E Limberaki

1 Departamentul de studii medicale de laborator, Școala de profesii din domeniul sănătății și îngrijirii Institutul Tehnologic Educațional Alexander din Salonic, Grecia

rândul

Ph Eleftheriou

1 Departamentul de studii medicale de laborator, Școala de profesii din domeniul sănătății și îngrijirii Institutul Tehnologic Educațional Alexander din Salonic, Grecia

E Vagdatli

1 Departamentul de studii medicale de laborator, Școala de profesii din domeniul sănătății și îngrijirii Institutul Tehnologic Educațional Alexander din Salonic, Grecia

În Kostoglou

2 Departamentul de informatică, Școala de aplicații tehnologice, Institutul Educațional Tehnologic Alexander din Salonic, Grecia

Ch Petrou

1 Departamentul de studii medicale de laborator, Școala de profesii din domeniul sănătății și îngrijirii Institutul Tehnologic Educațional Alexander din Salonic, Grecia

Abstract

Fundal: Influența unor factori precum vârsta, sexul, stilul de viață și fumatul asupra stării oxidative a organismului rămâne neclară. Există dovezi că se consideră că aportul alimentar de antioxidanți consolidează capacitatea organismului de a contracara radicalii liberi. Administrarea de antioxidanți sintetici ca suplimente alimentare nu pare să aibă același efect benefic ca și consumul acelorași antioxidanți ca parte a ingredientelor alimentare. Această lucrare se concentrează pe investigarea vârstei și a efectelor dietetice asupra stresului oxidativ și examinează ipotezele influenței lor semnificative.

Metode: Probele de sânge de 146 de voluntari au fost colectate și alocate în trei grupe de vârstă. Toți voluntarii au completat un chestionar privind condițiile de mediu acasă și de lucru, obiceiurile speciale și preferințele dietetice. Am implementat o dietă de 30 de zile bogată în antioxidanți la 55 de voluntari. Activitatea antioxidantă a fost estimată înainte și după dieta specială prin măsurarea influenței serului în oxidarea ABTS de către sistemul de peroxid de feril mioglobinhidrogen.

Rezultate: Descoperirile noastre au arătat o capacitate antioxidantă totală mai mică neașteptată (TAC) la persoanele mai tinere (cu vârste cuprinse între 18 și 35 de ani) 79%, comparativ cu persoanele în vârstă mijlocie și vârstnice și o creștere mare de 62% a TAC seric la toate grupele de vârstă după aceea - dieta speciala lunara.

Concluzie: Aceste rezultate implică faptul că o dietă bogată în antioxidanți bazată pe consumul de alimente bogat în antioxidanți și nu pe o singură administrare de antioxidanți, poate crește starea antioxidantă a organismului și poate oferi o sănătate mai bună. Starea totală a antioxidantului seric crește odată cu vârsta și acest fapt ar trebui luat în considerare atunci când TAC este măsurat în diferite boli.

Speciile reactive de oxigen (ROS) sunt produse în corpul uman în timpul metabolismului aerob normal sau datorită acțiunii macrofagelor ca parte a răspunsului imun 1. Ei joacă un rol dublu atât ca specii dăunătoare, cât și ca specii benefice 2. ROS sunt în mod normal generate de enzime bine reglate, cum ar fi oxidul nitric sintază (NOS) și nicotinamida adenină dinucleotid fosfat (NAD (P) H) oxidază izoforme. Se știe că stresul oxidativ induce sau promovează diferite boli 3, cum ar fi ateroscleroza și bolile cardiace 4 - 6, cancerul 7, bolile neurodegenerative (boala Alzheimer, boala Parkinson), hipertensiunea arterială 8, 9, diabetul zaharat 10 și îmbătrânirea 11 - 15. Se susține, de asemenea, că stresul oxidativ constituie unul dintre principalii factori responsabili pentru leziuni de ischemie/reperfuzie.

Corpul uman a dezvoltat un sistem antioxidant 16 pentru a contracara ROS și a reduce daunele pe care le cauzează. Sistemul antioxidant include diverse molecule endogene 17, cum ar fi glutation redus (GSH), acid uric, billirubină, ceruloplasmină, feritină, vitamine precum acidul ascorbic și tocoferol 18 și o mulțime de enzime, cum ar fi superoxid dismutază, catalază, glutationeperoxidază 19 - 21 . Antioxidanții derivați din alimente sunt adăugați în activitatea antioxidantă totală a organismului uman. În acești antioxidanți putem include polifenoli precum quercetina, taninurile și flavonoidele prezente în uleiul de măsline, roșiile, fructele de pădure, strugurii, vinul roșu și berea, cafeaua, ceaiul și coccoa, licopenul găsit în fructele roșii și portocalii precum roșiile, morcovii, pepenele verde. și vitamine antioxidante găsite în toate fructele și legumele 22. Principalele surse alimentare de antioxidanți sunt cafeaua, ceaiul, banana, fasolea uscată, porumbul, vinul roșu, berea, mărul, roșiile și cartofii. Administrarea de antioxidanți sintetici ca suplimente alimentare nu pare să aibă același efect benefic ca și consumul acelorași antioxidanți ca parte a ingredientelor alimentare. Mai mult, tipul de antioxidanți din alimente, precum și procedura de preparare a alimentelor și amestecurile de alimente utilizate influențează eficacitatea acestora.

Cooperarea tuturor componentelor antioxidante poate oferi mai multă protecție împotriva ROS decât orice compus singur. Deci, este preferată o dietă naturală echilibrată bogată în antioxidanți decât o dietă bogată într-un singur antioxidant. Concentrația ridicată de antioxidanți din sânge pare să crească apărarea organismului împotriva anumitor boli, iar tratamentul cu antioxidanți este adesea propus ca parte a terapiei 23, 24. Pe de altă parte, nivelurile de antioxidanți pot fi utilizate ca diagnostic sau indicator de prognostic în unele cazuri. Măsurarea capacității antioxidante a sângelui întreg al organismului ne poate oferi informații biologice valoroase despre starea organismului.

În prezent, nu există perspective consistente cu privire la schimbarea asociată vârstei în capacitatea antioxidantă. Anumiți cercetători au studiat prezentarea catalazei, a peroxid oxidazei, a unor vitamine antioxidante, a peroxidării lipidelor sau a oxidării proteinelor și a ADN-ului și au constatat creșterea sau scăderea diferiților factori cu vârsta de 25 - 27 de ani. În cele mai multe cazuri a fost observată o creștere a capacității totale a antioxidantului (TAC) cu vârsta. Cu toate acestea, diferite metode de măsurare duc la rezultate diferite. De exemplu, măsurarea cu metoda FRAP care nu poate determina antioxidanții cu grupele sulfidril 28, a arătat scăderea TAC odată cu vârsta de 29 de ani. În alte studii, o creștere a TAC odată cu vârsta a fost constatată ca o observație secundară la pacienții care suferă de boli de cancer 24 .

Factori precum sexul, stresul, activitatea fizică 29 - 31 fumatul 32 și dieta 33 - 37 afectează, de asemenea, capacitatea antioxidantă totală. S-a raportat că obiceiuri precum fumatul și dieta slabă înclină spre creșterea stresului oxidativ, în timp ce aportul de antioxidanți din dietă poate crește capacitatea antioxidantă totală 38 - 42 .

Un alt factor important, care este asociat cu nivelurile de antioxidanți, este cortizolul, denumit de obicei „hormonul stresului”. Cortizolul este implicat în răspunsul organismului la stres și anxietate. Acesta declanșează toate mecanismele metabolice care conduc la producerea de compuși folosiți ca surse de energie în condiții de urgență. Creșterea concentrațiilor de cortizol 43 se măsoară în serul sanguin al persoanelor aflate sub stres biologic sau emoțional, depresie, lipsă de somn, febră, hipoglicemie, anorexie nervoasă și după operație 44. Mai mult, creșterea concentrației de cortizol a fost asociată cu scăderea nivelului total de antioxidanți 45. Nivelul unor antioxidanți tisulari este invers legat de nivelurile de țesut cortizol 46. Depleția de antioxidanți poate rezulta ca o consecință a diferitelor căi activate de cortizol sau poate fi efectul producției de radicali liberi în timpul metabolismului cortizolului. Terapia antidepresivă care duce la scăderea nivelului de cortizol are ca rezultat și creșterea concentrației de antioxidanți.

Efectele vârstei și ale dietei asupra capacității antioxidante nu au fost investigate suficient de actualizate în Grecia. Prezentul studiu se referă la examinarea ipotezelor efectelor semnificative statistic ale vârstei și ale dietei în capacitatea totală de antioxidanți utilizând metoda acidului 2,2'-azino-bis (3-etilbenztiazolină) -6-sulfonică (ABTS) la probe aleatorii de Salonic rezidenți. De asemenea, este examinată corelația dintre nivelurile de cortizol și TAC.

Material si metode

Mostre de sânge

Antioxidanții sângelui total au fost măsurați în serul a 146 de persoane sănătoase, 55 de bărbați și 91 de femei, care trăiau în aceeași regiune și au fost clasificate în trei grupe în funcție de vârsta lor; A: 16-35 ani (n = 65), B: 36-60 ani (n = 33) și C: 61-90 ani (n = 48). Toți indivizii erau voluntari, rezidenți în Salonic, Grecia. Participanții au fost pe deplin informați cu privire la scopul și conținutul experimentului și s-a obținut consimțământul lor informat de participare. Au completat un chestionar referitor la locul și tipul muncii, stilul de viață, obiceiurile speciale, fumatul, preferințele privind dieta, medicamentele și bolile cronice. Toți subiecții au trebuit să îndeplinească următoarele criterii: nu erau sportivi, nu erau însărcinate și nu aveau o boală metabolică

Colectie de mostre

Probele de sânge au fost colectate din vena cubitus, în repaus, la ora 08.00 După prima colectare de sânge, 55 de voluntari din toate grupele de vârstă au urmat o dietă bogată în antioxidanți (fructe și legume proaspete, cafea, ciocolată, ulei de măsline, miere, vin roșu, ceai, roșii) timp de o lună. La sfârșitul lunii a fost recoltată oa doua probă de sânge (a doua colectare de sânge). După o săptămână a fost colectată o a treia probă de sânge (recoltare de sânge 3D). În această săptămână, voluntarii au fost lăsați să-și aleagă dieta în mod liber. Înregistrările dietetice detaliate au fost menținute înainte de studiu, în perioada de treizeci de zile de dietă bogată în antioxidanți și în timpul săptămânii după a doua recoltare de sânge. Dieta specială era bogată în diverși antioxidanți, precum vitamina C, E, flavonoide licopene taninuri, carotenoide. Toate probele au fost menținute la –70 ° C timp de maximum o lună până la măsurare.

Măsurători ale capacității antioxidante totale

După studierea diferitelor metode 47, a fost utilizată metodologia 48 TEAC (capacitate antioxidantă trolox echivalentă) pentru a măsura capacitatea antioxidantă totală a serului. Activitatea antioxidantă a fost estimată de influența a 10 μl de ser în oxidarea acidului 2,2'-azino-bis (3-etilbentiazolină) -6-sulfonic (ABTS) prin sistemul feril mioglobină - H2O2, utilizând kitul de testare antioxidant al Sigma. Trolox, analogul solubil în apă al vitaminei E, obținut de la aceeași companie, a fost folosit ca martor. Concentrația de antioxidanți a fost exprimată ca echivalenți trolox.

Măsurarea cortizolului

Cortizolul seric a fost măsurat utilizând setul de test imunosorbent legat de enzime (ELISA) al HUMAN. Metoda se bazează pe interacțiunea competitivă a cortizolului seric și a unei enzime cortizol conjugate furnizate de HUMAN pentru un număr limitat de anticorpi monoclonali anti-cortizol legați de godeurile unei plăci ELISA cu microtitru 49. Cantitatea de hormon legat-enzimă conjugată este invers proporțională cu concentrația de cortizol din specimen. După îndepărtarea conjugatului nelegat prin spălare, se adaugă o soluție de substrat și se dezvoltă o culoare albastră, care se transformă în galben prin adăugarea unei soluții stop. Absorbanța a fost măsurată la 450 nm folosind un cititor de plăci de tip mictotitru. Concentrația probelor necunoscute este interpolată dintr-o curbă doză-răspuns generată prin utilizarea calibratorilor serici cu concentrație cunoscută de cortizol.

Analize statistice

Datele au fost analizate folosind pachetul statistic pentru științele sociale (SPSS). Normalitatea datelor continue a fost determinată de testul de normalitate Kolmogorov-Smirnov sau Shapiro-Wilk. Toate datele continue care urmează distribuției normale sunt prezentate ca medie ± deviație standard (SD). Testul t cu probe independente a fost utilizat pentru a compara probele de sânge din diferite grupe de vârstă, în timp ce testul t cu probe pereche a fost utilizat pentru a determina efectul dietei suplimentare în TAC. O valoare P cu două cozi mai mică de 0,05 a fost considerată semnificativă statistic pentru toate comparațiile.

Rezultate

Experimentul 1: Corelația dintre TAC și vârstă

Factori precum fumatul și activitatea fizică care pot influența capacitatea antioxidantă totală au fost similare la toți subiecții. Nu s-a observat nicio diferență semnificativă în TAC serică între bărbați și femei. Evaluarea capacității antioxidante a sângelui subiecților în raport cu vârsta a relevat o diferență semnificativă în rândul tinerilor cu vârste cuprinse între 16 și 35 de ani și al persoanelor de vârstă mijlocie și vârstnice. (Tabelul 1, Figura 1). Valorile medii ale capacității antioxidante au fost mai mici în grupa A (cu 79%) decât în ​​celelalte grupuri.