Departamentul de biologie, Colegiul de Științe

sistemului

Casetă poștală 71454, Shiraz, (Iran)

Articole similare pentru „”

  • Facebook
  • Stare de nervozitate
  • LinkedIn
  • E-mail

Abstract

Obiectiv: Pentru a evalua efectele Prunus domestica L. extracte pe fetuți și sisteme scheletice neonatale. Materiale și metode: Un total de 32 de șoareci însărcinați (Musculus) a primit extract hidroalcoolic de vehicule și prune în zilele de gestație 1-18 și în întreaga perioadă gestațională, precum și, respectiv, la 10 zile postpartum. Un total de 30 de șoareci neîncărcați au fost hrăniți cu extract hidroalcoolic de prune și extract de suc de prune timp de 30 de zile. Au fost măsurate conținutul de calciu osos și concentrațiile serice de calciu, magneziu și fosfatază alcalină. Sistemele scheletice ale fetușilor și ale nou-născuților lor au fost colorate cu albastru alcian și roșu alizarină S, iar lungimea femurului, tibiei și centrul lor de osificare au fost măsurate. Rezultate: Lungimea coapsei coroanei la șoarecii nou-născuți de la mame tratate cu extract de prune (4,61 ± 0,25 mm) a fost mai mare comparativ cu grupul martor (4,48 ± 0,31 mm, p = 0,001) și indicele de osteogeneză femurală a șoarecilor nou-născuți de la mame tratate cu extractul de prune a fost, de asemenea, mai mare (0,87 ± 0,09) comparativ cu grupul martor (0,81 ± 0,06, p = 0,007). Concluzie: Constatările au arătat că șoarecii însărcinați tratați cu extract de prune aveau fături și șoareci nou-născuți cu un indice de osteogeneză mai mare decât cei din martori.

Introducere

Prunul este un pom fructifer de piatră aparținând genului Prunus și subgen Prunus. Rezultatele studiilor recente au arătat că prunul uscat, prunele (Prunus domestica L.), poate fi eficient atât în ​​prevenirea cât și în inversarea pierderii osoase [1,2,3].

Metode și materiale

Pregătirea extractului

P. domestica L. fructele au fost colectate din Sepidan, un oraș situat în provincia Fars, Iran. Un total de 150 g de prune uscate au fost extrase din 1.000 g de prune proaspete. Extractul hidroalcoolic a fost preparat folosind o metodă de percolare și purificat cu un desicator. De asemenea, sucul de fructe din 1.000 g de prune proaspete a fost condensat la 400 ml într-o baie de apă de 60 ° C.

Administrații pentru animale și extracte

Pentru studiu au fost folosiți 32 de șoareci femele care cântăresc între 30 și 40 g, obținute de la Animal House, Universitatea de Științe Medicale Shiraz, Shiraz, Iran. Animalele au fost adaptate la condițiile de laborator timp de 2 săptămâni înainte de începerea experimentelor. Șoarecii au fost ținuți la o temperatură controlată a camerei de 22-24 ° C cu un ciclu luminos: întunecat de 12:12 h (luminile aprinse la 09.00 h și oprite la 21.00 h). Șoarecii aveau acces gratuit la alimente și apă de la robinet. Experimentele pe animale au fost aprobate de Comitetul instituțional de etică și sănătate animală, Departamentul de biologie, Universitatea Shiraz. Șoarecii femele au fost în cuști cu șoareci masculi și inseminarea a fost verificată în dimineața următoare prin verificarea prezenței unui dop de copulare în vagin. Ziua în care s-a observat dopul vaginal a fost desemnată ca ziua 0 a sarcinii (ziua de gestație 0, GD 0). Șoarecii însărcinați au fost cântăriți pe următoarele GD: 5, 8, 12 și 15. O reprezentare schematică a procedurii experimentale este dată în figura 1.

FIG. 1

Reprezentare schematică a procedurii experimentale.

Șoarecii însărcinați au fost împărțiți în două grupuri experimentale și două grupuri martor (n = 8). Șoarecii din primul grup experimental au primit 1,6 g/kg extract hidroalcoolic de prune (PHE) pe cale orală de la GD 1 la 18. Șoarecii din al doilea grup experimental au fost tratați cu aceeași doză pentru întreaga perioadă gestațională, precum și 10 zile după naștere.

Pentru compararea șoarecilor nepregresați și a șoarecilor însărcinați, șoarecii femele neîncărcați cu greutatea între 30 și 40 g au fost împărțiți în grupuri experimentale și de control (n = 10) tratați cu PHE (1,6 g/kg). De asemenea, șoarecii care nu sunt gravide (n = 10) au fost tratați cu extract de suc de prune (PJE, 8 ml/kg) pentru a compara efectele acestor extracte. Extractele au fost suspendate în 0,2 ml apă distilată și administrate pe grupe experimentale pe cale orală prin gavaj cu ac timp de 30 de zile. Grupurile martor au primit 0,2 ml apă distilată în condiții similare celorlalte grupuri. Șoarecii au fost cântăriți săptămânal.

Măsurarea indicelui osteogenezei

Fetusii grupului PHE la GD 19 și nou-născuții în ziua a 10-a postpartum au fost sacrificați sub anestezie profundă. Au fost măsurate lungimea și greutatea coroanei. Șaizeci și unu de fetiți și 40 de nou-născuți au fost fixați în etanol 95%, apoi au fost jupuiți și eviscerați. Au fost degresate în acetonă timp de 3 zile la 37 ° C și colorate cu un amestec de albastru alcian (Merck, Darmstadt, Germania) și roșu alizarină S (Riedel-de Haën, Germania). Animalele au fost curățate într-o serie de concentrații scăzute de hidroxid de potasiu în glicerină și apoi ținute în glicerină. Scheletul cartilaginos a fost colorat cu colorant albastru, iar scheletul osificat cu roșu. Lungimea totală a femurului și tibiei și lungimea zonelor osificate au fost măsurate sub un stereomicroscop echipat cu un ocular condus (Zeiss, Mc-80; Jena, Germania). Indicele de osteogeneză a fost calculat prin împărțirea lungimii osificate la lungimea totală a fiecărui os (fig. 2).

FIG. 2

Efectele extractelor de prune asupra scheletului nou-născut curățat colorat cu roșu alizarină S și albastru alcian. Părțile cartilaginoase și osoase ale scheletului s-au colorat în albastru și, respectiv, în roșu. Șoarecii tratați cu PHE (stânga) au fost mai lungi decât șoarecii martor (dreapta).

Măsurarea conținutului de calciu

La sfârșitul experimentului, șoarecii însărcinați și non-gravidați au fost sacrificați sub anestezie profundă și coapsele lor au fost disecate. Apoi femurele au fost îndepărtate și curățate. Oasele au fost uscate timp de 24 de ore într-un incubator la 56 ° C. Oasele uscate au fost scrumate la 550 ° C timp de 20 de ore într-un cuptor (model 10500, Thermolyne, Dubuque, Iowa, SUA). Osul a fost pudrat și 0,03 g de pulbere a fost dizolvat în 250 pl HCI; această soluție a fost apoi diluată cu 31 ml de apă distilată. Soluțiile standard au fost preparate pentru a conține 0,2 g de CaCI2 în HCI 2% (densitate 720 ppm). Soluțiile stoc au fost diluate la 0,03 ppm. Conținutul de calciu (Ca) a fost măsurat folosind un fotometru cu flacără (modelul 8515, Jenway, Stone, Staffs, UK). Ecuația de potrivire liniară a fost calculată cu Microsoft Excel (Microsoft Corp., Redmond, Washington, SUA) ca y = 0,0073x + 0,0624 unde y este conținutul de Ca os și x este conținutul de Ca al soluției standard.

Analiza conținutului serului

La sfârșitul experimentului, probele de sânge ale șoarecilor gravide și ne-gravide au fost prelevate prin puncție cardiacă, apoi porțiunile lor serice au fost separate după ce au fost centrifugate timp de 15 minute la 2.000 rpm. Apoi, concentrațiile serice de Ca, magneziu, fosfor (P) și fosfatază alcalină, glucoză din sânge, trigliceride, colesterol, lipoproteine ​​cu densitate ridicată și joasă au fost măsurate folosind un analizor clinic automat (Biolis 24i, Japonia) la Centrul de Biochimie al Centrului de Cercetare al spitalului Nemazee, Shiraz.

Analize statistice

Rezultatele sunt prezentate ca mijloace și abateri standard. Datele au fost analizate de ANOVA. Au fost efectuate și testele lui Tukey și Scheffé și metoda diferenței mai puțin semnificative ca teste post hoc. Un nivel de semnificație de 0,05 a fost stabilit pentru toate analizele statistice.

Rezultate

Randamentul (greutate/greutate) al extractului de prune uscat a fost de 7,95% (g/g), iar cel al PJE a fost de 40% (g/g).

Nu au existat diferențe semnificative statistic (p = 0,92) în greutatea corporală a șoarecilor însărcinați (51,00 ± 5,68 g) comparativ cu grupul martor (52,68 ± 6,27 g). Greutatea șoarecilor care alăptează (37,25 ± 4,17 g) nu a prezentat o diferență semnificativă (p = 0,62) comparativ cu grupul lor de control (39,33 ± 4,30 g). Greutatea corporală a șoarecilor care nu sunt gravide în grupul tratat cu PHE (31,02 ± 2,82 g) și al șoarecilor tratați cu PJE (27,88 ± 1,55 g) nu au prezentat nicio diferență semnificativă în comparație cu grupurile lor de control (p = 0,09 și p = 0,87, respectiv).

Fetusii șoarecilor tratați cu PHE au cântărit semnificativ (1,41 ± 0,12 g) mai mult decât cei din grupul martor (1,37 ± 0,12 g, p = 0,004), iar lungimea coroanei-crestă a șoarecilor nou-născuți (4,61 ± 0,25 mm) a fost mai mare de cea a grupului de control (4,48 ± 0,31 mm, p = 0,001).

Tehnica de colorare S albastru alcian/roșu alizarină a indicat faptul că lungimea totală a femurului și lungimea osificată a femurului au fost mai mari la fetuții din grupul tratat cu PHE (p = 0,005 și respectiv 0,014), în timp ce lungimea tibiei nu a fost semnificativ diferită în comparație cu martorul grup (tabelul 1). Atât lungimea osificată a femurului, cât și a tibiei la nou-născuții la șoareci tratați cu PHE au fost mai mari decât cele ale grupurilor lor de control (p = 0,000 și respectiv 0,002, tabelul 1). Cu toate acestea, numai indicele osteogenezei femurale a nou-născuților a fost semnificativ mai mare (p = 0,007) în comparație cu grupurile martor (tabelul 1).

tabelul 1

Efectele PHE asupra lungimilor tibiale și femurale (mm) și a indicelui de osteogeneză al fetușilor GD 19 și șoareci nou-născuți de 10 zile în diferite grupuri

Nu au existat diferențe semnificative statistic în conținutul de Ca al osului la șoarecii însărcinați și șoareci care și-au hrănit puii, comparativ cu martorii lor (tabelul 2). Cu toate acestea, conținutul de Ca al osului la șoarecii care nu sunt gravide a fost semnificativ mai mare în grupurile PHE (p = 0,049) și PJE (p = 0,020) decât în ​​grupurile martor (tabelul 2).

masa 2

Efectul PHE asupra conținutului sanguin de Ca, magneziu (Mg), P, fosfatază alcalină (ALP) și conținutul de Ca al osului șoarecilor în diferite grupuri

Suplimentarea dietetică zilnică cu PHE nu a modificat semnificativ nivelurile de Ca seric, fosfatază alcalină, P, magneziu la șoarecii însărcinați și care alăptează, comparativ cu grupurile martor (tabelul 2). Cantitatea de Ca în grupurile tratate cu PJE a fost semnificativ mai mare decât cea din grupul de control (p = 0,036), în timp ce concentrațiile ridicate de Ca în grupul tratat cu PHE nu au fost semnificativ comparate cu grupul de control (tabelul 2). Concentrația de P a fost semnificativ mai mare la șoarecii tratați cu PHE (p = 0,028); totuși, concentrația mai mare de P la șoarecii tratați cu PJE comparativ cu șoarecii martor nu a fost semnificativă statistic (tabelul 2). Suplimentarea dietetică zilnică cu PHE nu a modificat semnificativ nivelurile de glucoză serică, trigliceride, colesterol, lipoproteine ​​cu densitate ridicată și densitate scăzută la șoarecii gravide și care alăptează, comparativ cu grupurile martor (tabelul 3). Concentrațiile serice de trigliceride și colesterol la șoarecii tratați cu PJE (p = 0,001 și respectiv 0,029) au fost semnificativ mai mari decât în ​​grupul martor (tabelul 3).

Tabelul 3

Efectul PHE asupra concentrației sanguine de glucoză, trigliceride, colesterol, lipoproteine ​​cu densitate ridicată și joasă (HDL și LDL) la șoareci din diferite grupuri

Discuţie

Conform datelor noastre, lungimea femurului fetușilor și al nou-născuților din grupul tratat cu PHE, lungimea coroanei-crestă a nou-născuților din grupul tratat cu PHE și conținutul de Ca și P din os și ser din șoarecii nepregresați din tratamentul cu PJE au fost semnificativ crescute în comparație cu cele ale controalelor. În ciuda lungimilor mai mari de femur și tibie la fetuși și nou-născuți la animale tratate cu extract de prune, conținutul de Ca al osului și serului mamelor lor nu s-a modificat în comparație cu șoarecii martor. Aceste date au confirmat efectele prunelor pe os atât la animalele mature, cât și la cele imature, după cum sa raportat anterior [3,4,5,6].

S-a raportat că suplimentele nutritive precum izoflavonele din soia, Ca și vitamina D au capacitatea limitată de a restabili masa osoasă și structura acesteia [9,10], dar potențialul de protecție osoasă a crescut semnificativ în MC3T3-1 (celule asemănătoare osteoblastilor) tratat cu extract uscat de prune [4]. Acest lucru s-ar putea datora unor cantități relativ mari de polifenoli (441 mg/l) în suc de prune [11] și extract de etanol de prune [12]. Compușii fenolici precum izoflavonele și lignanii influențează pozitiv sănătatea oaselor [2,13,14,15] și inhibă resorbția osoasă datorită proprietăților lor antioxidante și antiinflamatorii [7,16]. Polifenolii stimulează, de asemenea, în mod direct osteoblastele și modifică favorabil markerii de formare osoasă, ceea ce ar sugera posibilitatea unor proprietăți anabolice [17,18]. Rutina, unul dintre polifenolii sucului de prune [11], a crescut osteocalcina serică și DMO la șobolanii osteopenici cu deficit de estrogen [17]. DMO al fetusilor tratați cu izoflavone a crescut semnificativ [19].

Prunele uscate, extractul de prune și sucul de prune sunt bogate în compuși fenolici precum acizii neoclorogeni și clorogeni, care acționează ca antioxidanți [11,12,20,21]. S-a demonstrat că antioxidanții inhibă resorbția osoasă și stimulează formarea oaselor [22,23].

Conform datelor noastre, celelalte componente serice, cum ar fi fosfataza alcalină, nu au fost modificate la șoarecii tratați cu extract de prune în comparație cu grupurile martor. Nu au existat modificări ale nivelurilor de fosfatază alcalină la șobolani după o perioadă de 90 de zile de administrare a vitaminei K [5] și a tratamentului cu prune uscate [6]. Prin urmare, extractul de prune nu pare să modifice mineralizarea osoasă, cu toate acestea, a influențat numărul osteoblastelor și a avut efecte optime asupra metabolismului osos, atât pe baza resorbției osoase, cât și a formării [3]. Concentrații mai mari de Ca și P la șoarecii tratați cu PJE și respectiv cu PHE se pot datora diferitelor componente ale acestor extracte.

Concluzie

Descoperirile au arătat că extractul de prune a crescut lungimile femurale și tibiale, conținutul de Ca din os și ser din animalele adulte care nu sunt însărcinate și indicii de osteogeneză ai făturilor și nou-născuților la șoarecii însărcinați. Sunt necesare investigații suplimentare pentru a clarifica influența exactă a prunului asupra metabolismului osos și a mecanismului său potențial.

Confirmare

Prezentul studiu a fost susținut financiar de către vicecancelul pentru cercetare al Universității Shiraz. Autorii îi sunt recunoscători doamnei. Arasteh pentru prepararea extractelor.