W.H. și A.M. a contribuit în mod egal la această lucrare.

hepatice

Figurile și tabelele articolelor

Cifre

Efectele depleției KC asupra trigliceridelor hepatice, DAG, ceramidei și colesterolului ca răspuns la o dietă bogată în grăsimi sau bogată în zaharoză. Șobolanii Wistar masculi săraci de KC sau șobolanii martor au fost expuși la o dietă bogată în grăsimi sau bogată în zaharoză timp de 2 săptămâni, așa cum este descris în proiectarea și metodele de cercetare. Ulterior, animalele au fost ucise după un post peste noapte, ficatul a fost izolat și s-a determinat conținutul de trigliceride (A), DAG (B), colesterol (C) și ceramidă (D) în ficat. Datele sunt prezentate ca mijloace ± SE. Este indicată semnificația statistică. n = minimum șase în fiecare grup.

Efectele epuizării KC asupra dezvoltării rezistenței la insulină hepatică pe o dietă bogată în grăsimi sau bogată în zaharoză. Șobolanii Wistar masculi epuizați de KC sau șobolanii martor au fost expuși la o dietă bogată în grăsimi (A și B) sau bogată în zaharoză (C și D) timp de 2 săptămâni. Ulterior, animalele au fost postite peste noapte și apoi au suferit 4 mU · kg -1 -1 min -1 clemă euglicemică-hiperinsulinemică în prezența [3-H 3] -glucozei pentru măsurarea sensibilității la insulină hepatică așa cum este descris în proiectarea și metodele cercetării. S-au evaluat producția de glucoză hepatică (A și C) și suprimarea insulinei producției de glucoză hepatică (B și D). Datele sunt prezentate ca mijloace ± SE. Este indicată semnificația statistică. n = minimum patru în fiecare grup.

Depleția KC de către GdCl3 în ficat și țesutul adipos. Șobolanii masculi Wistar au fost epuizați de KC prin administrarea de GdCl3 așa cum este descris în proiectarea și metodele de cercetare. Ulterior, ficatul și țesutul adipos au fost izolate și prezența macrofagelor a fost determinată prin evaluarea qRT-PCR a nivelurilor CD68/ED1 și F4/80 mARN (A și B) și numărarea celulelor CD68/ED1-pozitive după colorarea imunohistochimică a ficatului și secțiuni de țesut adipos (C - F), așa cum este descris în proiectarea și metodele de cercetare. Este indicată semnificația statistică. n = minimum șase în fiecare grup pentru qRT-PCR și n = 3 pentru analiza imunohistochimică a celulelor CD68/ED1-pozitive. (O reprezentare digitală de înaltă calitate a acestei cifre este disponibilă în numărul online.)

Exprimarea genelor metabolismului lipidic în ficatul șobolanilor hrăniți cu SC, HF și HS, cu sau fără administrare de GdCl3. Șobolanii masculi Wistar au fost epuizați de KC prin administrarea de GdCl3 așa cum este descris în proiectarea și metodele cercetării. Ulterior, ficatul a fost izolat, ARN-ul a fost extras și expresia unui număr de gene ale metabolismului lipidic a fost determinată prin qRT-PCR. Este indicată semnificația statistică. n = minimum patru în fiecare grup.

Efectele KC polarizate M1 asupra oxidării și esterificării acizilor grași ai hepatocitelor și asupra acumulării trigliceridelor. Hepatocitele și KC-urile au fost izolate din ficatul șobolanului, placate și cultivate așa cum este descris în proiectarea și metodele de cercetare. Ulterior, efectele expunerilor indicate asupra oxidării acizilor grași, esterificării acizilor grași și nivelurilor trigliceridelor (A - C) și fosforilării ACC și AMPK (D - F) au fost evaluate așa cum au fost descrise în proiectarea și metodele cercetării. Datele sunt prezentate ca mijloace ± SE. Este indicată semnificația statistică. n = minimum șase în trei exemplare pentru fiecare măsurare metabolică. n = minimum patru pentru analiza ACC și AMPK.

Efectele KC polarizate M1 asupra capacității de răspuns la insulina hepatocitelor. Hepatocitele și KC-urile au fost izolate din ficatul șobolanului, placate și cultivate așa cum este descris în proiectarea și metodele de cercetare. După expunerile indicate, hepatocitele au fost incubate cu 100 nmol/l insulină timp de 10 minute și s-au preparat extracte de proteine ​​și fosforilarea receptorului de insulină (IR), fosforilarea IRS-1, activitatea PI 3-kinazei asociate cu IRS-1 și fosforilarea Akt au fost evaluate conform descrierii în proiectarea și metodele cercetării. Datele sunt prezentate ca mijloace ± SE. Este indicată semnificația statistică. n = minimum patru pentru fiecare condiție experimentală.

Expresia TNFα în KCs în ficat ca răspuns la dietele standard chow, bogate în grăsimi și bogate în zaharoză și secreția TNFα din KC izolate polarizate M1. Șobolanii masculi Wistar au fost expuși la o dietă bogată în grăsimi sau bogată în zaharoză timp de 2 săptămâni. Ulterior, ficății au fost izolați, secțiunile au fost pregătite și s-a efectuat colorarea imunofluorescentă pentru KC și TNFα (A), așa cum este descris în proiectarea și metodele de cercetare. Panoul din stânga prezintă celule CD68/ED1-pozitive (verde), panourile centrale prezintă celule TNFα-pozitive (roșu), iar panourile din dreapta arată imaginile îmbinate. În toate panourile, colorarea Hoechst a fost utilizată pentru a vizualiza nucleii celulelor (albastru). n = minimum trei. Pentru experimentele in vitro (B), hepatocitele și KC-urile au fost izolate din ficatul șobolanului, placate și cultivate așa cum se arată. După expunerile indicate, mediile au fost luate și TNFa a fost cuantificat prin test imunosorbent legat de enzime (ELISA). Datele sunt prezentate ca mijloace ± SE. Este indicată semnificația statistică. n = minimum trei în fiecare grup. (O reprezentare digitală de înaltă calitate a acestei cifre este disponibilă în numărul online.)

Efectele epuizării TNFα asupra metabolismului lipidelor hepatocitelor și asupra activității PI 3-kinazei stimulată de insulină. Hepatocitele și KC-urile au fost izolate din ficatul șobolanului, placate și cultivate așa cum este descris în proiectarea și metodele de cercetare. Ulterior, efectele expunerilor indicate asupra oxidării acizilor grași și a trigliceridelor în absența sau prezența unui anticorp neutralizant TNFα au fost evaluate așa cum este descris în proiectarea și metodele de cercetare (A). În experimente separate, hepatocitele au fost incubate cu 100 nmol/l insulină timp de 10 minute după expuneri similare cu cele din (A), au fost apoi preparate extracte de proteine ​​și activitatea PI 3-kinazei asociate IRS-1 a fost evaluată așa cum este descris în proiectarea cercetării. și metode (B). Datele sunt prezentate ca mijloace ± SE. Este indicată semnificația statistică. n = minimum șase pentru fiecare condiție experimentală, cu excepția trigliceridelor (n = 3).

Mese

Măsurători ale greutății corporale, grăsimilor epididimale și plasmelor la șobolanii tratați cu ser fiziologic sau GdCl3 expuși la diete NC, HF sau HS timp de 2 săptămâni

NC salină NC GdCl3HF salinăHF GdCl3HS salină HS GdCl3
Greutate corporală (g), ziua 0279 ± 3278 ± 8289 ± 3288 ± 7254 ± 14270 ± 9
Greutate corporală (g), ziua 21375 ± 12351 ± 9371 ± 3382 ± 7352 ± 14346 ± 9
Aport alimentar (Kcal/zi)100 ± 296 ± 3110 ± 3104 ± 395 ± 389 ± 5
Grăsimi epididimale (g)6,2 ± 0,35,4 ± 0,36,6 ± 0,26,3 ± 0,85,2 ± 0,55,3 ± 0,5
Glucoza (mg/dl)
Înainte de clemă88 ± 5N/A96 ± 789 ± 592 ± 588 ± 7
După clemă87 ± 7N/A101 ± 597 ± 398 ± 893 ± 4
Insulină (ng/ml)
Înainte de clemă0,5 ± 0,20,6 ± 0,10,8 ± 0,50,8 ± 0,30,5 ± 0,20,6 ± 0,1
După clemă4,5 ± 1N/A5,5 ± 0,94,0 ± 1,25,1 ± 0,84,5 ± 1,3
TG plasmatice (mg/dl)51,2 ± 0,846,7 ± 6,263,4 ± 5,7 *76,2 ± 8,6 *91,6 ± 8,0 *109,9 ± 9,0 *
FFA plasmatice (mM)0,6 ± 0,10,4 ± 0,10,7 ± 0,10,5 ± 0,10,7 ± 0,10,5 ± 0,1
TNFα plasmatic (pg/ml)36,1 ± 3,434,2 ± 0,842,8 ± 10,454,6 ± 17,934,0 ± 0,439,8 ± 2,2
Plasma LPS (EU/ml)8,3 ± 0,37,4 ± 0,38,5 ± 1,19,1 ± 1,515,0 ± 1,716,2 ± 4,0

Datele sunt mijloace ± SE; n = minim 5/grup, cu excepția insulinei SC post-clamp unde n = 3. Valorile pentru TG, FFA, TNFα și LPS provin din eșantioane de sânge pre-fixate peste noapte.

* Semnificativ diferit de soluția salină NC. FFA, acizi grași liberi; NA, nu se aplică.