De Ghofran Al-khafaji

Trimis: 9 iunie 2017 Revizuit: 26 octombrie 2017 Publicat: 20 decembrie 2017

Abstract

Obiectele de studiu sunt concertate pentru a investiga apariția Ureaplasma parvum la femeile cu avort recurent și pentru a determina distribuția serovarilor U. parvum (1, 3, 6, 14) la femeile cu avort recurent prin reacția convențională în lanț a polimerazei (PCR) tehnică. În total, 130 de probe au inclus sângerări vaginale, tampon vaginal și urină, au fost colectate de la femei cu avort recurent și 40 de probe au inclus tampon vaginal și urină de la femeile de control fără avort recurent. Prin studiu, au fost utilizate două tipuri de medii, bulion Ureaplasma (IH Broth) și Ureaplasma agar (IH Agar). Izolatele pozitive pentru Ureaplasma spp. au fost investigate prin tehnica convențională de PCR pentru identificarea U. parvum și subtiparea la serovarii lor (1, 3, 6, 14). Rezultatele au arătat că U. parvum a fost identificat la 29,6% din grupul de pacienți și 11% din grupul de control. Izolatele U. parvum au fost în continuare subtipate prin utilizarea PCR, rezultatele au arătat că serovar 3 a fost cel mai frecvent izolat în proporție (42,8%), în timp ce serovar 1 (28,5%), serovar 6 (14,2%) și serovar 14 (14,2%) )) în grupul de pacienți, dar în grupul de control, numai serovar 1 a fost izolat în proporție (11%). Aceste rezultate indică în mod evident că U. parvum poate fi un agent etiologic important pentru avortul recurent.

Cuvinte cheie

  • Mediu IH
  • PCR
  • avort spontan recurent
  • serovari
  • Ureaplasma parvum

informații despre capitol și autor

Autor

Ghofran Al-khafaji *

  • Institutul Tehnic din Samawah, Universitatea Al-Furat Al-Awsat, Al-Samawah, Irak

* Adresați toată corespondența la: [email protected]

Din volumul editat

Editat de Hassan Salah Abduljabbar

1. Introducere

Avortul spontan recurent este pierderea a trei sau mai multe sarcini consecutive care se încheie cu sarcina prin îndepărtarea unui făt sau embrion înainte ca acesta să poată supraviețui în afara uterului [1, 2]. Un avort spontan care este spontan este, de asemenea, cunoscut sub numele de avort spontan și Organizația Mondială a Sănătății (OMS) a explicat că aproximativ 56 de milioane de avorturi spontane recurente înainte de a 24-a săptămână de gestație au loc în fiecare an inexplicabil [3].

Orice infecție severă care duce la bacteriemie sau viremie poate provoca avort spontan. Rolul infecției în avortul spontan recurent este neclar; prezența vaginozei bacteriene în primul trimestru de sarcină a fost raportată ca un factor de risc pentru avortul spontan al doilea trimestru și nașterea prematură [4].

Ureaplasma parvum ar putea fi un agent patogen important care poate afecta rezultatele sarcinii, iar sănătatea nou-născuților a fost luată în considerare pentru prima dată atunci când s-a raportat endometrita postpartum cu septicemie, corioamnionită [5]. Din acele zile, s-au efectuat numeroase studii clinice în încercarea de a clarifica ce roluri joacă, dacă este cazul, aceste organisme ca agenți responsabili de infecții invazive la nou-născuți, travaliu prematur, avort spontan, naștere mortală și boli pulmonare cronice de prematuritate [6].

Deși peste 30 de ani de studiu în interiorul și în afara Irakului, importanța clinică a Ureaplasma parvum genitală este încă incomplet înțeleasă din mai multe motive. Acestea includ (1) prevalența ridicată a acestor organisme la persoanele sănătoase; (2) proiectarea slabă a multor studii de cercetare anterioare, care au încercat să coreleze prezența mai mare a Ureaplasma parvum în tractul urogenital inferior cu patologia în tractul superior sau la descendenți; (3) necunoașterea clinicienilor și microbiologilor cu cerințele nutriționale complexe și fastidioase pentru Ureaplasma parvum și metodele de detectare [7].

Ureaplasma parvum găsită în placentă și endometru este asociată cu infecția, nașterea unui făt mort, avort spontan, naștere prematură și greutate mai mică decât cea normală a sugarului. Ureaplasma parvum pătrunde în amnion în al doilea trimestru, poate provoca corioamnionită [3]. Ureaplasma parvum a fost găsită în sângele mamelor care au avut probleme cu febră mare după naștere. a nou-născutului în timpul nașterii [8].

Ureaplasma parvum este cea mai răspândită bacterie, posibil patogenă, izolată din tractul urogenital, atât la bărbați, cât și la femei, de asemenea sunt frecvent asociate cu nașterea prematură și alte rezultate adverse ale sarcinii [9]. Parvumul genital U. (biovar 2, serotipurile 1, 3, 6 și 14) sunt considerați locuitori naturali ai tractului urogenital inferior al oamenilor, deoarece sunt adesea izolați de indivizi sănătoși și implicați într-o varietate de infecții la om, izolarea U. parvum de la pacienții cu infecții ale tractului genito-urinar [10]. Waites [5] a constatat că U. parvum este dominantă la pacienții cu boală inflamatorie pelviană, precum și la femeile care au avut avorturi spontane și se pare că au mai multe efecte adverse asupra rezultatului sarcinii în ceea ce privește greutatea la naștere, vârsta gestațională și nașterea prematură decât U. urealyticum și a arătat că U. parvum poate fi izolat mai frecvent de la pacienții cu antecedente de avort spontan recurent decât de la femeile gravide normale.

2. Materiale și metode

2.1. Izolatele bacteriene

În total, 130 de probe au inclus sângerări vaginale, tampon vaginal și urină, au fost colectate de la femei cu avort recurent și 40 de probe au inclus tampon vaginal și urină de la femeile de control fără avort recurent. Toate exemplarele au fost cultivate în bulion IH, care constă din bulion PPLO, bulion de soia de triptonă, pulbere de extract de drojdie, apă distilată și suplimente [22]. Apoi faceți o subcultură pentru agar IH, care constă din agar PPLO, bulion de soia triptonică, MgSO4 · H2O, pulbere de extract de drojdie, agar-agar, apă distilată și suplimente [22]. Ureaplasma spp. izolatele au fost identificate prin examinarea morfologiei coloniale pe mediul de agar IH ca aspect brun-auriu închis sau aspect bogat, maro intens și granular datorită acumulării de oxid de magneziu în interiorul și în afara coloniei [17].

2.2. Experimente moleculare

Experimentele moleculare au inclus extracția ADN-ului Ureaplasma prin utilizarea kitului de ADN genomic reactiv (Geneaid, New Taipei, Taiwan). Identificarea PCR a U. parvum a fost făcută în conformitate cu Kong și colab. [23, 24] și kit-ul master mix (BioNeer, Irvine, California). PCR a fost efectuată cu primeri specifici pentru regiunile foarte conservate la capătul 50 al genei antigenului cu bandă multiplă a U. parvum. Un exemplu pentru diagnosticul U. parvum, UMS-57/UMA222, este prezentat în Tabelul 1 [23, 24]. Grundele pentru detectarea serovarelor UMS3S/UMA26, UMS14S/UMA314A, UMS-83 ​​/ UMA1A și UMS-54/UMA269 (BioNeer, Irvine, California) sunt prezentate în Tabelul 2 [23, 24] și au fost utilizate pentru subtipare de U parvum pentru a amplifica repetitivitatea genelor de antigen cu bandă multiplă a serovarilor U. parvum.

Organism Primer (F)/(R) Secvență (5′-3 ′) Dimensiunea produsului amplificat (bp) Gena țintă
U. parvumUMS-57F (TAA ATC TTA GTG TTC ATA TTT TTT AC -57)3265 ′ Sfârșit al genelor MBA și al regiunilor din amonte
UMA222R (GTA AGTGGA TTA AAT TCA ATG 222)

tabelul 1.

Primer PCR utilizat în detectarea Ureaplasma parvum.

MBA, antigen cu bandă multiplă. Adaptat cu permisiunea de la [23-25].

Organism Primer (F)/(R) Secvență (5′-3 ′) Dimensiunea produsului amplificat (bp) Gena țintă
U. parvum
Serovar 1		UMS-83 ​​/ UMA1AF (TTACT GTA GAA ATT ATG TAA GAT TGC)
R (TTT CTT TTG GTT CTT CAG TTT TTG AAG)		578MBA
U. parvum
Serovar 3		UMS3S/UMA269F (TTA CTG TAG AAA TTA TGT AAG ATT ACC)
R (AA CTA AAT GAC CTT TTT CAA GTG TAC)		400MBA
U. parvum
Serovar 6		UMS-54/UMA269F (AAT CTT AGT GTT CAT ATT TTT TAC TAG)
R (ACCA AAT GAC CTT TTG TAA CTA GAT)		370MBA
U. parvum
Serovar 14		UMS14S/UMA314AF (AAT TAC TGT AGA AAT TAT GTA AGA TTA AT)
R (GTT GTT CTT TAC CTG GTT GTG TAG)		572MBA

masa 2.

Primeri PCR folosiți pentru subtiparea Ureaplasma parvum în serovari.

MBA, antigen cu bandă multiplă; U. parvum, Ureaplasma parvum. Adaptat cu permisiunea de la [23-25].

2.3. Tehnica PCR

Amestecurile de reacție de amplificare de 20 ul conțineau 10 pmol din fiecare primer, 5 ul de șablon ADN și apă PCR adăugată la 20 ul pentru identificarea U. parvum. Condițiile PCR au fost utilizate după cum urmează: denaturarea inițială la 95 ° C timp de 5 min, denaturarea la 95 ° C timp de 30 s, recușire la 58 ° C timp de 30 s, extindere la 72 ° C timp de 1 min timp de 40 de cicluri și final extindere la 72 ° C timp de 5 minute într-un termociclator. Izolatele PCR pozitive pentru U. parvum au fost în continuare subtipate în serovari așa cum este descris în Tabelul 2. Pe scurt, condițiile PCR au fost utilizate după cum urmează: denaturarea inițială la 95 ° C timp de 5 min, denaturarea la 95 ° C timp de 30 s, recoacere la 55 –62 ° C timp de 30 s, extindere la 72 ° C timp de 1 min timp de 40 de cicluri. Produsele PCR amplificate (12,5 ul) au fost vizualizate sub lumină UV după electroforeză în gel de agaroză 2% care a fost colorat cu 0,5 mg/ml de bromură de etidiu. O bandă vizibilă de dimensiunea adecvată la transiluminarea UV a fost considerată un rezultat pozitiv.

3. Analiza statistică

Datele au fost analizate utilizând versiunea 20 a software-ului statistic SPSS (IBM, Armonk, SUA) pentru compararea variabilelor calitative utilizând P

parvum

figura 1.

Ureaplasma spp. ca colonii maronii aurii închise în mediu IH la microscopul luminos 10X.

Figura 2.

Ureaplasma spp. ca aspect granular în mediu IH la microscopul luminos 10X.

4.3. Comparație între grupele de vârstă ale femeilor avortate și procentul de izolare a Ureaplasma spp.

Rezultatele acestui studiu au arătat că pacienții cu vârsta cuprinsă între 17-26 și 27-36 de ani au reprezentat o rată ridicată (46%), respectiv 40,7%, comparativ cu grupul (37-46) reprezentat (13,3%), după cum se arată Figura 3 inclusă în acest studiu. Incidența Ureaplasma spp. infecția a fost, de asemenea, raportată de alte studii ca fiind mai mare la vârsta de 26-30 de ani [31]. Detectarea ridicată a izolației la femeile avortate din grupa de vârstă 17-26 și 27-36 de ani. Acest lucru poate fi atribuit activității sexuale a femeilor împreună cu schimbarea hormonală, astfel încât tractul genital este mai susceptibil la infecție [32]. Rata mare de Ureaplasma spp. infecția detectată în acest studiu sugerează că acest agent este răspândit în rândul femeilor avortate.

Figura 3.

Histogramă care arată distribuția Ureaplasma spp. în funcție de intervalul de vârstă de 10 ani al pacienților cu avort spontan recurent.

Figura 4.

Distribuția genealogică Ureaplasma spp. se izolează printre specimenele clinice.

O explicație pentru aceste variații poate fi legată de tipul de eșantioane investigate pentru izolare, metodele utilizate pentru transport și depozitare și mediile utilizate pentru izolarea primară a Ureaplasma spp. În lumina observației și experienței din timpul acestui studiu, sedimentele de urină centrifugate produc culturi mai pozitive decât specimenul de urină fără centrifugare.

4.5. Detecție moleculară pentru diagnosticarea Ureaplasma parvum prin reacția în lanț a polimerazei (PCR)

Rezultatele au arătat Ureaplasma parvum izolat în proporție (29,6%) la femeile cu avort recurent și (11%) din control, așa cum se arată în Figura 5 (valoarea P

Figura 5.

Prevalența Ureaplasma parvum în rândul grupului de pacienți și al grupului de control.

Figura 6.

Gel de agaroză colorat cu bromură de etidiu care prezintă produs de amplificare PCR cu primeri (326 bp) pentru Ureaplasma parvum. Marcator de referință pentru dimensiunea standard M 100 bp. Benzi (1, 3, 5, 6, 7, 9 și 11): rezultate pozitive ale Ureaplasma parvum. Benzi (2, 4, 8, 10 și 12): probe negative Ureaplasma parvum.

Figura 7.

Distribuția serovarilor Ureaplasma parvum între grupul de pacienți și grupul de control.

Figura 8.

Rezultatele amplificării PCR pentru identificarea serovar 1 (578 bp) și serovar 3 (400 bp). Marcator de referință pentru dimensiunea standard M 100 bp. Lane (1, 5): rezultate serovar 1 pozitive. Banda (2, 3, 4, 6, 7, 8, 9): probe negative. Lane (10, 14): serovar 3 rezultate pozitive. Banda (11, 12, 13, 15, 16, 17): probe negative.

Figura 9.

Rezultatele amplificării PCR pentru identificarea serovar 3 (400 bp), serovar 6 (370 bp) și serovar 14 (572 bp). Marcator de referință pentru dimensiunea standard M 100 bp. Banda (1, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11, 13, 14): probe negative. Banda 2: serovar 3 rezultate pozitive. Lane7: serovar 6 rezultate pozitive. Lane12: serovar 14 rezultate pozitive (Agarose Con. 2% & Voltages 100). * Analiza statistică include valoarea P

5. Concluzie

Rezultatele indică în mod evident că U. parvum poate fi un agent etiologic important pentru avortul recurent. Și U. parvum serovar 3 a fost cel mai frecvent serovar izolat în acest studiu. Poate juca un rol în avortul recurent.