Nutriție și tehnologia științei alimentelor

Editat de
José M. Alvarez-Suarez

Universitatea din America, Ecuador

Revizuite de
Jie YIN

Colegiul de știință și tehnologie a animalelor, Universitatea Agricolă din Hunan, China

Abishek B. Santhakumar

Universitatea Charles Sturt, Australia

Afilierile editorului și ale recenzenților sunt cele mai recente oferite în profilurile lor de cercetare Loop și este posibil să nu reflecte situația lor în momentul examinării.

state

  • Descărcați articolul
    • Descărcați PDF
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Suplimentar
      Material
  • Citarea exportului
    • Notă finală
    • Manager de referință
    • Fișier TEXT simplu
    • BibTex
DISTRIBUIE PE

Cercetare originală ARTICOL

  • Wellness & Nutrition Science Institute, Morinaga Milk Industry Co. Ltd., Zama, Japonia

Introducere

Materiale și metode

Experimente pe animale

Acest proiect de studiu a fost aprobat de Comitetul de cercetare a animalelor din Morinaga Milk Industry Co., Ltd., iar studiul a fost realizat în conformitate cu liniile directoare ale comitetului. Șobolanii masculi Wistar (în vârstă de 3 săptămâni; Japan SLC, Hamamatsu, Japonia) au fost așezați individual în cuști din policarbonat cu așchii de lemn într-o instalație controlată de lumină, temperatură și umiditate (21-25 ° C, 40-60% umiditate, și 12 - h ciclu lumină/întuneric) și permis ad libitum acces la apă și dieta AIN-93G conținând 20% CN (drojdie orientală, Tokyo, Japonia; Tabelul 1). După 1 săptămână de aclimatizare, animalele au fost supuse la 3 tipuri de experimente.

tabelul 1. Compoziția dietelor experimentale în Experimente.

Experimentul 1

30 de animale au fost repartizate în 5 grupe dietetice (n = 6); Un grup a fost hrănit cu AIN-93G ca dietă de control (20% CN, drojdie orientală, Tokyo, Japonia) (17), iar celelalte 4 au fost hrănite cu o dietă LP iso-energetică bazată pe AIN-93G, conținând fie 3% CN, 3% CN suplimentat cu Cyss, 3% WP (industria laptelui Morinaga, Tokyo, Japonia) sau 3% WG (Wako Pure Chemical, Osaka, Japonia). Aceste diete au fost desemnate ca dietă martor (CT), 3% dietă CN, 3% dietă CN + Cyss, 3% dietă WP și respectiv 3% diete WG, iar compozițiile lor sunt prezentate în tabelul 1. În timp ce CT și 3% grupuri de dietă CN au fost hrănite cu fiecare dietă ad libitum, celelalte grupuri au fost hrănite în perechi cu grupul de dietă CN 3%. Aceste 5 grupuri dietetice au fost menținute timp de 4 săptămâni. Aproximativ 50-200 μL de probe de sânge au fost extrase din vena laterală a cozii o dată pe săptămână, folosind seringi tratate cu acid etilendiaminetetraacetic disodic. Probele de sânge au fost centrifugate la 1.700 g timp de 10 minute la temperatura camerei (RT), iar straturile plasmatice superioare au fost obținute și depozitate la -80 ° C până la analiză.

După 4 săptămâni de regim dietetic de mai sus, animalele au fost eutanasiate prin anestezie profundă cu sevofluran (Mylan, Canonsburg, PA). Sângele a fost extras din vena cavă inferioară, iar straturile plasmatice au fost obținute după centrifugare. Probele de ficat au fost, de asemenea, excizate și congelate imediat în azot lichid. Aceste probe au fost depozitate la -80 ° C până la analiză.

Experimentul 2

Optsprezece animale au fost repartizate în 3 grupuri dietetice (n = 6) și au fost menținute timp de 6 săptămâni după cum urmează. În primele 4 săptămâni, aceste grupuri au fost hrănite inițial cu dieta CT, 3% dieta CN sau 3% CN + dieta Cyss (Tabelul 1); au fost hrănite grupurile de dietă CT și 3% CN ad libitum, în timp ce grupul de dietă 3% CN + Cyss a fost hrănit în pereche cu grupul de dietă 3% CN. În următoarele 2 săptămâni, grupul de dietă CT a fost alimentat cu dieta de control ad libitum ca și înainte, și ambele grupuri plasate inițial pe dieta CN 3% și dieta 3% CN + Cyss au fost permise ad libitum acces la dieta 3% CN + Cyss. Pentru claritate, aceste grupuri au fost desemnate ca grupul de dietă Cyss 3% CN/greutate Cyss și, respectiv, grupul de dietă Cyss 3% CN/greutate. Similar experimentului 1, probele de sânge au fost extrase o dată pe săptămână, iar probele de plasmă au fost obținute după centrifugare și depozitate la -80 ° C până la analiză.

După 6 săptămâni de tratamentele dietetice de mai sus, similare cu Experimentul 1, animalele au fost eutanasiate, iar probele de plasmă și ficat au fost obținute și depozitate la -80 ° C.

Experimentul 3

Optsprezece animale au fost repartizate în 6 grupe dietetice (n = 3); au fost hrăniți cu dietă CT, 3% dietă CN, 3% CN + dietă Cyss sau 3% diete CN cu 3 tipuri de suplimente, GSH, GSSG sau un amestec de aminoacizi care constituie GSH [adică acid glutamic (Glu), Cyss și glicină (Gly)]. Aceste diete au fost desemnate ca dietă 3% CN + GSH, 3% dietă CN + GSSG și, respectiv, 3% dietă CN + Glu/Cyss/Gly (Tabelul 1). Suplimentele Cyss, GSH și GSSG conțineau un echimolar de Cys, iar suplimentele GSH, GSSG și Glu/Cyss/Gly aveau echimolari de Glu, Cyss și Gly. Aceste 6 grupuri dietetice au fost hrănite ad libitum timp de 4 săptămâni și apoi au fost eutanasiați. Sângele a fost obținut prin puncție cardiacă, iar straturile de plasmă au fost obținute după centrifugare. Probele de ficat au fost, de asemenea, excizate și congelate imediat în azot lichid. Atât probele de plasmă, cât și cele de ficat au fost depozitate la -80 ° C până la analiză.

Chimia sângelui

Probele de plasmă au fost aplicate pe un analizor de aminoacizi (L-8900; Hitachi High-Technologies, Tokyo, Japonia) pentru a analiza modelele de aminoacizi liberi, așa cum s-a descris anterior (14, 15). Probele de plasmă au fost, de asemenea, supuse unei metode de bromocrezol verde (kit de testare A/G B, Wako Pure Chemical) pentru a determina nivelurile de albumină.

Statul Redox al albuminei plasmatice

Starea redox a albuminei plasmatice a fost determinată așa cum s-a descris anterior (14, 15). Izoformele de albumină, MA, NA-1 și NA-2 au fost separate folosind o coloană Shodex Asahipak ES-502N 7C (Showa Denko, Kawasaki, Japonia). Ele au fost eluate folosind un gradient de 100 de minute cu concentrații crescute de etanol de la 0 la 10% în sulfat de sodiu 0,4 M și acetat de sodiu 50 mM (pH 4,85), cu un debit de 0,5 ml/min. Emisia de fluorescență a fost măsurată la 280 nm pentru excitație și 340 nm pentru emisie.

Expresia genei hepatice

ARN-ul a fost extras din probe de ficat și PCR în timp real a fost efectuată cu un sistem de PCR rapid în timp real ABI PRISM 7500 (Applied Biosystems, Foster City, CA) așa cum s-a descris anterior (14, 15). Reacția a fost efectuată utilizând amestecul master universal TaqMan [Fără AmpErase UNG (2 ×)] cu primerul PCR și setul de sonde pentru genele albuminei și un factor de inițiere a traducerii eucariote 4E-binding protein 1 (4E-BP1) (TaqMan Gene Expression Analize; Rn00592480_m1 și, respectiv, Rn00587824_m1). Expresiile genice au fost normalizate la o genă de control endogenă, β-actina (Rn00667869_m1).

Nivelul GSH/GSSG hepatic

Nivelurile totale de GSH și GSSG din probele de ficat au fost determinate folosind un kit de cuantificare GSSG/GSH (Dojindo Molecular Technologies, Kumamoto, Japonia).

Analize statistice

Valorile sunt exprimate ca medii ± SD (Experimentul 1 și 2, n = 6; Experimentul 3, n = 3). Datele au fost analizate prin ANOVA unidirecțional, urmat de un test HSD Tukey-Kramer (software JMP, versiunea 5.1.1; Institutul SAS, Cary, NC). Semnificația a fost demonstrată la P Cuvinte cheie: echilibru aminoacizi, glutation, dietă cu conținut scăzut de proteine, mercaptalbumină, non-mercaptalbumină, albumină plasmatică, calitatea proteinelor alimentare, stare redox a albuminei plasmatice

Citație: Wada Y, Xijier, Seto N, Komatsu Y, Tsuda M, Kitamura Y, Izumi H, Shimizu T și Takeda Y (2019) Starea redox de albumină plasmatică răspunde la echilibrul aminoacizilor al proteinelor dietetice la șobolani care au alimentat o proteină scăzută Dietă. Față. Nutr. 6:12. doi: 10.3389/fnut.2019.00012

Primit: 07 noiembrie 2018; Acceptat: 24 ianuarie 2019;
Publicat: 15 februarie 2019.

José M. Alvarez-Suarez, Universitatea din America, Ecuador

Abishek Bommannan Santhakumar, Universitatea Charles Sturt, Australia
Jie Yin, Institutul de Agricultură Subtropicală (CAS), China

† Acești autori au contribuit în mod egal la această lucrare