1 Biobancă pentru tumori și ADN din Maranhão, Universitatea Federală din Maranhão, São Luís, Brazilia

arterială

2 Grupul de Oncologie Moleculară și Patologie Virală, Institutul Portughez de Oncologie, Porto, Portugalia

3 Universitatea Federală din São Paulo, São Paulo, Brazilia

Abstract

1. Introducere

Bolile cardiovasculare sunt principala cauză de deces și constituie o problemă majoră de sănătate publică la nivel mondial. La nivel global, acestea reprezintă milioane de decese și, în Brazilia, reprezintă 29,4% din toate decesele [1, 2]. Într-adevăr, boala coronariană (CAD) se caracterizează printr-un aport insuficient de sânge către inimă prin arterele coronare, ducând la infarctul miocardic [3, 4]. Factorii de risc importanți pentru CAD sunt bine stabiliți, inclusiv hipertensiunea, diabetul, dislipidemia și fumatul [2, 3, 5]. Cu toate acestea, mai mulți indivizi cu CAD nu prezintă niciunul dintre acești factori de risc, instigând astfel investigarea altor determinanți sau variabile asociate [4, 5].

Infecții cu mai mulți agenți precum HIV, virusul Epstein-Barr, citomegalovirus și Pneumonie cu Chlamydia au fost sugerate ca factori de risc pentru CAD, posibil prin promovarea unui status inflamator cronic [6, 7]. În acest context, virusul papiloma uman (HPV), una dintre cele mai frecvente infecții cu transmitere sexuală la nivel mondial, poate juca un rol semnificativ. HPV include mai mult de 200 de subtipuri, care sunt legate etiologic de dezvoltarea leziunilor benigne și maligne. HPV 16 și 18 sunt cele mai frecvente tipuri de „risc ridicat” și sunt puternic asociate cu cancerul de col uterin și alte tumori maligne [8]. În populația generală feminină, prevalența infecției cu HPV variază între 2-44% [8]. În țările în curs de dezvoltare, prevalența variază între 21-48%, HPV cu risc crescut fiind detectat la 48-53% dintre persoanele infectate [9-11]. De-a lungul anilor, grupul nostru s-a specializat în tumori legate de HPV, cum ar fi cancerul penisului [12], analului [13] și al colului uterin [14].

Rapoartele anterioare [15] au descris că femeile cu HPV vaginal prezintă un risc crescut de trei ori de boli cardiovasculare în comparație cu femeile cu HPV negative. Mai recent, ADN-ul și proteinele HPV au fost detectate în 50% din arterele coronare ateromatoase într-un eșantion mic de 20 de donatori decedați [16]. Infecția cu HPV este speculată pentru a facilita dezvoltarea CAD prin furnizarea unui stimul inflamator sistemic îmbunătățit [16], care este observat și în modelele animale transgenice HPV [17]. De fapt, inflamația cronică nerezolvată joacă un rol cheie în CAD [18], iar infecția cu HPV ar putea contribui, de asemenea, la aceasta. Studiile ocazionale susțin că HPV poate fi găsit în leucocitele din sânge circulante [19] și celulele endoteliale [20], ceea ce ar putea ajuta la localizarea virusului la plăcile ateromatoase. O altă linie de gândire subliniază că HPV, ca și alți viruși, interferează cu metabolismul lipidic, care ar putea contribui și la CAD [16, 21]. Prin urmare, studiul de față a avut ca scop investigarea unei posibile asocieri între infecția cu HPV și CAD la femeile climatice.

2. Metode

2.1. Etica și populația de studiu

Un studiu transversal a fost aprobat de Comitetul de Etică al Universității Federale din Maranhão (aprobare nr. 195.357). Consimțământul informat scris a fost obținut de la toate femeile. Mărimea eșantionului a fost calculată luând în considerare o prevalență de 65% dintre femeile cu boală coronariană pozitivă pentru HPV [15], o putere de 80% și un nivel de semnificație de 5%.

2.2. Criterii de incluziune și excludere

Voluntarii cu și fără CAD au fost incluși în cazul în care au fost peste 35 de ani și au climat. Persoanele cu cateterism cardiac după angioplastie coronariană au fost luate în considerare pentru înscriere și trimise la Serviciul de ginecologie al Centrului de Cercetări Clinice/UFMA, unde au fost supuse examenului clinic pentru a confirma eligibilitatea. Criteriile de excludere au fost chimioterapia anterioară/radioterapia pelviană sau cu pozitivitate serică la HIV.

2.3. Variabile sociodemografice

Variabilele sociodemografice (vârsta, etnia, educația, venitul familiei, activitatea profesională, starea civilă, comportamentul sexual, consumul de alcool, fumatul și activitatea fizică) au fost investigate folosind un chestionar semistructurat dezvoltat special pentru acest studiu.

2.4. Comorbidități

În timpul examinării clinice, voluntarii au raportat prezența sau absența comorbidităților (hipertensiune arterială, diabet, tulburări tiroidiene și boli cu transmitere sexuală). Apoi, tensiunea arterială (TA) și indicele de masă corporală (IMC) au fost determinate pentru fiecare participant. Pentru BP, voluntarilor li s-a cerut să aibă o vezică goală și să nu fi exercitat sau consumat alcool, cafea sau alimente timp de cel puțin 30 de minute înainte de măsurare. TA sistolică și diastolică a fost măsurată în conformitate cu recomandările Societății braziliene de cardiologie, utilizând un stetoscop și un sfigmomanometru cu mercur [22]. TA a fost considerată anormală atunci când TA a fost egală sau mai mare de 130/85 mmHg. IMC a fost calculat ca raportul dintre greutatea corporală în kilograme împărțit la pătratul înălțimii în metri și a fost clasificat în funcție de punctele de tăiere ale OMS [23]: 30,0 (obez).

2.5. Profil metabolic

Probele de sânge venos au fost obținute de la voluntari după o perioadă de 12 ore de post. După colectarea în tuburi cu și fără anticoagulant, plasma și serul au fost separate prin centrifugare și depozitate în congelator -80 ° C până la o analiză ulterioară. Probele au fost utilizate pentru efectuarea hemogramelor, a profilului de glucoză (glucoză în repaus alimentar, insulinei și hemoglobinei glicate), a profilului lipidic (colesterol total, trigliceride, lipoproteine ​​de înaltă densitate-HDL și lipoproteine ​​de densitate scăzută-colesterol LDL), profil renal (creatinină și uree) și proteină C-reactivă de înaltă sensibilitate (hs-CRP).

2.6. Detecția și genotiparea HPV

Materialul cervical a fost colectat și supus reacției în lanț a polimerazei imbricate (PCR) pentru genotiparea HPV. Extragerea materialului genetic a fost efectuată folosind kitul QIAamp DNA Mini și Blood Mini (QIAGEN, Valencia, CA) urmând instrucțiunile producătorului. Pe scurt, 400 μSoluția de probă L a fost adăugată la 400 μL de tampon AL și 20 μL de proteinază. Apoi, 400μla fiecare tub s-a adăugat l de etanol 100%; probele au fost centrifugate de patru ori și, după o scurtă perioadă de incubație, au fost din nou centrifugate la 8.000 rpm timp de 5 minute pentru a eluda ADN-ul, care a fost stocat la -20 ° C. Concentrația ADN a fost determinată utilizând un spectrofotometru NanoVue (GE). Detecția ADN HPV a fost efectuată de L1 amplificarea genei utilizând o tehnică PCR-NESTED și perechile de primer PGMY 09/11 și GP 5 +/6 +. Apoi, produsul primei reacții cu primerii GP5 +/GP6 + a fost amplificat.

În urma reacțiilor PCR, 5 μL din fiecare probă a fost supus la electroforeză pe gel de agaroză 1,5% pentru a verifica amplificarea. Produsele PCR au fost purificate și ulterior secvențiate folosind un secvențiator automat MegaBACE 1000 (GE Healthcare, Marea Britanie). Cromatogramele secvențelor obținute au fost analizate de software-ul Chromas (Technelysium), iar secvențele au fost trimise software-ului BLASTn online pentru identificarea tipurilor de HPV. Au fost analizate un total de 36 de probe ADN-HPV, iar tipurile de HPV 16, 18, 33, 35, 39, 45, 51, 56 și 58 au fost definite ca având un risc oncogen ridicat.

2.7. Analize statistice

Datele sunt prezentate ca frecvențe absolute și relative. Un model de regresie logistică binară a fost utilizat pentru a obține raportul de șanse ajustat (OR) și intervalele de încredere (CI). Datele au fost analizate folosind software-ul EpIInfo 7 (CDC, Atlanta). A

Variabilele legate de riscul metabolic pentru dezvoltarea CAD în ambele grupuri sunt rezumate în Tabelul 2. Nu a existat nicio diferență statistică între cele două grupuri în ceea ce privește prevalența diabetului zaharat sau a sindromului metabolic și a valorilor hs-CRP, indicelui de masă corporală, glicemiei. și trigliceridele. Cu toate acestea, grupul HPV-pozitiv a prezentat niveluri mai scăzute de colesterol HDL în sânge (p = 0,008) și tensiune arterială sistemică crescutăp = 0,002) în comparație cu grupul HPV negativ.

În ceea ce privește prezența HPV, 44,2% dintre toate femeile au fost pozitive pentru ADN-ul HPV cervical, dintre care 69,6% cu CAD și 30,4% fără CAD (Tabelul 2). Dintre femeile cu HPV negative, prevalența CAD a fost de 37,9%. Diferența în prevalența CAD între grupurile HPV pozitive și negative a fost marginal semnificativă (p = 0,0467) și OR pentru CAD a fost de 3,74 pentru voluntarii HPV pozitivi, comparativ cu femeile HPV negative.

Șaisprezece femei (30,8%) aveau tipuri de HPV cu risc crescut (16, 18, 33, 39, 45 și 58). Acești voluntari au inclus 44,5% dintre femeile cu CAD și 16,0% dintre cele fără CAD (Tabelul 3). După ajustarea în funcție de vârstă și etnie, prezența ADN-ului vaginal HPV cu risc crescut a fost asociată statistic cu CAD (OR = 4,90, p = 0,0384). Prezența altor tipuri de HPV nu a fost asociată cu CAD în acest studiu.

4. Discutie

Infecția cu HPV este cauza mai multor leziuni benigne și maligne, dar o posibilă asociere cu bolile cardiovasculare a fost rareori propusă și rămâne speculativă. Cu toate acestea, unele dovezi [15] au raportat că infecțiile vaginale cu HPV cresc riscul bolilor cardiovasculare. Un studiu [16] a identificat HPV la 55% din arterele coronare ateromatoase într-un eșantion mic de donatori postmortem, iar proteina HPV E7 a fost detectată în celulele musculare netede, celulele plasmatice și macrofagele spumoase localizate în acele plăci. Aceste observații ridică întrebări cu privire la posibilele mecanisme prin care HPV ar putea promova formarea plăcilor ateromatoase.

Opinia predominantă este că HPV rămâne limitat la leziunile sale epiteliale, dar unii autori raportează detectarea ADN-ului și proteinelor HPV pe celulele endoteliale [20] și leucocite din sânge circulante [19]. Dacă aceste observații reflectă diseminarea virală adevărată, acestea ar putea ajuta la explicarea prezenței HPV în leziunile ateromatoase [16]. Pe de altă parte, dacă HPV rămâne limitat la leziunile mucoasei, acesta poate fi implicat în CAD prin promovarea unui status inflamator sistemic [17] și prin dereglarea metabolismului gazdei, în special a lipidelor [21]. În studiul de față, am ales să abordăm unele dintre aceste probleme la femeile climatice. Menopauza este asociată cu inflamația cronică și are implicații majore pentru dezvoltarea CAD [24, 25] și tulburările lipidice asociate [26]. Incidența HPV este, de asemenea, mai mare în acest grup [27] și ar putea acționa sinergic cu unii dintre acești factori pentru a-și agrava riscul cardiovascular.

Dintre femeile climatice, am observat o asociere marginal semnificativă între infecția cu HPV și CAD. Important, genotipurile HPV cu risc crescut asociate cu cancerul au fost asociate selectiv cu CAD, în timp ce nu a fost observată nicio asociere cu genotipurile cu risc scăzut. Acest lucru este în conformitate cu studiile anterioare [16] care au detectat cele mai frecvente două tipuri de HPV cu risc ridicat, HPV16 și HPV18, în plăci ateromatoase, dar nu și cu tipuri de risc scăzut. Interesant este că tipul HPV observat în celulele endoteliale și leucocitele din sânge în studiile anterioare [19, 20] a fost, de asemenea, HPV16 cu risc ridicat.

Rezultatele prezente susțin ipoteza că infecția cu HPV este asociată cu CAD și că există o asociere specifică cu tipurile de HPV cu risc ridicat (mai degrabă decât cu risc scăzut). Dacă HPV ajunge la arterele coronare și este prezent în plăcile ateromatoase, acesta ar putea promova dezvoltarea lor prin țintele sale celulare clasice, p53 și proteina retinoblastomului (pRb). Pierderea funcției p53 în macrofage sa dovedit a fi puternic asociată cu creșterea leziunilor aterosclerotice [28-30]. În plus, animalele knock-out pentru pRb au arătat o dezvoltare crescută a aterosclerozei [31].

Rezultatele prezente arată, de asemenea, un HDL mai scăzut și niveluri mai ridicate ale tensiunii arteriale sistemice în HPV-pozitiv comparativ cu grupul HPV-negativ. În timp ce aceasta ar putea reprezenta o schimbare legată de menopauză, corelațiile statistice cu infecția cu HPV au fost extrem de semnificative și necesită o explicație, care poate implica interferența HPV asupra metabolismului lipidelor [21]. Cu toate acestea, numărul redus de subiecți din studiul nostru și restricția doar la femeile climatice și lipsa de date cardiovasculare suplimentare nu ne permit să tragem concluzii în acest sens.

5. Concluzii

În general, în studiul actual, infecția cu HPV a fost asociată cu o probabilitate mai mare de apariție a CAD în rândul femeilor climatice. Sunt necesare studii prospective de cohortă pentru a investiga un efect cauzal potențial al infecției cu HPV asupra dezvoltării CAD, iar investigarea mecanismelor biologice care stau la baza acestei asociații este justificată.

Disponibilitatea datelor

Datele utilizate pentru a susține concluziile acestui studiu sunt disponibile de la autorul relevant, la cerere.

Dezvăluire

Agențiile de finanțare nu au avut niciun rol în proiectarea studiului; colectarea, analiza și interpretarea datelor; sau scrierea și aprobarea finală a manuscrisului.

Conflicte de interes

Autorii declară că nu au conflicte de interese.

Mulțumiri

Acest studiu a fost susținut de FAPEMA (subvenția nr. BIC-02582/14, Brazilia), MCTI/CNPq (subvenția nr. 460035/2014-2, Brazilia), CAPES/PROCAD (subvenția # PROCAD/NF2009, Brazilia), LEPABE/FEDER/COMPETE2020 (subvenția # POCI-01-0145-FEDER-006939, Portugalia) și Fundația pentru Știință și Tehnologie (subvenția nr. SFRH/BPD/85462/2012, Portugalia). Autorii sunt recunoscători Dr. E.C. Fraga pentru a oferi suport în timpul secvențierii ADN-HPV.

Referințe