Sunt Hyun Kim
1 Colegiul de Farmacie, Universitatea Națională Pusan, Busan, Coreea.
Yong Lim
2 Departamentul de Științe de Laborator Clinic, Colegiul de Nursing și Științe medicale, Universitatea Dong-Eui, Busan, Coreea.
Parcul Ju Bin
2 Departamentul de Științe de Laborator Clinic, Colegiul de Nursing și Științe medicale, Universitatea Dong-Eui, Busan, Coreea.
Jae-Hwan Kwak
3 Colegiul de Farmacie, Universitatea Kyungsung, Busan, Coreea.
Keuk-Jun Kim
4 Departamentul de Științe de Laborator Biomedical, Daekyeung College, Gyeongsan, Coreea.
Young-Hee Kim
4 Departamentul de Științe de Laborator Biomedical, Daekyeung College, Gyeongsan, Coreea.
Cântec HyunKeun
5 Departamentul de Microbiologie și Imunologie, INJE University College of Medicine, Busan, Coreea.
Joon Young Cho
6 Laborator de biochimie pentru exerciții, Universitatea Națională a Sportului din Coreea, Seul, Coreea.
Dae Youn Hwang
7 Departamentul de Știința Biomaterialelor, Colegiul de Resurse Naturale și Științe ale Vieții/Institutul de Cercetare a Convergenței Vieții și Industriei, Universitatea Națională Pusan, Miryang, Coreea.
Kil Soo Kim
8 Colegiul de Medicină Veterinară, Universitatea Națională Kyungpook, Daegu, Coreea.
Young-Suk Jung
1 Colegiul de Farmacie, Universitatea Națională Pusan, Busan, Coreea.
Abstract
Boala hepatică grasă nealcoolică (NAFLD) este considerată a fi cea mai răspândită boală hepatică la nivel mondial și un motiv major pentru leziunile hepatice cronice [1]. Se caracterizează prin acumularea de lipide în absența unui consum semnificativ de alcool și progresează frecvent către steatohepatită, fibroză hepatică și carcinom hepatocelular [2]. Principala ipoteză a progresiei bolii este considerată a fi susceptibilitatea crescută la citokine inflamatorii și stresul oxidativ în ficatul gras [3,4,5]. Deși s-au făcut multe studii despre NAFLD de la recunoașterea inițială a NAFLD, există încă multe lacune legate de înțelegerea noastră a etiologiei, prognosticului, prevenirii și tratamentului. Astfel, modele de animale experimentale bine stabilite care imită patologia umană vor oferi o mare oportunitate de a depăși eterogenitatea genetică și diferiți factori de mediu care influențează NAFLD.
Pentru a induce NAFLD, dieta cu deficit de metionină-colină (MCD) este cea mai utilizată la rozătoare. Deși nu induce caracteristici ale obezității din cauza pierderii în greutate, este un produs foarte reproductibil și induce în mod constant un spectru de NAFLD în funcție de durată [13,14]. Rozătoarele hrănite cu o dietă MCD dezvoltă rapid patologiile clinice de la steatoza macrovesiculară la fibroza hepatică [15]. Colina este substratul în sinteza fosfatidilcolinei care este necesară pentru lipoproteinele cu densitate foarte mică (VLDL), iar deficiența sa induce acumularea de lipide în ficat [16]. Aminoacizi esențiali, deficitul de metionină reduce biosinteza glutationului (GSH) prin calea transsulfurării, urmată de provocarea stresului oxidativ și contribuind la progresia bolii [17].
Obiectivul acestui studiu a fost de a compara răspunsul la o dietă MCD la șoarecii C57BL/6N obținut din trei surse diferite; Institutul Național de Evaluare a Siguranței Alimentelor și Medicamentelor (NIFDS) din Coreea, SUA și Japonia. Un studiu care compară răspunsul la dieta MCD ar putea oferi utilitatea șoarecilor originari din Coreea NIFDS în testul preclinic pentru a dezvolta un nou medicament de NAFLD.
Materiale și metode
Animale și tratament
Șoareci masculi C57BL/6N de 6 săptămâni au fost obținuți din trei surse diferite. C57BL/6NKorl au fost furnizate cu amabilitate de către Departamentul de Resurse Animale de Laborator din cadrul Institutului Național de Evaluare a Siguranței Alimentelor și Medicamentelor (NIFDS, Cheongju, Coreea). Celelalte două grupuri de tulpini C57BL/6N au fost achiziționate de la diferiți furnizori situați în Statele Unite (denumit C57BL/6N) și Japonia (denumit B: C57BL/6N). Toate protocoalele pentru animale au fost aprobate de Comitetele instituționale de îngrijire și utilizare a animalelor de la Universitatea Națională Pusan (PNU-2015-0837). Șoarecii au fost acomodați la temperatură (22 ± 2 ℃) și umiditate (55 ± 5%) - camere controlate cu un ciclu de lumină/întuneric de 12 ore timp de 1 săptămână înainte de utilizare. Aceștia au fost împărțiți în mod aleatoriu în 2 grupuri și au fost hrăniți cu un deficit de dietă în metionină și colină (MCD) sau dieta de control cu metionină și colină timp de 3 săptămâni. Dietele au fost obținute de la Dyets Inc. (Bethlethem, PA, SUA) și compoziția dietelor a fost prezentată în Tabelul 1. Pentru a evalua efectul suplimentării MCD asupra diferitelor organe, ficat și rinichi, precum și depozite de țesut adipos, cum ar fi țesutul adipos alb visceral (adică gonadal) și subcutanat (adică inghinal) și țesutul adipos maro inter-scapular ( BAT) au fost recoltate.
tabelul 1
| L-Alanină | 5.1 | 5.1 |
| L-arginină | 12.7 | 12.7 |
| Acid L-aspartic | 15.8 | 15.8 |
| L-cistină | 3.7 | 3.7 |
| Acid L-glutamic | 28.9 | 28.9 |
| Glicină | 6.2 | 6.2 |
| L-Histidină | 3.4 | 3.4 |
| L-izoleucină | 6.1 | 6.1 |
| L-Leucina | 10.5 | 10.5 |
| L-lizină-HCI | 9.1 | 9.1 |
| L-metionină | 1.7 | 0 |
| L-fenilalanină | 7.3 | 7.3 |
| L-Proline | 7.6 | 7.6 |
| L-Serine | 7.2 | 7.2 |
| L-Treonină | 4.6 | 4.6 |
| L-triptofan | 1.8 | 1.8 |
| L-tirozină | 5.7 | 5.7 |
| L-Valine | 6.3 | 6.3 |
| Amidon de porumb | 100 | 100 |
| Dextrină | 100 | 100 |
| Zaharoza | 392.19 | 408,58 |
| Celuloză, microcristalină | 50 | 50 |
| Ulei de porumb | 50 | 50 |
| Primex | 100 | 100 |
| Amestec de sare | 35 | 35 |
| Bicarbonat de sodiu | 4.3 | 4.3 |
| Amestec de vitamine | 10 | 10 |
| Bitartrat de colină | 14.48 | 0 |
| Citrat feric | 0,33 | 0,12 |
| Total | 1000 | 1000 |
Parametrii serici și analize histologice
O probă de sânge a fost obținută din aorta abdominală a fiecărui șoarece și transferată în tubul de colectare a sângelui BD Microtainer (BD Life Sciences, Franklin Lakes, NJ, SUA). Probele au fost centrifugate la 3000 g timp de 15 minute pentru a separa serurile, care au fost depozitate la –80 ℃ pentru analizele biochimice. Activitățile serice ale alaninei aminotransferazei (ALT) și ale aspartatului aminotransferazei (AST) au fost măsurate utilizând protocolul Reitman și Frankel [18]. Activitățile ALT și AST sunt proporționale cu cantitatea de piruvat și, respectiv, oxaloacetat, formate într-o perioadă determinată de timp și sunt măsurate printr-o reacție cu 2,4-dinitrofenilhidrazină în soluție alcalină. Au fost cuantificate spectrofotometric folosind un cititor MULTISKAN GO (Thermo Scientific, Waltham, MA, SUA). Nivelurile serice ale colesterolului total și ale trigliceridelor au fost determinate cu ajutorul unui analizor automat de chimie (Prestige 24I, Tokyo Boeki Medical System, Tokyo, Japonia).
Colorare roșie ulei O în țesuturile ficatului
Pentru a evalua nivelurile de acumulare a lipidelor în țesutul hepatic, secțiuni transversale de 5 µm ale lobului lateral stâng al ficatului au fost tăiate, imersate în propilen glicol timp de 5 minute și apoi colorate cu roșu de ulei O (Sigma Aldrich). După spălare cu 85% propilen glicol și apă distilată, secțiunile au fost contracolorate cu hematoxilină timp de 2 minute înainte de examinarea microscopică.
- Glicina ameliorează leziunile hepatice induse de deficiența de metionină și sau de colină la șobolani
- Hepatită hepatică grasă (steatohepatită) și obezitate Un studiu de autopsie cu analiza factorilor de risc
- Mâncarea rapidă grasă, trândăvie poate enerva ficatul
- Efectul unei diete hipocalorice în transaminaze în boala hepatică grasă nealcoolică și obeză
- Boli hepatice grase un ucigaș tăcut Narayana Health