O comparație a testului intradermic cu alergenul tuberculozei recombinante (diaskintest) cu alte teste imunologice în diagnosticul infecției cu tuberculoză

comparație

Anna Starshinova 1, Viacheslav Zhuravlev 2, Irina Dovgaluk 2, Alexandr Panteleev 3, Vera Manina 2, Ulia Zinchenko 1, Evgenia Istomina 2, Maria Pavlova 2, Piotr Yablonskiy 1
1 Institutul Federal de Cercetare de Ftiziopulmonologie al Statului Sankt Petersburg al Federației Ruse, Instituția Federală de Stat pentru Învățământ Superior Universitatea de Stat din Sankt Petersburg, Petersburg, Rusia
2 Institutul Federal de Cercetare de Ftiziopulmonologie al Statului Sankt Petersburg din Ministerul Sănătății Federația Rusă, Petersburg, Rusia
3 Departamentul de Infecție Socială, Prima Universitate de Stat Pavlov Medical din Saint Petersburg, Ministerul Sănătății, Petersburg, Rusia

Data publicării web7-Mar-2018

adresa de corespondenta:
Prof. Anna Starshinova
Institutul de Cercetări de Ftiziopulmonologie, 191036, Ligovskii PR.2-4, St. Petersburg, Federația Rusă
Rusia

Sursa de asistență: Nici unul, Conflict de interese: Nici unul

2

DOI: 10.4103/ijmy.ijmy_17_18

Cuvinte cheie: Diagnosticul tuberculozei, Diaskintest, teste imunologice, teste de testare a eliberării interferon-gamma, test cu alergen tuberculozic recombinant


Cum se citează acest articol:
Starshinova A, Zhuravlev V, Dovgaluk I, Panteleev A, Manina V, Zinchenko U, Istomina E, Pavlova M, Yablonskiy P. O comparație a testului intradermic cu alergenul tuberculozei recombinante (diaskintest) cu alte teste imunologice în diagnosticul infecției cu tuberculoză. Int J Mycobacteriol 2018; 7: 32-9

Cum se citează această adresă URL:
Starshinova A, Zhuravlev V, Dovgaluk I, Panteleev A, Manina V, Zinchenko U, Istomina E, Pavlova M, Yablonskiy P. O comparație a testului intradermic cu alergenul tuberculozei recombinante (diaskintest) cu alte teste imunologice în diagnosticul infecției cu tuberculoză. Int J Mycobacteriol [serial online] 2018 [citat 17 decembrie 2020]; 7: 32-9. Disponibil de pe: https://www.ijmyco.org/text.asp?2018/7/1/32/226776

Tuberculoza (TBC) rămâne una dintre cele mai răspândite și periculoase infecții la om. [1], [2], [3], [4] În ciuda studiilor pe termen lung și a programelor globale care vizează gestionarea acestei boli (Programul DOTS, Strategia End TB și Planul Global End TB pentru 2006-2015), infecția încă nu a fost învinsă. [2], [4], [5]

În 2013, 9,0 milioane de persoane au dezvoltat TBC și 1,5 milioane de persoane au murit de boală; în 2014, boala a fost detectată la 9,6 milioane de persoane; în 2015, boala a fost deja detectată la 10,4 milioane de persoane (5,9 milioane de bărbați, 3,5 milioane de femei și 1 milion de copii). În 2015, aproximativ 1,8 milioane de persoane au murit de tuberculoză, inclusiv 390.000 de pacienți seropozitivi în 2015. [1], [2], [6] TB este a noua cauză de deces la nivel mondial și principala cauză care implică un singur agent infecțios clasându-se peste HIV/SIDA. În 2016, s-au estimat 1,3 milioane de decese de TB în rândul persoanelor HIV-negative (în scădere de la 1,7 milioane în 2000) și alte 374.000 de decese în rândul persoanelor HIV-pozitive. Se estimează că 10,4 milioane de persoane s-au îmbolnăvit de TBC în 2016: 90% erau adulți, 65% erau bărbați și 10% erau persoane care trăiau cu HIV. Au fost raportate în total 6,3 milioane de cazuri noi de TBC (în creștere față de 6,1 milioane în 2015), echivalent cu 61% din incidența estimată a 10,4 milioane. Au fost raportate 476.774 de cazuri de TB HIV-pozitivă (46% din incidența estimată).

Potrivit OMS, o treime din populația lumii este infectată cu Mycobacterium tuberculosis (MTB).

Strategia OMS pentru eradicarea TBC până în 2035 (Strategia de finalizare a TBC) vizează un diagnostic precoce și precis și un tratament eficient ulterior al pacienților cu TBC. [2] În prezent, nu există un standard de aur pentru diagnosticul infecției cu tuberculoză latentă (LTBI) și detectarea precoce a tuberculozei active.

Pentru o lungă perioadă de timp, testul Mantoux a fost singura metodă imunologică de diagnostic precoce a infecției cu TBC. [7], [8], [9]

Testul cutanat al tuberculinei (TST, testul Mantoux) este cunoscut de la sfârșitul secolului al XIX-lea și se bazează pe o reacție de hipersensibilitate întârziată la proteinele specifice ale agentului patogen. Tuberculina a fost aprobată de OMS în 1958 și conține> 200 de antigeni obișnuiți în micobacteriile TB și non-TB (NTM). [7] Ca rezultat, a fost observat un răspuns imun pozitiv la administrarea de tuberculină la persoanele sensibilizate cu NTM sau imunizate cu bacilul Calmette - Guérin (BCG). Este extrem de dificil să se efectueze diagnosticul de TBC pe baza testului Mantoux în țările cu imunizare BCG, ceea ce duce la o specificitate diagnostică scăzută a testului. [10]

Testele bazate pe inducerea eliberării interferon-γ (testul eliberării interferonului gamma [IGRA]), bazate pe stimularea unui răspuns imun celular de către antigenele imunodominante ESAT-6 și CFP10 specifice MTB, reprezintă o alternativă de diagnostic la testul tuberculinei; acest lucru rezolvă problema sensibilizării prin imunizarea BCG și infecția cu NTM, care este un factor atunci când se utilizează TST. [11]

Două opțiuni de testare IGRA au fost introduse recent în practica internațională: testul QuantiFERON-TB Gold In-Tube (QFT, Qiagen, Hilden, Germania), unde este utilizat sângele integral, și testul T-SPOT.TB (imunospot legat de enzime [ELISPOT ], Oxford Immunotec, Marea Britanie, cu utilizarea de celule mononucleare purificate din sânge periferic). Conform diferitelor studii, valoarea lor informațională în diagnosticul TBC este destul de ridicată: 78% –93%. [12], [13], [14] Apariția testelor IGRA a permis identificarea mai bună a LTBI ascunse. [13], [15]

În același timp, costul ridicat al acestor teste împiedică OMS să le recomande în țările cu venituri mici. [2] Necesitatea unui laborator special echipat, personal instruit și manipulări intravenoase este un dezavantaj substanțial al testelor IGRA. Aceste limitări fac imposibilă utilizarea testelor IGRA pentru studii de screening la scară largă, în special în rândul copiilor (obținerea de sânge venos), spre deosebire de TST.

Alergenul TB recombinant (Diaskintest) fabricat de GENERIUM JSC, Rusia, este o proteină de fuziune recombinantă CFP10-ESAT6 produsă de Escherichia coli BL21 (DE3)/pCFP-ESAT. [16] Se efectuează Diaskintest, similar cu TST in vivo. Se bazează pe o reacție de hipersensibilitate întârziată după administrarea intradermică de proteine ​​specifice. [17], [18], [19] Spre deosebire de testul Mantoux, rezultatele Diaskintest nu sunt afectate de imunizarea BCG. [20] Conform unei game largi de studii, Diaskintest arată o sensibilitate și o specificitate ridicate în diagnosticul TBC. [7], [17], [18]

Testul recombinant alergen TBC a fost înregistrat în Federația Rusă în 2008 pe baza rezultatelor studiilor preclinice și a studiilor clinice și a fost aprobat legal pentru diagnostic complex de TBC la copii și adolescenți din 2009. [21], [22], [23]

Am realizat un studiu care vizează o comparație a sensibilității testului intradermic folosind alergen TB recombinant (Diaskintest) cu alte teste imunologice în diagnosticul infecției active TB și LTBI. De asemenea, am comparat concordanța rezultatelor testelor imunologice TB existente.

Proiectarea studiului și participanții

A post-hoc analiza datelor a fost efectuată la două instituții de sănătate TB din Saint Petersburg (Rusia). Studiul a fost aprobat de Comitetul Independent de Etică al Institutului Federal de Cercetare de Stat pentru Ftiziopulmonologie al Ministerului Sănătății al Federației Ruse (aprobare nr. 16 din 4 aprilie 2014). Acest studiu este un studiu de cohortă retrospectiv cu o evaluare a rezultatelor tuturor persoanelor care au vizitat instituțiile de îngrijire a sănătății pentru a exclude sau confirma un diagnostic de TBC între 1 ianuarie 2011 și 30 decembrie 2016. Un istoric medical, caracteristicile de bază ( adică, vârsta, sexul, imunizarea BCG, comorbiditatea, utilizarea imunosupresoarelor și antecedente de TBC) și rezultatele examinărilor bacteriologice, radiologice și imunologice au fost evaluate la participanții incluși în studiu. Persoanele cu vârste cuprinse între 1 și 65 de ani, care au fost supuse imunizării BCG, au fost incluse în studiu. Confirmarea vaccinării: Dosare medicale (copii), dovezi ale cicatricii BCG (copii și adulți).

Criteriile de excludere ale studiului au fost următoarele: vârsta de 65 de ani; un diagnostic al bolii TBC active actuale; terapie anti-tuberculoză ≥ 1 lună; micobacterioză pulmonară; o comorbiditate severă și/sau decompensată; Statutul HIV pozitiv; sarcina și alăptarea la femei; absența imunizării BCG. Au fost, de asemenea, excluși persoanele cu tulburări de imunodeficiență secundară, cum ar fi diabetul zaharat, transplantul de organe și tumorile maligne, precum și persoanele care au primit tratament cu corticosteroizi. Astfel, au fost selectați 860 de indivizi, cu stratificarea ulterioară a vârstei: copii și adolescenți cu vârsta cuprinsă între 1-18 ani și adulți cu vârsta cuprinsă între 18 și 65 de ani.

Examinarea tuturor persoanelor, care au contactat specialiștii din instituția anti-TBC, a fost efectuată în conformitate cu actele normative legale actuale. În primul rând, au fost evaluate simptomele clinice. Apoi, au fost colectate probele de sânge pentru testele QFT și ELISPOT, urmate de testul Mantoux cu 2 TU (MT/TST) și un test alergen TB recombinant (Diaskintest). Datorită capacităților limitate, testele de eliberare a interferonului-γ (teste IGRA) au fost efectuate numai la unii indivizi. Conform practicii curente de rutină, a fost efectuată o examinare radială a organelor toracice tuturor indivizilor: o radiografie toracică (Multix PRO, Germania) și/sau o tomografie computerizată a plămânilor și a organelor mediastinului (Somatom AS, Germania) . O examinare a materialului respirator pentru MTB a fost efectuată cu utilizarea metodelor microbiologice și bacteriologice (frotiu de spută, cultură de spută pe medii solide] [Lowenstein - Jensen, Finn 2] și medii lichide (analizor BACTEC MGIT 960 (Becton Dickinson Microbiology System, Sparks, MD)] precum și detectarea ADN-ului MTB prin reacție în lanț în timp real a polimerazei [RT-PCR, AmpliTub-RV, Rusia]).

Au existat 696 de persoane în vârstă. Figura 1: Designul studiului

Toți indivizii au fost stratificați în funcție de vârstă ca copii și adolescenți cu vârsta cuprinsă între 1 și 18 ani și adulți cu vârsta cuprinsă între 18 și 65 de ani. Grupurile de pacienți cu TBC pulmonară confirmată și persoanele fără TBC activă diagnosticată au fost definite pe baza rezultatelor examinării. Diagnosticarea TBC este cunoscută a fi complicată la copii și adolescenți. În studiul nostru, această grupă de vârstă a inclus pacienți cu MTB detectați în spută și pacienți cu TB diagnosticați pe baza încheierii unui consiliu medical numai după examinări clinice și radiologice complete (fără detectare MTB).

Astfel, acest studiu a inclus o analiză a rezultatelor obținute în trei subgrupuri de copii și adolescenți cu vârsta de 10 pete sau controlul mitogen conținea 0,35 UI/ml pentru antigenul TB minus NIL. S-a înregistrat un rezultat negativ dacă acest răspuns a fost [24]

analize statistice

Analiza datelor a fost efectuată cu ajutorul software-ului Stata 14. [25] Au fost utilizate metode statistice descriptive pentru a caracteriza subiecții incluși în studiu. S-au evaluat următorii parametri cantitativi: media aritmetică (medie); abaterea standard (SD); Interval de încredere de 95% pentru medie. Numărul absolut ca n/N precum și procentul (%) a fost analizat pentru variabilele calitative. Un Cochran Î-testul a fost utilizat pentru o comparație a sensibilității diferitelor teste din fiecare grup. Pentru fiecare test s-a efectuat o comparație pereche cu rezultatele Diaskintest cu o limită ≥ 5 mm. Pentru analiză, rezultatele negative, neconcludente și neinterpretate au fost combinate într-un singur grup. Indicele de consistență kappa, care ia în considerare corespondența accidentală a rezultatelor, a fost calculat pentru fiecare pereche de teste. O comparație a frecvenței unui parametru în subgrupuri de pacienți fără legătură a fost efectuată folosind testul exact al lui Fisher. Diferențele dintre subgrupurile comparate au fost considerate semnificative statistic la P Tabelul 2: Rezultatele diferitelor teste de diagnostic la copii sub 18 ani

După cum s-a văzut în [Tabelul 2], s-a observat o diferență semnificativă statistic între grupurile cu și fără TBC activă folosind testele IGRA și Diaskintest. TST a fost pozitiv la toți pacienții (100%).

O analiză a concordanței rezultatelor Diaskintest la copii Tabelul 3: O comparație a rezultatelor testului Diaskin cu rezultatele altor teste diagnostice la pacienți cu vârsta sub 18 ani (limite = 5 mm)

Conform analizei, o concordanță a rezultatelor Diaskintest cu rezultatele ELISPOT și QFT a fost observată în majoritatea cazurilor la populația pediatrică examinată (n = 696) cu o limită Diaskintest ≥ 5 mm: indicii de consistență kappa au fost 1.000 și, respectiv, 0.937. Rezultatele Diaskintest și TST au fost la nivelul corespondenței accidentale; totuși, concordanța valorilor pozitive în grupul de pacienți cu diagnostic confirmat a fost de 98,8% -100,0%.

Rezultatele testelor imunologice la persoanele HIV-negative cu vârsta de 18 ani și peste

După cum se vede în [Tabelul 5], o analiză utilizând testul Q al lui Cochran a demonstrat absența diferențelor semnificative statistic între parametrii de sensibilitate ai diferitelor teste de diagnostic la pacienții cu TBC confirmată microbiologic (P = 0,903). Diferențe semnificative între rezultatele celor patru teste au fost observate numai la grupul de pacienți fără TBC activă (P [1] nivelul TBC activ ar trebui să fie ținut sub control, dar accentul principal ar trebui să fie pe scăderea nivelului LTBI. Conform numeroaselor studii, testele IGRA sunt extrem de valoroase în diagnosticul TBC atât activ cât și latent; cu toate acestea, acestea sunt scumpe, complicate, necesită prelevarea de probe de sânge venos și personal de laborator instruit și împiedică recomandarea lor ca teste de screening în multe țări. TST existent are o valoare diagnostică scăzută în țările cu un nivel ridicat de imunizare BCG, inclusiv în Rusia. Pentru diagnosticarea LTBI este necesară introducerea unor noi teste rentabile, cu sensibilitate ridicată. Acest studiu a evaluat capacitățile de diagnostic ale unui nou test intradermic care utilizează alergen recombinant de TB (Diaskintest).

Având în vedere trăsăturile patogeniei procesului specific, a post-hoc analiza rezultatelor testelor imunologice obținute la două cohorte de pacienți (la copii și adolescenți și la adulți) a fost efectuată în țările cu vaccinare BCG.

O sensibilitate a Diaskintest comparabilă cu testele IGRA a fost observată la pacienții cu diagnostic confirmat de TBC la toate grupele de vârstă.

Indicii de consistență kappa pentru rezultatele Diaskintest (limita Diaskintest ≥ 5 mm) comparativ cu rezultatele ELISPOT și QFT la populația pediatrică examinată (n = 696) au fost 1.000, respectiv 0.937. Diaskintest a demonstrat o sensibilitate de 100% la nivelul testelor imunologice existente la copii și adolescenți cu TBC diagnosticată. O evaluare a concordanței Diaskintest cu IGRA confirmă faptul că noul test cutanat poate fi utilizat pentru diagnosticarea TBC. Acest lucru este confirmat de nivelul ridicat de concordanță a eliberării pozitive de interferon și rezultatele testului Diaskintest la pacienții la care a fost exclus un diagnostic al procesului specific, în timp ce concordanța cu TST este scăzută. Diferențele dintre Diaskintest și TST sunt cel mai probabil cauzate de imunizarea BCG existentă, la care TST este sensibilă. O consistență ridicată a rezultatelor testului Diaskintest și IGRA la copii și adolescenți a fost observată și de alți cercetători. [26]

În acest studiu, sensibilitatea Diaskintest la pacienții din grupul TB/MTB + cu vârsta de 18 ani și peste a fost de 88,7%; de ELISPOT, 90,6%; de QFT, 87,0%. Potrivit unor autori, sensibilitatea QFT nu depășește 89,0%. [27]

Deoarece un diagnostic al LTBI este obiectivul studiului, o evaluare a consistenței testelor de laborator și a Diaskintestului prin criteriul kappa a fost efectuată la pacienții la care diagnosticul de TB activă a fost exclus. Analiza a demonstrat o consistență ridicată a rezultatelor testelor comerciale de tuberculoză la pacienții adulți (Diaskintest cutoff ≥ 5 mm): indicele kappa a fost de 0,805 și 0,636 (Diaskintest vs. ELISPOT și respectiv QFT).

Datele noastre sugerează că Diaskintest are o sensibilitate comparabilă cu cea a IGRA și un procent ridicat de concordanță a rezultatelor testului atât în ​​grupul cu TBC activă, cât și în ceea ce privește detectarea unui LTBI. Rezultatele obținute confirmă faptul că Diaskintest poate permite o abordare mai fundamentată a examinărilor de urmărire și a tratamentului persoanelor în comparație cu TST în rândul persoanelor vaccinate cu BCG.

În prezent, conform recomandărilor OMS, înlocuirea TST cu IGRAs nu este recomandată ca o intervenție de sănătate publică în condiții constrânse de resurse, deoarece testele IGRA sunt mai costisitoare și mai complexe din punct de vedere tehnic decât TST. Diaskintest are o complexitate comparabilă cu TST, iar performanța sa este apropiată de cea a IGRA la o populație vaccinată BCG.

Astfel, studiul nostru demonstrează că înlocuirea TST cu Diaskintest poate fi recomandată ca o intervenție de sănătate publică în setări de vaccinare BCG limitate de resurse și universale.

Este important să se ia în considerare rentabilitatea favorabilă pentru DST (în comparație cu testele IGRA), în timp ce sensibilitatea sa similară cu IGRA. Punerea în aplicare a DST poate ajuta la îmbunătățirea diagnosticului precoce în țările cu sarcină mare de TB cu vaccinarea BCG.

Sprijin financiar și sponsorizare

Sprijinul financiar este oferit de Ministerul Sănătății Federația Rusă