrânire a pielii șobolanului. La 18 zile după injectarea D-gal, fiecare șobolan a fost anesteziat cu hidrat de clor (0,25 ml la 100 g greutate corporală) și dezinfectat în zona șoldului. O zonă rotundă de tatuaj de 3 cm a fost prefabricată pe fiecare parte a șoldului șobolanului și apoi tratată sub anestezie generală o dată pe săptămână timp de 4 săptămâni cu microinjecție intradermică de soluție salină (NS), AA, 0,1% DMAE, 0,2% DMAE, 0,1% DMAE + AA, sau 0,2% DMAE + AA, respectiv. Atât grupurile de control negativ în vârstă, cât și grupurile de control fals au primit exact aceeași procedură chirurgicală, dar fără niciun tratament în studiu. La 42 de zile după tratament, toate animalele au fost eutanasiate și rănile cutanate au fost comparate prin histologie, măsurarea conținutului de apă, conținutul de hidroxiprolină și testarea cantitativă în timp real a PCR.

2.2. Histopatologie

Grosimea pielii a fost măsurată cu software-ul de analiză SimplePCI Image (Hamamatsu Corporation, Boston, MA) în secțiuni colorate cu hematoxilină și eozină. Grosimea epidermică a fost măsurată de la suprafața stratului cornos (SC) până la partea inferioară a papilelor dermice, în timp ce grosimea dermică a fost măsurată de la partea superioară a papilelor până la porțiunile cele mai adânci ale dermului reticular până la atingerea țesutului adipos sau a mușchiului. Sub aceeași mărire, 5 poziții individuale au fost selectate aleatoriu pentru a măsura grosimea pielii din fiecare dintre cele 5 câmpuri vizuale pe secțiune. Cu pata Masson Trichrome din toate secțiunile, 5 câmpuri vizuale diferite au fost, de asemenea, alese și analizate aleatoriu pentru densitatea fibrelor de colagen.

2.3. Măsurarea conținutului de apă

Plaga de 1 cm 2 a fost recoltată și măsurată pentru greutatea precisă umedă, urmată de coacere la 80 ° C timp de 12 ore înainte de măsurarea greutății sale uscate. Conținutul de apă din piele a fost calculat prin formula procentului de conținut de apă = ((greutate umedă - greutate uscată) ÷ greutate umedă) × 100%.

2.4. Măsurarea conținutului de hidroxiprolină

Conținutul de hidroxiprolină în plăgile cutanate a fost măsurat în conformitate cu protocolul fabricării kiturilor de testare comerciale (NANJING JIANCHEN biologic Engineering Co., LTD, Nanjing, China).

2.5. Reacție în lanț cu transcripție inversă cantitativă-polimerază (qRT-PCR)

Rănile cutanate au fost omogenizate în TRIzol1 (Invitrogen) și ARN-ul total a fost extras conform protocolului producătorului. 1 μg ARN total a fost transcris invers în ADNc utilizând sistemul de sinteză PrimeScript RT (Takara Biotechnology/Takara Bio, Dalian, China). O metodă PCR cantitativă foarte sensibilă a fost efectuată cu aceste produse ADNc. Toți primerii și sondele personalizate au fost validate pentru eficiența lor (așa cum se arată în Tabelul 2). Amestecul de reacție de 10 ml conținea 2x Power SYBR1 Green PCR Master Mix, ADNc diluat de 10 ori și 0,2 mM din fiecare primer. Protocolul termic a constat în activarea polimerazei de 10 min la 95 ° C, urmată de 40 de cicluri de denaturare la 95 ° C timp de 30 s, recoacere primer la 55 ° C timp de 1 min și extindere la 72 ° C timp de 30 s. Nivelurile de expresie a ARNm au fost normalizate la cele ale genei endogene de referință β-acțiune și prezentate ca modificări ale pliurilor la cele obținute din probele de piele de control al îmbătrânirii.