Testul imunosorbent legat de enzime (ELISA) este mai specific și permite excluderea titrilor fals pozitivi ca urmare a reactivității încrucișate cu M. genitalium.

Termeni asociați:

  • Antigen
  • Anticorpi
  • Enzimă
  • Peptidă
  • Proteină
  • Imunotest
  • Imunoglobulină M
  • Reacția în lanț a polimerazei

Descărcați în format PDF

Despre această pagină

Toxocariaza

Teste serologice

ELISA, folosind antigeni excretori-secretori din larvele în stadiu infecțios, este testul diagnostic ales. La pacienții ale căror semne clinice și antecedente sugerează toxocariază viscerală, un ELISA Toxocara pozitiv este o dovadă puternică prezumtivă a infecției cu Toxocara. Un titru în creștere sau în scădere, cu o diferență dublă la un pacient recent bolnav, este în concordanță cu toxocariaza viscerală. Deoarece titrurile anticorpilor Toxocara pot rămâne ridicate ani de zile după infecția inițială, un titru măsurabil nu este o dovadă a unei relații cauzale între T. canis sau T. cati și boala actuală. Sondajele au arătat că până la 1-10% dintre copiii asimptomatici au titruri ELISA de 1: 32 sau mai mult. La pacienții cu leziuni oculare compatibile cu toxocarioza, titrurile ELISA pozitive susțin diagnosticul, dar nu exclud alte patologii oculare. Testarea ELISA toxocarală este disponibilă la Centrele pentru Controlul și Prevenirea Bolilor (CDC) și în alte câteva laboratoare clinice din SUA.

Analiza micotoxinei ocratoxinei A din cafea

112.6.1 ELISA

ELISA a devenit un instrument de screening popular și util datorită disponibilității anticorpilor policlonali și monoclonali împotriva mai multor micotoxine, inclusiv OTA. Cele mai multe ELISA comerciale pentru micotoxine se bazează pe un format ELISA competitiv, eterogen, în care toxina din probă concurează cu o toxină marcată (cum ar fi un conjugat toxină - enzimă) pentru un număr limitat de situsuri de legare a anticorpilor. 23

Metodele ELISA au avantaje datorită simplității lor și a unui număr ridicat de probe care pot fi analizate în același timp, dar numai pentru o singură micotoxină. 11 Cu toate acestea, ELISA este mai puțin precisă și sensibilă decât testele cromatografice convenționale. 18 În plus, rezultatele fals pozitive sau negative sunt observate din cauza reacțiilor încrucișate între molecule sau interferențe. Prin urmare, kiturile ELISA nu ar trebui utilizate ca metodă cantitativă 34 și ar trebui utilizate numai cu alimente pentru care au fost testate pe larg și s-a demonstrat că funcționează fără interferențe.

Cu toate acestea, ELISA reprezintă abordarea accesibilă pentru controlul industrial intern în multe industrii alimentare și, în cazul particular al producătorilor de cafea, poate fi utilizată pentru a controla contaminarea cu cafea verde.

Imunoanalize legate de enzime

Sandeep K. Vashist, John H.T. Luong, în Handbook of Immunoassay Technologies, 2018

Abstract

Testul imunoenzimatic legat de enzime (EIA) a fost cel mai utilizat format de imunodiagnostic în medici de sănătate, industriale și bioanalitice. Ultimele decenii au asistat la dezvoltarea formatelor EIA manuale și automate. Inițial, EIA manual a fost formatul predominant atunci când domeniul diagnosticului clinic era mai puțin avansat. Cu toate acestea, testul imunosorbent legat de enzime, cel mai utilizat format EIA, este încă desfășurat în setări limitate de resurse. Tendința s-a deplasat acum către EIA automatizate, care pot fi efectuate în laboratoarele centrale folosind analizoare clinice. Într-adevăr, o gamă largă de analizoare au devenit disponibile pentru a se potrivi nevoilor și cerințelor personalizate ale diferitelor setări de asistență medicală. Tendința recentă este, de asemenea, puternic înclinată spre testarea punctului de îngrijire utilizând formate avansate de laborator pe chip (LOC), strategii rapide EIA și dispozitive portabile de citire la preț redus, în special cititoare de smartphone-uri. Progresele în tehnologiile complementare, cum ar fi asistența medicală mobilă, LOC, detecția multiplex, tehnicile de microfabricare și punctarea clinică, deschid calea către EIA cu costuri reduse și superioare din punct de vedere analitic

Testul imunosorbent legat de enzime

Abstract

Testul imunosorbent legat de enzime (ELISA) a evoluat din alte tipuri de imunoanalize la începutul anilor 1970 și este acum una dintre cele mai utilizate tehnici de laborator în științele clinice, translaționale și de bază, precum și în medicina clinică. În acest capitol, sunt discutate conceptele de bază ale ELISA și formele sale cele mai frecvent utilizate, cum ar fi analize sandwich, indirecte și competitive, precum și aplicațiile lor și considerațiile implicate în proiectarea unui nou test ELISA. Acest capitol se concentrează pe utilizarea ELISA în cercetarea clinică și translațională, cu scopul de a oferi cititorului instrumentele necesare pentru a aplica ELISA în propriul context de cercetare. Un exemplu despre modul în care ELISA poate fi utilizat într-un scenariu de cercetare translațională este furnizat, precum și un protocol detaliat care descrie cum să facă acest lucru în acel exemplu.

Infecția virală gripală în sistemul respirator - modalități potențiale de monitorizare

3.8 Test imunosorbent legat de enzime

enzimatic

Figura 2.7. Test imunosorbent legat de enzime (ELISA)

În principiu, există trei tipuri de ELISA (directe, indirecte și sandwich). Aici este prezentat un sandwich ELISA ca exemplu.

Tehnici de extracție și aplicații: biologice/medicale și de mediu/criminalistică

3.07.3.3 Test imunosorbent legat de enzime

Testul imunosorbent legat de enzime (ELISA) este printre cele mai utilizate tipuri de imunoanalize și este mai sigur și mai ușor decât RIA. ELISA implică utilizarea unei activități enzimatice ca mijloc de detectare a legării unui conjugat anticorp - enzimă. 13 Enzimele sunt specifice atât în ​​reacția pe care o catalizează, cât și în substratul pe care îl recunosc și sunt supuse reglării activității lor de către alte molecule. Prin urmare, utilizarea enzimelor poate fi avantajoasă datorită specificității enzimei și a fenomenelor de amplificare date de cataliza enzimatică. ELISA diferă în ceea ce privește tipul de detecție, care este de obicei spectrofotometric atunci când eticheta enzimei produce un produs colorat, sau electrochimică atunci când enzima catalizează o reacție chimică redox. Dezavantajul major al ELISA este dependența activității enzimei de mediile fizice și chimice.

TEHNICI MICROBIOLOGICE

Test imunosorbent legat de enzime (ELISA)

ELISA detectează și amplifică reacțiile antigen-anticorp utilizând molecule enzimă-anticorp legate covalent. Prezența enzimei (indicând prezența antigenului) este detectată prin adăugarea substratului adecvat. Sistemele de detectare sunt de obicei concepute pentru a produce o schimbare de culoare care poate fi cuantificată de un cititor de plăci cu microtitrare.

ELISA-urile pot fi utilizate în două moduri, calitativ pentru a determina prezența sau absența sau cantitativ pentru a determina cantitatea de antigen prezent. Kituri ELISA depind adesea de adsorbția fie a anticorpului, fie a antigenului la o fază solidă, de exemplu, godeurile unei plăci de microtitrare, suprafața de margele de plastic sau un stick de plastic. Alegerea anticorpului (sau anticorpilor) utilizată determină specificitatea testului ELISA, care poate varia de la gen specific la specific tulpină. Principiul pe care se bazează metodele ELISA împiedică de obicei utilizarea acestora pentru determinarea numărului total de microbi. Cu toate acestea, ele pot fi utilizate pentru a detecta agenți patogeni precum Salmonella spp., Listeria spp.

Toxicologie gastro-intestinală

10.09.2.5 Test imunosorbent legat de enzime

Testul imunosorbent legat de enzime (ELISA) este o tehnică utilizată pentru a detecta prezența unui anticorp sau antigen într-o varietate de probe. Există mai multe tipuri diferite de ELISA, inclusiv ELISA indirecte, sandwich, competitive și reversibile. Toate acestea pot fi utilizate pentru a detecta proteine, viruși și medicamente. Cel mai frecvent ELISA utilizat pentru toxici este ELISA indirect. Această analiză poate fi utilizată pentru a analiza un anumit analit sau ecran pentru grupuri de compuși care reacționează încrucișat cu antigenul care este acoperit pe o suprafață solidă de suport (de exemplu, placă de microtitrare). Procedura implică mai întâi adăugarea probei de interes la antigenul acoperit pe placa de microtitrare. Un anticorp, care este legat de o enzimă, este apoi adăugat la antigen. Reacția anticorpului cu antigenul produce un complex antigen fluorescent/anticorp care este detectabil de lumina UV. Densitatea optică a fiecărei godeuri din placa de microtitrare este comparată cu probele de control. Probele care sunt pozitive pentru o proteină sau un toxic reflectă capacitatea lor de a lega competitiv antigenul. Chiar dacă reducerea fundalului și îmbunătățirea semnalului sunt potențiale limitări ale analizelor ELISA, aceste teste demonstrează un grad ridicat de specificitate și sensibilitate.

Metode de analiză a toxicilor gastrointestinali ☆

Test legat de imuno absorbția enzimelor

Testul imunosorbent legat de enzime (ELISA) este o tehnică utilizată pentru a detecta prezența unui anticorp sau antigen în probe. Există mai multe tipuri diferite de ELISA, inclusiv ELISA indirecte, sandwich, competitive și reversibile. Toate acestea pot fi utilizate pentru a detecta proteine, viruși și medicamente. Cel mai frecvent ELISA utilizat pentru detectarea toxicilor GI este ELISA indirect. Această analiză poate fi utilizată pentru a analiza un anumit analit sau ecran pentru grupuri de compuși care reacționează încrucișat cu un antigen care este acoperit pe o suprafață solidă de suport (de exemplu, placă de microtitrare). Procedura implică mai întâi adăugarea probei de interes la antigenul acoperit pe placa de microtitrare. Un anticorp, care este legat de o enzimă, este apoi adăugat la antigen. Reacția anticorpului la antigen produce un complex antigen fluorescent/anticorp care este detectabil de lumina ultravioletă. Densitatea optică a fiecărei godeuri din placa de microtitrare este comparată cu probele de control. Probele care sunt pozitive pentru o proteină sau un toxic reflectă capacitatea lor de a lega competitiv antigenul. Chiar dacă reducerea fundalului, îmbunătățirea semnalului sau reactivitatea încrucișată sunt potențiale limitări ale analizelor ELISA, aceste teste demonstrează un grad ridicat de specificitate și sensibilitate.

Volumul 1

Margaret AT Freeberg,. Hani A. Awad, în Enciclopedia ingineriei biomedicale, 2019

Testele imunosorbente legate de enzime (ELISA)