Carta Gianfranca

1 Departamentul de Științe Biomedice, Universitatea din Cagliari, Cagliari Italia,

triacilgliceroli

Elisabetta Murru

1 Departamentul de Științe Biomedice, Universitatea din Cagliari, Cagliari Italia,

Sarah Lisai

1 Departamentul de Științe Biomedice, Universitatea din Cagliari, Cagliari Italia,

Annarita Sirigu

1 Departamentul de Științe Biomedice, Universitatea din Cagliari, Cagliari Italia,

Antonio Piras

1 Departamentul de Științe Biomedice, Universitatea din Cagliari, Cagliari Italia,

Maria Collu

1 Departamentul de Științe Biomedice, Universitatea din Cagliari, Cagliari Italia,

Barbara Batetta

1 Departamentul de Științe Biomedice, Universitatea din Cagliari, Cagliari Italia,

Luisa Gambelli

2 Locatari Croklaan Europe, Wormerveer, Olanda,

Sebastiano Banni

1 Departamentul de Științe Biomedice, Universitatea din Cagliari, Cagliari Italia,

Conceput și proiectat experimentele: SB GC EM. Au efectuat experimentele: GC EM BB MC. Analiza datelor: SL AS AP. Reactivi/materiale/instrumente de analiză contribuite: LG. A scris lucrarea: SB GC EM.

Date asociate

Toate datele relevante se găsesc în lucrare.

Abstract

fundal

Mai multe dovezi sugerează că poziția acidului palmitic (PA) în triacilglicerolul (TAG) influențează diferite funcții biologice. Am urmărit să evaluăm dacă grăsimea alimentară cu PA foarte bogată (87%) în poziția sn-2 (Hsn-2 PA), prin creșterea încorporării PA în fosfolipide tisulare (PL), modifică profilul acidului gras și biosinteza acidului gras derivat bioactiv lipide, cum ar fi endocannabinoizi și congenerii acestora.

Design de studiu

Șobolanii au fost hrăniți timp de 5 săptămâni diete care conțin Hsn-2 PA sau grăsimi cu PA distribuite aleatoriu în TAG cu 18,8% PA în poziția sn-2 (Lsn-2 PA) și o concentrație similară de PA. Profilul acizilor grași în diferite fracțiuni lipidice, endocannabinoizi și congeneri au fost măsurați în intestin, ficat, țesut adipos visceral, mușchi și creier.

Rezultate

Șobolanii din dieta PA Hsn-2 au prezentat niveluri mai scăzute de anandamidă, cu creșterea concomitentă a congenerului său palmitoiletanolamidă și a precursorului său PA în fosfolipide ale țesutului adipos visceral. În plus, am constatat o creștere a oleoiletanolamidei, un ligand alfa PPAR, în ficat, mușchi și creier, asociată cu niveluri mai ridicate ale precursorului său acid oleic în ficat și mușchi, derivat probabil prin alungire și desaturarea ulterioară a delta 9 a PA. Modificările endocannabinoidelor și congenerilor au fost asociate cu o scădere a TNF alfa circulant după provocarea LPS și cu o eficiență îmbunătățită a hranei.

Concluzii

Hsn-2 PA dietetic, prin modificarea endocannabinoidelor și a congenerilor biosinteza în diferite țesuturi poate concura în reglarea fiziologică a metabolismului energetic, a funcției creierului și a distribuției grăsimii corporale.

Introducere

Rolul nutrițional al acidului palmitic dietetic (PA) este destul de controversat. Deși sa afirmat că crește mai mulți factori de risc, cum ar fi colesterolul LDL [1], markerii inflamatori [2] și rezistența la insulină [3], atunci când depășesc în dietă, este, de asemenea, principalul acid gras din laptele uman și principalul acid gras produs endogen. De fapt, producția endogenă de PA garantează concentrația sa fiziologică de membrană constantă de fosfolipide (PL) și formarea acidului oleic prin alungire la acid stearic. Desaturarea ulterioară a delta 9 produce acid oleic, care, după desaturarea delta 6, alungirea și o altă desaturare a delta 5, produce c20: 3n9 [4, 5], numit cu numele care a descoperit-o prima dată, acidul hidromel [6]. Acidul mead, în caz de deficit esențial de acizi grași, înlocuiește acizii grași polinesaturați cu carbon n-6 și n-3 20 în PL-uri cu membrană [7], păstrând proprietățile fizice ale membranei. PA sub forma PL are, de asemenea, un rol important ca agent tensioactiv pulmonar [8]. În plus, PA esterificat în retinol reprezintă forma principală de stocare a vitaminei A în ficat [9] și prin palmitoilare reglează mai multe fiziologii proteine ​​și fiziopatologie [10].

Interesant este că unele dintre proprietățile nutritive ale grăsimii din laptele uman, o grăsime bogată în sn-2 PA (75%) au fost atribuite PA în poziția sn-2 [22].

În această lucrare, ne propunem să verificăm dacă o concentrație ridicată de sn-2 PA afectează încorporarea PA în PL și influențează biosinteza endocannabinoizilor și a congenerilor. În plus, deoarece, așa cum s-a menționat mai sus, PA a fost susținut că are activitate pro-inflamatorie [2], am evaluat, de asemenea, după tratamentul cu o singură doză de LPS, dacă esterificarea sa în poziția sn-2 influențează susceptibilitatea la inflamație.

Materiale și metode

Animale și tratamente

40 de șobolani masculi wistar cu greutatea de 100-150g au fost adăpostiți timp de o săptămână înainte de alocarea în mod aleatoriu a două diete 10% dieta bogată în grăsimi PA sn-2 PA (Hsn-2 PA) și 10% dietă cu conținut scăzut de grăsimi sn-2 PA (Lsn-2) PA). Dietele cu conținut ridicat și scăzut de grăsimi de sn-2 PA au avut un conținut total similar de PA (vezi pct. 2) tabelul 1 compoziția acizilor grași pentru dietă).

tabelul 1

Hsn-2 PALsn-2 PA% din totalul acizilor grași
Palmitic și sn-287.118.8
c14: 01.33.4
c16: 023.524.2
c16: 12.13.4
c18: 140.337,8
c18: 230.228.4
c18: 30,70,4

Șobolanii au fost hrăniți timp de 5 săptămâni. Greutatea și lungimea animalelor au fost înregistrate săptămânal. Aportul de alimente a fost înregistrat la fiecare 2 zile.

Pentru a evalua răspunsul la un stimul inflamator, 10 animale pe grup au fost repartizate aleatoriu la tratament 12h înainte de sacrificare cu i.p. LPS 0,5 mg/kg de greutate corporală.

Înainte de sacrificiu, șobolanii erau posti 12 ore și uciși prin decapitare. Țesutul adipos, intestinul subțire, ficatul, mușchii și creierul au fost prelevate și prelucrate pentru analize lipidice. Plasma a fost separată de sânge și procesată pentru analize de citokine.

Toate experimentele au fost efectuate conform ghidurilor și protocoalelor aprobate de Uniunea Europeană (Consiliul UE 86/609; D.L. 27.01.1992, nr. 116) și de Comitetul de etică pentru cercetarea animalelor de la Universitatea din Cagliari, Italia.

Măsurători de citokine

TNFα, IL-1 și IL-6 au fost determinate după cum sa raportat anterior [24]. Pe scurt, celulele din sângele integral au fost îndepărtate prin centrifugare a 400 g timp de 10 min și supernatanții înghețați la -20 ° C până la evaluare. Testul citokinelor a fost efectuat cu un test ELISA sandwich (Biosource, Nivelles, Belgia). Absorbanta la 450 nm a fost masurata cu un cititor de microplaca model 680 (Bio-rad, Hercules, CA). O curbă standard a fost pregătită prin reprezentarea valorii absorbantei citokinelor standard față de concentrația corespunzătoare (pg/ml sau ng/ml). Conținutul de proteine ​​celulare a fost măsurat prin testul Bradford [25].

Analiza lipidelor

Lipidele totale au fost extrase prin metoda Folch [26]. Separarea fracțiilor lipidice, PL, TAG și acizii grași neesterificați (NEFA), din lipidele totale a fost efectuată după cum sa raportat anterior [27]. În țesutul cerebral, fracțiile TAG și NEFA extrase nu au fost suficiente pentru măsurarea acidului gras.

Alicote au fost ușor saponificate așa cum s-a descris anterior [28] pentru a obține acizi grași liberi pentru analiza HPLC. Separarea acizilor grași nesaturați a fost efectuată cu un sistem HPLC Agilent 1100 (Agilent, Palo Alto, California, SUA) echipat cu un detector de matrice de diode, după cum sa raportat anterior [29]. N-aciletanolamidele și 2-acilglicerolii au fost măsurate așa cum s-a descris anterior [30]. Deoarece acizii grași saturați sunt transparenți la detectarea UV, aceștia au fost măsurați după metilare, așa cum este descris în [31], a acizilor grași liberi obținuți așa cum este descris mai sus, prin cromatografie gazoasă așa cum este descris în [32].

Analize statistice

Diferențele statistice între cele două grupuri experimentale au fost evaluate cu testul t-student în care valorile P Fig. 1 , alimentarea cu dieta Hsn-2 PA a dus la o eficiență nutritivă semnificativ mai mare, cu un aport mai mic de alimente, chiar dacă nu semnificativ, în ceea ce privește șobolanii hrăniți cu Lsn-2 PA.