Ming Liu

a Core Research Program 1515, Hunan Collaborative Innovation Centre for Utilization Botanical Functional Ingredients, Hunan Agricultural University, Changsha, 410128, China

caprifoi

Jijun Tan

a Core Research Program 1515, Hunan Collaborative Innovation Center for Utilization of Botanical Functional Ingredients, Hunan Agricultural University, Changsha, 410128, China

Ziyu He

a Core Research Program 1515, Hunan Collaborative Innovation Center for Utilization of Botanical Functional Ingredients, Hunan Agricultural University, Changsha, 410128, China

Xi He

a Core Research Program 1515, Hunan Collaborative Innovation Center for Utilization of Botanical Functional Ingredients, Hunan Agricultural University, Changsha, 410128, China

De-Xing Hou

a Core Research Program 1515, Hunan Collaborative Innovation Centre for Utilization Botanical Functional Ingredients, Hunan Agricultural University, Changsha, 410128, China

b Școala Absolventă Unită de Științe Agricole, Universitatea Kagoshima, Kagoshima, 890-0065, Japonia

Jianhua He

a Core Research Program 1515, Hunan Collaborative Innovation Center for Utilization of Botanical Functional Ingredients, Hunan Agricultural University, Changsha, 410128, China

Shusong Wu

a Core Research Program 1515, Hunan Collaborative Innovation Center for Utilization of Botanical Functional Ingredients, Hunan Agricultural University, Changsha, 410128, China

Abstract

Caprifoiul albastru este bogat în polifenoli și primește recent atenție datorită potențialelor sale proprietăți antioxidante și antiinflamatorii. Boala ficatului gras nealcoolic (NAFLD) este principala cauză a bolilor hepatice cronice care dezvoltă inflamație hepatică și sindrom metabolic. Prezentul studiu își propune să studieze efectul extractului de caprifoi albastru (BHE) asupra depunerii de grăsimi și peroxidarea lipidelor hepatice într-un model de șoarece indus de dietă bogată în grăsimi (HFD). Șoarecii au fost hrăniți cu o dietă normală (ND) sau cu un HFD conținând 0,5% sau 1% BHE sau nu timp de 45 de zile. Secțiunile hepatice au fost colorate prin colorare hematoxilină-eozină. Lipidele serice au fost măsurate cu ajutorul unui analizor clinic. Insulina a fost examinată prin ELISA, iar proteinele hepatice au fost detectate prin Western blot. Suplimentarea alimentară a obezității induse de HFD și depunerea de grăsime hepatică în funcție de doză BHE. Mai mult, BHE a îmbunătățit metabolismul glucozei prin creșterea sensibilității la insulină și a stresului oxidativ atenuat potențial prin reglarea crescută a factorului nuclear (eritroid-derivat 2) -com 2 (Nrf2) - cale intermediată.

1. Introducere

Ficatul este unul dintre cele mai importante organe metabolice și este esențial pentru digestie, în special pentru descompunerea grăsimilor. Boala ficatului gras nealcoolic (NAFLD) este principala cauză a bolilor hepatice cronice care dezvoltă inflamație hepatică și sindrom metabolic. Prevalența NAFLD variază de la 20% la 30% în populația generală și de la 75% la 100% la indivizii obezi (Henao-Mejia și colab., 2012). Boala ficatului gras nonalcoolic cuprinde ficatul gras nonalcoolic (NAFL) și steatohepatita nealcoolică (NASH) (Machado și Diehl, 2016). Ficatul gras nealcoolic este reversibil și de obicei rămâne asimptomatic, dar acumularea de grăsime poate dezvolta NASH ducând la ciroză, hipertensiune portală, carcinom hepatocelular și mortalitate crescută (Rafiq și colab., 2009). Factorii care conduc la progresia de la NAFL la NASH sunt încă slab înțelese, dar peroxidarea lipidelor este un proces cheie potențial care promovează fibroza conform biopsiilor hepatice de la pacienții umani (MacDonald și colab., 2001).

Pe baza informațiilor legate de caprifoi albastru și potențiala patogenie a NAFLD, prezentul studiu își propune să studieze efectul BHE asupra depunerii de grăsimi și a peroxidării lipidelor hepatice într-un model de șoarece indus de dietă bogată în grăsimi (HFD).

2. Materiale și metode

2.1. Substanțe chimice și reactivi

2.2. Modelul mouse-ului

Experimentul pe animale a fost realizat urmând liniile directoare ale Comitetului pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de la Universitatea Kagoshima (permis nr. A12005). Douăzeci de șoareci C57BL/6N (bărbați, cu vârsta de 5 săptămâni) de la Japan SLC Inc. (Shizuoka, Japonia) erau adăpostite separat în cuști cu așchii de lemn pentru așternut sub temperatură controlată (25 ° C) și lumină (12 h lumină/zi) și aveau acces gratuit la hrană și apă. Șoarecii au fost cazați timp de 1 săptămână și apoi au fost împărțiți în mod aleatoriu în 5 grupuri (n = 4): grupul de dietă normală (ND), grupul ND + BHE1%, grupul HFD, grupul HFD + BHE0,5% și grupul HFD + BHE1% . Șoarecii au fost hrăniți cu dietele corespunzătoare, așa cum este descris în tabelul 1. Apendicele. Perioada experimentală a fost de 45 d, iar greutatea șoarecilor a fost măsurată pe d 0, 30 și 45.

2.3. Determinarea lipidelor, glucozei și insulinei

Sângele șoarecilor a fost colectat din inimă la d 45, iar serul a fost obținut prin centrifugare (1.500 × g, 10 min) după coagulare. Nivelurile serice de triacilglicerol (TG), colesterol total (T-cho), colesterol lipoproteic de înaltă densitate (HDL-C) și glucoză au fost măsurate folosind un analizor automat pentru chimie clinică (Arkray, Kyoto, Japonia). Nivelul de insulină din ser a fost măsurat cu un kit ELISA (Thermo Fisher Scientific Inc., Rockford, IL, SUA), conform manualului producătorului. Analiza modelului de homeostazie a rezistenței la insulină (HOMA-IR) a fost calculată folosind următoarea formulă (Matthews și colab., 1985):

HOMA-IR = insulină de post (mU/L) × glucoză de post (mg/dL)/405.

2.4. Determinarea substanțelor reactive ale acidului tiobarbituric (TBARS)

Nivelul TBARS în ficatul șoarecilor a fost măsurat utilizând un kit de testare (BioAssay Systems, Hayward, CA, SUA) conform manualului producătorului.

2.5. Histologie hepatică

Ficatele șoarecilor din fiecare grup au fost colectate și secționate utilizând un sistem de microtom înghețat (Yamato, Saitama, Japonia) urmează instrucțiunile producătorului, iar secțiunile hepatice au fost colorate prin colorarea hematoxilin-eozinei (H&E) înainte de a fi observate la microscopul de fluorescență, Tokyo, Japonia).

2.6. Extracția proteinelor și Western blot

Proteinele totale ale ficatului au fost obținute așa cum s-a descris anterior (Wu și colab., 2017b). Pe scurt, cantități egale (în jur de 0,2 g) de țesuturi hepatice au fost omogenizate în tampon RIPA (0,1 g/ml) utilizând un omogenizator Speed-Mill PLUS (Analytik Jena, Jena, Germania). Omogenatul a fost apoi centrifugat la 13.500 × g timp de 5 minute la 4 ° C și proteinele supernatante au fost colectate. După măsurarea concentrației de proteine, proteinele au fost fierte în tampon de probă de dodecil sulfat de sodiu (SDS) timp de 5 minute, iar apoi cantități egale de proteine ​​(40 μg) au fost rulate pe o electroforeză pe gel de dodecil sulfat de sodiu-poliacrilamidă 10% (SDS- PAGE) gel înainte de transferul electroforetic la membranele fluorurii de poliviniliden (PVDF) (GE Healthcare, Buckinghamshire, Marea Britanie). Membrana a fost apoi incubată cu anticorp primar specific (anticorpi Nrf2, HO-1, MnSOD, GAPDH) și anticorp secundar conjugat HRP anti-iepure, urmat de detectarea cu sistemul LumiVision PRO (TAITEC Co., Saitama, Japonia).

2.7. analize statistice

Rezultatele sunt prezentate ca medii individuale ± SD, iar nivelurile de proteine ​​sunt prezentate ca pliuri de inducție în raport cu cel din grupul ND măsurat prin densitometrie. Diferențele semnificative între grupuri au fost analizate prin teste de analiză a varianței (ANOVA), urmate de testele LSD ale lui Fisher și testele cu intervale multiple ale lui Duncan prin utilizarea programului statistic SPSS (versiunea 19.0, IBM Corp., Armonk, NY, SUA). Diferențele au fost considerate semnificative statistic la P Fig. 1 A. Nu există nicio diferență semnificativă între greutatea inițială a șoarecilor din fiecare grup (P> 0,05). Cu toate acestea, greutatea corporală a șoarecilor hrăniți cu HFD este mai mare (P Fig. 1 B, raportul dintre grăsimea intraabdominală și greutatea corporală este, de asemenea, crescut semnificativ (P 0,05) între greutatea șoarecilor din grupul ND și grupul ND + BHE1%. Greutatea ficatului la șoarecii alimentați cu HFD este mai mare (P Fig. 2 A, nivelul TG este semnificativ (P 0,05, Anexa Fig. 2). Secțiunea hepatică este prezentată în Fig. 2 B; HFD a provocat acumularea de grăsime în ficat, dar evident scăzută prin suplimentarea cu 0,5% sau 1% BHE.