Abstract

Principalul obstacol în calea obținerii unui rezultat favorabil al măririi țesuturilor moi după transplantul de grăsime autolog este rezultatele imprevizibile pe termen lung, datorită ratei ridicate de absorbție în locul altoit. În prezent, aspirații adiposi pot fi utilizați numai pentru altoirea imediată a grăsimii autologe în timpul aceleiași proceduri în care se efectuează liposucția; prin urmare, aspirații adiposi obținuți din procedură sunt de obicei aruncați. a fost o dorință puternică atât a chirurgilor, cât și a pacienților să poată păstra aspirații adiposi, dacă ar fi disponibilă o tehnică optimă, pentru potențiale aplicații viitoare. În ultimii ani, crioconservarea țesutului adipos a fost studiată pe larg în laboratorul autorului. Câteva descoperiri din această cercetare tradițională interesantă vor duce la dezvoltarea unei metode fiabile pentru conservarea pe termen lung a țesutului adipos în viitor. în plus, conservarea cu succes pe termen lung a țesutului adipos poate deschide o nouă eră în regenerarea țesutului legat de țesutul adipos.

adipos

Transplantul autolog de grăsime (AFT) în chirurgia plastică cosmetică și reconstructivă a revoluționat tratamentul chirurgical pentru mărirea țesuturilor moi a feței, a mâinilor sau a altor părți ale corpului în ultimul deceniu. Deoarece liposucția a câștigat popularitate recent, ar trebui reconsiderată o sursă de materiale pentru grefă pentru AFT. Aspiratele adipoase obținute prin liposucție au multe proprietăți de dorit pentru mărirea țesuturilor moi, deoarece sunt abundente, ușor disponibile, ieftine, compatibile cu gazda și pot fi recoltate cu ușurință și în mod repetat. 1 Până în prezent, principalul obstacol în calea obținerii unui rezultat favorabil al măririi țesuturilor moi după AFT este rezultatele imprevizibile pe termen lung, datorită ratei ridicate de absorbție (până la 70% din volumul inițial injectat) în locul altoit. 2 Această rată ridicată de absorbție necesită adesea supracorecție sau proceduri repetate în zona dorită, provocând disconfort pacientului, aspect mai puțin decât optim, costuri ridicate și morbiditate sau traume ale siturilor donatorului. 1, 2

În prezent, aspirații adiposi pot fi utilizați numai pentru altoirea imediată a grăsimii autologe în timpul aceleiași proceduri în care se efectuează liposucția; prin urmare, aspirații adiposi obținuți din procedură sunt de obicei aruncați. A fost o dorință puternică atât a chirurgilor plastici, cât și a pacienților să păstreze aspirații adiposi, dacă ar exista o tehnică optimă, pentru potențiale aplicații viitoare. Odată cu nivelul de perfecțiune, chirurgii plastici au ajuns să se aștepte la rezultatele chirurgicale, este foarte solicitată opțiunea de conservare și depozitare a țesuturilor grase recoltate anterior pentru o posibilă utilizare viitoare sau pentru o aplicare repetată.

În această revizuire, autorul va rezuma studiile anterioare privind crioconservarea țesutului adipos, dezvoltarea unui protocol de crioconservare pentru țesutul adipos și constatările din mai multe studii recente. În plus, vor fi discutate perspective viitoare asupra acestui domeniu existent al cercetării translaționale.

Studii anterioare în crioconservarea țesutului adipos

Până de curând, doar câteva studii experimentale empirice au examinat rolul depozitării congelate pentru conservarea pe termen scurt a aspiraților adiposi obținuți prin liposucție la o temperatură relativ ridicată (+ 1 ° C până la -18 ° C). Într-un studiu, țesutul adipos uman obținut prin liposucție a fost depozitat într-un frigider menajer la -18 ° C timp de 2 săptămâni. După decongelare, grăsimea a fost injectată la șoareci goi. În grupul de control, grăsimea a fost injectată imediat după recoltare. Grăsimea injectată a supraviețuit atât în ​​grupul de studiu, cât și în grupul de control. Nu s-au găsit diferențe semnificative între grupurile de greutate, volum sau histologie ale grefei de grăsime. 3 Într-un alt studiu, echipamentele de refrigerare sau congelare disponibile în comerț au fost folosite pentru depozitarea grăsimii subcutanate autologe recoltate prin aspirație la șobolanii Sprague-Dawley. Grăsimea aspirată a fost depozitată la -16 ° C (congelată) sau 1 ° C (refrigerată) pentru o perioadă de 1 sau 2 săptămâni și a fost apoi implantată subcutanat la șobolani. O comparație histologică a demonstrat în mod clar o scădere a adipocitelor viabile și o creștere a semnelor de inflamație și necroză a grăsimilor la animalele care au primit grăsimi conservate versus implantare imediată de grăsime. 4 Aceste modificări devin mai severe odată cu creșterea duratei de depozitare și a utilizării refrigerării la congelare.

În laboratorul nostru, a fost realizat un studiu preliminar pentru a evalua efectul și rolul temperaturii numai pentru depozitarea țesutului adipos. În aceste studii, viabilitatea aspiraților adiposi a fost evaluată printr-un test de glicerol-3-fosfat dehidrogenază (G3PDH) atât la 4 ° C, cât și la -20 ° C. După 2 săptămâni de depozitare, viabilitatea aspiraților adiposi a scăzut cu aproximativ 80% la 4 ° C. Cu toate acestea, viabilitatea aspiraților adiposi a scăzut doar cu aproximativ 5% la -20 ° C. Mai mult, inițial s-au efectuat o serie de experimente cu diferite tipuri și concentrații de agenți crioprotectori și diferite combinații ale acestora pentru a determina care ar fi cel mai bun agent crioprotector care poate fi utilizat în special pentru țesuturile adipoase. Un număr de protocoale de îngheț și dezgheț au fost, de asemenea, evaluate pentru țesutul adipos în timpul studiilor preliminare. 10

Deși câteva studii au arătat rezultate preliminare încurajatoare pentru crioconservarea grefelor autologe de grăsime pentru o posibilă aplicare viitoare, tehnica descrisă în studiu poate fi utilizată doar pentru o conservare pe termen scurt (câteva zile sau săptămâni) și poate să nu fie optimă din cauza proces necontrolat de răcire/încălzire și lipsa utilizării unui agent crioprotector. Cu aplicarea tehnicilor moderne de crioconservare, se poate realiza o conservare mai bună pe termen lung a țesuturilor adipoase. O astfel de metodă va permite probabil depozitarea grefelor de grăsime luni sau ani (sub -85 ° C) sau mai mult de 10 ani (la -196 ° C în azot lichid).

Dezvoltarea unui protocol de crioconservare pentru grefele de grăsime

Tehnici moderne în crioconservare.

Tehnica modernă de crioconservare permite stocarea pe termen lung a celulelor și țesuturilor vii care pot avea multe aplicații clinice potențiale, cum ar fi transfuzia de sânge, transplantul de măduvă osoasă, fertilizarea in vitro, grefele vasculare, grefele osoase și grefele cutanate. 11 Etapele majore ale procesului de crioconservare pot fi rezumate după cum urmează: (1) adăugați agenți crioprotectori la celule/țesuturi înainte de răcire, (2) răciți celulele/țesuturile într-un ritm controlat la o temperatură scăzută la care sunt stocate celulele/țesuturile, (3) încălziți celulele/țesuturile și (4) eliminați agenții crioprotectori din celule/țesuturi după decongelare. 12 Rata optimă de răcire pentru supraviețuirea celulei ar trebui să fie suficient de lentă pentru a evita formarea de gheață intracelulară, dar suficient de rapidă pentru a minimiza deteriorarea celulei.

Alegeri ale agenților crioprotectori.

Stabilirea unui protocol de îngheț și dezgheț.

Protocolul de înghețare și dezghețare descris aici reprezintă cea mai bună metodă posibilă dezvoltată pentru crioconservarea țesutului adipos și a fost utilizat în studiile noastre ulterioare. 14 - 16 aspirați adiposi proaspeți după preparare au fost introduși într-un flacon și amestecați cu soluția combinată de DMSO (în 0,5 molare) și trehaloză (în 0,2 molare) într-un raport unu la unu. După adăugarea agenților crioprotectori, flaconul a fost plasat la temperatura camerei timp de 10 minute și apoi plasat într-o baie de metanol (Kinetics, Stone Ridge, NY). Sistemul de îngheț a fost programat să se răcească la 1∼2 ° C pe minut de la 22 ° C la -30 ° C fără formarea de gheață artificială. Flaconul a fost apoi transferat în azot lichid (-196 ° C) după ce a ajuns la -30 ° C pentru conservarea pe termen lung.

Înainte de decongelare, flaconul care conține aspirați adiposi crioconservați a fost preluat din rezervorul de azot lichid și plasat la temperatura camerei timp de 2 minute pentru a lăsa vaporii de azot lichid să iasă din flacon. Flaconul a fost apoi aruncat într-o baie de apă agitată la 37 ° C până când aspirații adiposi conservați au fost complet dezghețați.