STUDIU DE LABORATOR

  • Articol complet
  • Cifre și date
  • Referințe
  • Citații
  • Valori
  • Reimprimări și permisiuni
  • PDF

Abstract

INTRODUCERE

Amlodipina este unul dintre cei mai frecvenți antagoniști ai calciului și este utilizată la populațiile hipertensive din întreaga lume. Amlodipina este un antagonist al dihidropiridinei de calciu care inhibă fluxul transmembranar de ioni de calciu în mușchiul neted vascular. 11 Este utilizat clinic ca vasodilatator arterial periferic care acționează direct asupra mușchiului neted vascular pentru a determina o reducere a rezistenței vasculare periferice și o reducere a tensiunii arteriale. Unul dintre efectele medicamentelor din grupul dihidropiridină este efectele lor diuretice slabe. 12

complet

S-a raportat că antagoniștii de calciu au avut un efect protector împotriva producției de calculi renali și un efect curativ asupra calculilor renali existenți. 13 În plus, s-a afirmat că amlodipina are un efect de depozitare a oxalatului în rinichi la șobolanii hiperoxalurici normotensivi. 14

Prin urmare, în acest studiu, sa urmărit studierea efectelor biochimice și histopatologice ale amlodipinei în modelul de urolitiază indus de EG în urina de șobolan, serul și țesutul renal.

MATERIALE ȘI METODE

Produse chimice

Amlodipina (Norvasc, comprimat de 5 mg) a fost achiziționată de la Pfizer (Istanbul, Turcia), iar sodiul tiopental (sodiu pentotal, 1 g) a fost achiziționat de la Abbott, în Istanbul, Turcia. Toate celelalte substanțe chimice au fost obținute de la Sigma Co. (Cream Ridge, NJ, SUA).

Animale experimentale

Un total de 24 de șobolani Sprague-Dawley masculi, cu o greutate de 180-200 g, au fost folosiți în experimente. Experimentele au fost efectuate în conformitate cu normele etice aprobate de Comitetul Etic al Centrului de Cercetare și Învățare a Animalelor Experimentale (nr: B.30.2.ATA.0.23.85-71). Șobolanii au fost obținuți de la Centrul de Cercetare și Aplicare Medicală și Experimentală (ATADEM), Erzurum, Turcia. Au fost păstrate în condiții standard de laborator în cicluri de lumină naturală și întuneric. Animalele au fost hrănite cu o dietă normală și apă ad libitum înainte de experimente.

Protocoale experimentale pentru urolitiaza indusă de EG și AC la șobolani

Șobolanii au fost împărțiți în patru grupuri (6 șobolani per grup) și toate grupurile au fost menținute folosind furaje comerciale peletate. Pentru a induce formarea cristalelor de CaOx, animalele au fost expuse la 1% EG și 1% AC în apa de băut timp de 21 de zile. Grupurile experimentale sunt rezumate în Tabelul 1.

Publicat online:

Tabelul 1. Protocol experimental pentru urolitiază și grupuri de tratament.

În grupul de control intact (grupa 1), animalelor li s-a dat apă de la robinet ca apă potabilă timp de 21 de zile. Animalele din grupul de urolitiază (grupul 2) au fost expuse la 1% EG cu 1% AC în apa de băut timp de 21 de zile. În grupul cu amlodipină (5 mg/kg) (grupa 2), șobolanilor li s-a administrat oral amlodipină (5 mg/kg) zilnic timp de 21 de zile. Acest grup a primit, de asemenea, apă de la robinet în timpul experimentului. În grupul de tratament cu amlodipină (grupa 4), animalele au fost expuse la 1% EG și 1% AC în apa de băut și o doză de 5 mg/kg de amlodipină dizolvată cu soluție salină a fost administrată zilnic prin gavaj timp de 21 de zile (Tabelul 1). Toți șobolanii au fost cântăriți săptămânal.

Probele de urină de 24 de ore au fost colectate cu azidă de sodiu ca conservant de la șobolani adăpostiți în cuști metabolice în a 21-a zi a experimentului. Sângele a fost colectat în tuburi fără anticoagulant pentru probele de ser. Serul a fost separat prin centrifugare. La sfârșitul perioadei experimentale, animalele au fost sacrificate folosind doze mari de sodiu tiopental (50 mg/kg), iar abdomenele lor au fost deschise și rinichii au fost îndepărtați. Rinichii au fost fixați în formol 10%.

Analize biochimice în urină și ser

Probele de ser și urină separate au fost utilizate pentru a determina nivelurile de calciu, potasiu și magneziu utilizând un auto-analizator (Comas 6000; Roche, Tokyo, Japonia). Măsurătorile au fost în mg/dL pentru toate cele trei minerale.

Microscopie și chimie a urinei

Nivelurile de CaOx și pH din probele de urină au fost determinate utilizând un analizor automatizat de microscopie de urină IQ-200 și un analizor automat de chimie a urinii Aution Max AX-4280. Pentru analiza sedimentelor de urină, s-au estimat 10 câmpuri de mare putere (HPF), iar numărul a fost dat ca medie pe HPF. Aceste valori au fost normalizate la un volum dat.

Proceduri histologice pentru microscopie ușoară

Fiecare rinichi a fost fixat în soluție de formalină 10% timp de 48-55 de ore, deshidratat într-o serie de alcool gradat, încorporat în ceară de parafină și secționat în serie folosind un microtom (Leica RM2125RT). Secțiunile au fost colorate folosind colorare H&E (hematoxilină și eozină) și fotografii au fost făcute folosind un microscop cu lumină cu atașament pentru cameră (Nikon Eclipse E600, Tokyo, Japonia).

Analize statistice

Analiza statistică a fost efectuată utilizând analiza unică a varianței (ANOVA) urmată de testul LSD utilizând pachetul software de statistici IBM SPSS, versiunea 19.00. p-Valori ale investigației biochimice și histopatologice a amlodipinei în modelul șobolanilor de urolitiază indusă de etilen glicol

Publicat online:

Tabelul 2. Nivelurile de Ca, P și Mg în serul grupurilor experimentale.

Publicat online:

Tabelul 3. Nivelurile de Ca, P și Mg din urina grupurilor experimentale.

Oxalat de calciu în urină

Determinarea analizorului de microscopie automată a urinei a arătat că după perioada experimentală de 21 de zile, nu a existat nicio formare de cristale în urină din grupurile de control intacte și amlodipină singură. În timp ce eșantionul de urină a relevat prezența cristalelor abundente de CaOx, iar agregatele au fost destul de vizibile în multe cazuri în grupurile de urolitiază plus amlodipină și urolitiază (Figura 1). Nivelurile de CaOx în urină în grupurile de urolitiază plus amlodipină și urolitiază au crescut semnificativ (p Investigația biochimică și histopatologică a amlodipinei în modelul șobolanilor de urolitiază indusă de etilen glicol

Publicat online:

Figura 1. Nivelurile de CaOx în urină la șobolanii cu urolitiază tratați cu amlodipină.

Note: Fiecare valoare este medie ± SD pentru 6 șobolani din fiecare grup. Analiza statistică a fost efectuată utilizând un singur sens ANOVA urmat de testul LSD. Controlul intact, amlodipina intactă și grupurile de amlodipină plus urolitiază au fost comparate cu grupul de urolitiază. * Semnificativ la p Figura 1. Nivelurile de CaOx în urină la șobolanii cu urolitiază tratați cu amlodipină.

Note: Fiecare valoare este medie ± SD pentru 6 șobolani din fiecare grup. Analiza statistică a fost efectuată utilizând un singur sens ANOVA urmat de testul LSD. Controlul intact, amlodipina intactă și grupurile de amlodipină plus urolitiază au fost comparate cu grupul de urolitiază. * Semnificativ la p Investigația biochimică și histopatologică a amlodipinei în modelul șobolanilor de urolitiază indusă de etilen glicol

Publicat online:

Figura 2. Modificări procentuale în greutatea corporală a grupurilor de șobolani pe parcursul a 21 de zile de la experiment.

Note: Fiecare valoare este medie pentru 6 șobolani din fiecare grup. Analiza statistică pentru greutatea celui de-al treilea sfârșit de săptămână a fost efectuată utilizând un singur sens ANOVA urmat de LSD. Controlul intact, amlodipina intactă și grupurile de urolitiază plus amlodipină au fost comparate cu grupul de urolitiază. * Semnificativ la p Figura 2. Modificări procentuale în greutatea corporală a grupurilor de șobolani pe parcursul a 21 de zile de la experiment.

Note: Fiecare valoare este medie pentru 6 șobolani din fiecare grup. Analiza statistică pentru greutatea celui de-al treilea sfârșit de săptămână a fost efectuată utilizând un singur sens ANOVA urmat de LSD. Controlul intact, amlodipina intactă și grupurile de urolitiază plus amlodipină au fost comparate cu grupul de urolitiază. * Semnificativ la p Investigația biochimică și histopatologică a amlodipinei în modelul șobolanilor de urolitiază indusă de etilen glicol

Publicat online:

Figura 3. Zona medulară a țesutului renal în (A) grupul martor intact, (B) grupul intact amlodipină, (C) grupul urolitiază și (D) amlodipina plus grupul urolitiaza.

Notă: Depozitele de cristal (săgeata albă și zona pătrată) sunt observate în zona intratubulară și structurile tubulare degenerative din zona medulară a grupului model (C) urolitiază și a grupului (D) amlodipină plus urolitiază. Bară de scală: 50 μm.

Figura 3. Zona medulară a țesutului renal în (A) grupul martor intact, (B) grupul intact amlodipină, (C) grupul urolitiază și (D) amlodipina plus grupul urolitiaza.

Notă: Depozitele de cristal (săgeata albă și zona pătrată) sunt observate în zona intratubulară și structurile tubulare degenerative din zona medulară a grupului model (C) urolitiază și a grupului (D) amlodipină plus urolitiază. Bară de scală: 50 μm.

DISCUŢIE

Majoritatea pietrelor la rinichi sunt formate din cristale de CaOx din sistemul urinar al pacienților cu urolitiază. În țările în care există, de asemenea, un aport ridicat de oxalați din frunzele și legumele locale, oxalatul urinar este crescut și, ca rezultat, pietrele de urină cu acid amoniu conțin adesea și CaOx. Pe măsură ce nivelul de trai crește, în special în zonele urbane din țările în curs de dezvoltare mai bogate, la fel crește și incidența pietrelor din tractul urinar superior caracterizate din ce în ce mai mult de pietre CaOx care sunt adesea amestecate cu fosfat de calciu și acid uric. Obligado și Goldfarb au raportat că pacienții cu hipertensiune arterială pot avea anomalii în metabolismul renal al calciului, deși autorii au raportat, de asemenea, că datele care confirmă această ipoteză au fost inconsistente. Domingos și Serra au raportat că nefrolitiaza a fost asociată cu o prevalență crescută a bolilor cardiovasculare, în special cu hipertensiune, obezitate și diabet zaharat. 10

Prevalența hipertensiunii este de aproximativ 15-20% în populația generală și de aproximativ 26% în populația adultă. 16 Prevalența hipertensiunii arteriale crește odată cu înaintarea în vârstă. De exemplu, aproximativ 50% dintre persoanele cu vârste cuprinse între 60 și 69 de ani au hipertensiune, iar prevalența este crescută odată cu vârsta. 17 Sunt disponibile diverse tratamente eficiente pentru hipertensiune. Obiectivele de bază ale tratamentului includ reducerea tensiunii arteriale crescute, îmbunătățirea controlului tensiunii arteriale, tratarea hipertensiunii rezistente, reducerea factorilor de risc cardiovascular asociați și reducerea leziunilor renale. Mulți agenți sunt folosiți pentru tratamentul hipertensiunii. Dintre acestea, amlodipina este unul dintre cei mai populari agenți pentru pacienții cu hipertensiune și este utilizată în întreaga lume.

Puține studii sunt prezente cu privire la efectul agoniștilor de calciu în modelele de urolitiază induse de EG. În studiile clinice și experimentale, sa afirmat că antagoniștii de calciu au avut un efect parțial protector și curativ asupra calculilor renali. 13,14,18,19 Cu toate acestea, în unele studii s-a sugerat că amlodipina a cauzat hiperoxalurie. 18 Un studiu experimental a afirmat că amlodipina a scăzut hiperoxaluria și a avut un efect protector în sistemul tubular renal. Cu toate acestea, am stabilit experimental că amlodipina a arătat un efect contrar studiului anterior într-un model de piatră CaOx indusă de EG și AC. Acest rezultat este în conformitate cu rezultatele histopatologice și biochimice (Figura 3). Cu alte cuvinte, s-a demonstrat o creștere a hiperoxaluriei cu utilizarea amlodipinei în studiul nostru.

Este clar că riscul de boală de piatră crește odată cu deshidratarea. 20 Prin urmare, medicii le sugerează pacienților să ia multă apă pentru a crește cantitatea de urină. 21 În studiul nostru, am constatat că grupul amlodipină pierde mult mai mult în greutate decât celelalte grupuri. Ca rezultat al metodei noastre experimentale, atât EG, cât și AC ar fi putut provoca o deshidratare puternică la șobolani. În grupul cu urolitiază plus amlodipină, deshidratarea crescută ar fi putut fi cauzată de efectul sinergic al EG/AC și efectul diuretic al amlodipinei, în acest studiu experimental. 12.22 Având în vedere efectul său diuretic, amlodipina ar fi putut promova acumularea de pietre.

CONCLUZIE

S-a demonstrat că amlodipina poate crește susceptibilitatea la urolitiază prin creșterea hiperoxaluriei și a hipercalciuriei. Prin urmare, acest studiu a demonstrat experimental că amlodipina nu are efecte pozitive asupra formării de pietre induse de EG la șobolani, spre deosebire de studiile anterioare. Ar trebui efectuate studii clinice și experimentale suplimentare pentru a clarifica această problemă.

CONFIRMARE

Această cercetare a fost realizată în Laboratorul de cercetare în științe medicale de bază și clinice și dezvoltarea medicamentelor de la Universitatea Ataturk, Școala de Medicină, Departamentul de farmacologie, 25240, Erzurum, Turcia.

Declarație de interes

Autorii nu raportează niciun conflict de interese. Numai autorii sunt responsabili pentru conținutul și scrierea acestui articol.

Această lucrare a fost susținută de Consiliul de Cercetare Științifică al Universității Ataturk (BAP) (numărul grantului BAP: 2011/293).

Tabelul 1. Protocol experimental pentru urolitiază și grupuri de tratament.

Tabelul 2. Nivelurile de Ca, P și Mg în serul grupurilor experimentale.

Note: Fiecare valoare este medie ± SD pentru 6 șobolani din fiecare grup. Analiza statistică a fost efectuată utilizând un singur sens ANOVA urmat de testul LSD. Controlul intact, amlodipina intactă și grupurile de urolitiază plus amlodipină au fost comparate cu grupul de urolitiază. Ca, calciu; P, fosfat; Mg, magneziu.

* Semnificativ la p Tabelul 3. Nivelurile de Ca, P și Mg din urina grupurilor experimentale.

Note: Fiecare valoare este medie ± SD pentru 6 șobolani din fiecare grup. Analiza statistică a fost efectuată utilizând ANOVA urmată de testul LSD. Controlul intact, amlodipina intactă și grupurile de urolitiază plus amlodipină au fost comparate cu grupul de urolitiază.