Polimorfismul de lungime a fragmentului de restricție (RFLP) este o tehnică inventată în 1984 de omul de știință englez Alec Jeffreys în timpul cercetării bolilor ereditare. Este folosit pentru analiza tiparelor unice din fragmentele de ADN pentru a diferenția genetic între organisme - aceste tipare se numesc Număr variabil de repetiții tandem (VNTR).

tehnica

Polimorfismul genetic este definit ca diferențele genetice moștenite dintre indivizi în peste 1% din populația normală. Tehnica RFLP exploatează aceste diferențe în secvențele ADN pentru a recunoaște și studia atât variația intraspecie, cât și cea interspecială.

Principiu

Endonucleazele de restricție sunt enzime care taie ADN-ul lung în bucăți scurte. Fiecare endonuclează de restricție vizează secvențe de nucleotide diferite într-o catenă de ADN și, prin urmare, taie la diferite situri.

Distanța dintre locurile de clivaj ale unei anumite endonucleaze de restricție diferă între indivizi. Prin urmare, lungimea fragmentelor de ADN produse de o endonuclează de restricție va diferi atât între organisme individuale, cât și specii.

Cum functioneazã?

RFLP se realizează utilizând o serie de pași descriși pe scurt mai jos:

Extragerea ADN-ului

Pentru început, ADN-ul este extras din sânge, salivă sau alte probe și purificat.

Fragmentarea ADN-ului

ADN-ul purificat este digerat folosind endonucleaze de restricție. Siturile de recunoaștere ale acestor enzime au în general 4 până la 6 perechi de baze în lungime. Cu cât secvența este mai scurtă, cu atât este mai mare numărul de fragmente generate din digestie.

De exemplu, dacă există o scurtă secvență de GAGC care apare în mod repetat într-o probă de ADN. Endonucleaza de restricție care recunoaște secvența GAGC taie ADN-ul la fiecare repetare a modelului GAGC.

Dacă o probă repetă secvența GAGC de 4 ori în timp ce o altă probă o repetă de 2 ori, lungimea fragmentelor generate de enzimă pentru cele două probe va fi diferită.

Electroforeză cu gel

Fragmentele de restricție produse în timpul fragmentării ADN-ului sunt analizate utilizând electroforeza pe gel.

Fragmentele sunt încărcate negativ și pot fi ușor separate prin electroforeză, care separă moleculele în funcție de mărimea și sarcina lor. Probele de ADN fragmentate sunt plasate în camera care conține gelul electroforetic și doi electrozi.

Când se aplică un câmp electric, fragmentele migrează spre electrodul pozitiv. Fragmentele mai mici se mișcă mai repede prin gel, lăsându-le pe cele mai mari în urmă și astfel probele de ADN sunt separate în benzi distincte pe gel.

Vizualizarea benzilor

Gelul este tratat cu coloranți luminescenți pentru a face vizibile benzile ADN.

Aplicații ale RFLP

RFLP a fost utilizat pentru mai multe aplicații de analiză genetică de la invenția sa.

Unele dintre aceste aplicații cheie ale RFLP sunt enumerate mai jos:

  • Pentru a determina starea bolilor genetice, cum ar fi Fibroza chistică la un individ.
  • Pentru a determina sau a confirma sursa unei probe de ADN, cum ar fi testele de paternitate sau investigațiile penale.
  • În cartografierea genetică pentru a determina ratele de recombinare care arată distanța genetică între loci.
  • Pentru a identifica purtătorul unei mutații cauzatoare de boli într-o familie.

Dezavantaje ale RFLP

De la invenția sa, RFLP a fost o tehnică de analiză a genomului utilizată pe scară largă, utilizată în știința criminalistică, medicină și studii genetice. Cu toate acestea, a devenit aproape învechit odată cu apariția unor tehnologii de profilare ADN relativ simple și mai puțin costisitoare, cum ar fi reacția în lanț a polimerazei (PCR).

Procedura RFLP necesită numeroși pași și durează săptămâni pentru a obține rezultate, în timp ce tehnici precum PCR pot amplifica secvențele ADN țintă în doar câteva ore.

În plus, RFLP necesită un eșantion mare de ADN, a cărui izolare poate fi un proces laborios și consumator de timp. În schimb, PCR poate amplifica cantități mici de ADN în câteva ore.

Din numeroase motive precum acestea, tehnica PCR a înlocuit în mare măsură RFLP în majoritatea aplicațiilor care necesită secvențierea ADN, cum ar fi testarea paternității sau analiza criminalistică a probelor.

Mai mult, identificarea polimorfismelor cu un singur nucleotid în Proiectul genomului uman a înlocuit aproape nevoia de RFLP în analiza stării bolii.

Referințe

Lecturi suplimentare

Susha Cheriyedath

Susha are o diplomă de licență în chimie și un master în biochimie de la Universitatea din Calicut, India. A avut întotdeauna un interes deosebit pentru științele medicale și ale sănătății. Ca parte a masteratului, sa specializat în biochimie, cu accent pe microbiologie, fiziologie, biotehnologie și nutriție. În timpul liber, îi place să gătească o furtună în bucătărie cu experimentele sale de copt super-dezordonate.

Citații

Vă rugăm să utilizați unul dintre următoarele formate pentru a cita acest articol în eseu, lucrare sau raport:

Cheriyedath, Susha. (2019, 26 iunie). Tehnica de polimorfizare a lungimii fragmentului de restricție (RFLP). Știri-Medical. Adus pe 15 decembrie 2020 de pe https://www.news-medical.net/life-sciences/Restriction-Fragment-Length-Polymorphism-(RFLP)-Technique.aspx.

Cheriyedath, Susha. "Tehnica de polimorfizare a lungimii fragmentului de restricție (RFLP)". Știri-Medical. 15 decembrie 2020. .

Cheriyedath, Susha. "Tehnica de polimorfizare a lungimii fragmentului de restricție (RFLP)". Știri-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/Restriction-Fragment-Length-Polymorphism-(RFLP)-Technique.aspx. (accesat la 15 decembrie 2020).

Cheriyedath, Susha. 2019. Tehnică de restricționare a lungimii fragmentului (RFLP). News-Medical, consultat 15 decembrie 2020, https://www.news-medical.net/life-sciences/Restriction-Fragment-Length-Polymorphism-(RFLP)-Technique.aspx.

News-Medical.Net furnizează acest serviciu de informații medicale în conformitate cu acești termeni și condiții. Vă rugăm să rețineți că informațiile medicale găsite pe acest site web sunt concepute pentru a sprijini, nu pentru a înlocui relația dintre pacient și medic/medic și sfaturile medicale pe care le pot oferi.

News-Medical.net - Un site AZoNetwork