Analiza Western blot a extractelor din celule 293T, transfectate în mod fals (-) sau transfectate cu constructe care exprimă proteina UBE1 umană cu lungime completă etichetată Myc/DDK (hUBE1-Myc/DDK; +), UBE1L2 umană cu lungime completă etichetată Myc/DDK proteină (hUBE1L2-Myc/DDK; +) și proteină UBE1L umană de lungime completă etichetată Myc/DDK (hUBE1L-Myc/DDK; +), utilizând UBE1L/UBA7 (D6U4S) Rabbit mAb (superior) și DYKDDDDK Tag Anticorp # 2368 (inferior).

Analiza Western blot a extractelor din diverse linii celulare folosind UBE1L/UBA7 (D6U4S) Rabbit mAb.

UBE1L/UBA7 (D6U4S) Rabbit mAb 61266

ube1luba7

Analiza Western blot a extractelor din celule 293T, transfectate în mod fals (-) sau transfectate cu constructe care exprimă proteina UBE1 umană cu lungime completă etichetată Myc/DDK (hUBE1-Myc/DDK; +), UBE1L2 umană cu lungime completă etichetată Myc/DDK proteină (hUBE1L2-Myc/DDK; +) și proteină UBE1L umană cu lungime completă etichetată Myc/DDK (hUBE1L-Myc/DDK; +), utilizând UBE1L/UBA7 (D6U4S) Rabbit mAb (superior) și DYKDDDDK Tag Anticorp # 2368 (inferior).

Analiza Western blot a extractelor din diverse linii celulare folosind UBE1L/UBA7 (D6U4S) Rabbit mAb.

  • Reprezentantul local
  • Informațiile dvs. locale de cumpărare
  • Garantează anticorpii
  • FAQ
  • Suport tehnic
  • Certificat de analiză
  • Date suport
  • produse asemanatoare
  • Utilizarea produsului
  • Protocoale
  • fundal
  • Căi și proteine
  • Referințe și recenzii

Date suport

REACTIVITATE H Mk
SENSIBILITATE Endogen
MW (kDa) 110
Sursă/izotip Iepure IgG

Cheie de aplicare:

  • W-Occidental
  • IP-Imunoprecipitare
  • IHC-Imunohistochimie
  • CIP-Imunoprecipitarea cromatinei
  • DACĂ-Imunofluorescența
  • F-Citometrie în flux
  • E-P-ELISA-peptidă

Cheia de reactivitate încrucișată a speciilor:

  • H-Uman
  • M-Șoarece
  • R-Război
  • Hm-Hamster
  • Mk-Maimuţă
  • Noi-Nurcă
  • C-Pui
  • Dm-D. melanogaster
  • X-Xenopus
  • Z-Zebrafish
  • B-Bovin
  • Dg-Câine
  • Pag-Porc
  • Sc-S. cerevisiae
  • Ce-C. elegans
  • HR-Cal
  • Toate-Toate speciile așteptate
Ubiquitin (E4I2J) Rabbit mAb (biotinilat) # 91112
Phospho-Ubiquitin (Ser65) (E2J6T) Rabbit mAb # 62802
Phospho-Ubiquitin (Ser65) (E5T1W) Rabbit mAb # 70973
ISG15 (22D2) Rabbit mAb # 2758
Ubiquitin (E4I2J) Rabbit mAb # 43124
Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb # 3936
Set de prelevare de anticorpi pentru pliere și stabilitate a proteinelor # 4889
Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb (HRP Conjugate) # 14049
Trusă de prelevare de anticorpi ubiquitină ramificată # 33959

ISG15 Anticorp # 2743

Informații despre utilizarea produsului

Depozitare

Livrat în 10 mM sodiu HEPES (pH 7,5), 150 mM NaCI, 100 μg/ml BSA, 50% glicerol și mai puțin de 0,02% azidă de sodiu. A se păstra la –20 ° C. Nu alicotați anticorpul.

Protocol

Protocolul Western Blotting

Pentru Western blots, incubați membrana cu anticorp primar diluat în 5% greutate/volum BSA, 1X TBS, 0,1% Tween ® 20 la 4 ° C cu agitare ușoară, peste noapte.

NOTĂ: Vă rugăm să consultați pagina web a produsului anticorp primar pentru diluarea recomandată a anticorpilor.

A. Soluții și reactivi

De la pregătirea eșantionului până la detectare, reactivii de care aveți nevoie pentru Western Blot sunt acum într-un singur kit convenabil: # 12957 Western Blotting Application Solutions Kit

NOTĂ: Pregătiți soluții cu osmoză inversă deionizată (RODI) sau apă de calitate echivalentă.

B. Blotarea proteinelor

Un protocol general pentru prepararea probei.

  1. Tratați celulele prin adăugarea de medii noi care conțin regulator pentru timpul dorit.
  2. Aspirați mass-media din culturi; spălați celulele cu 1X PBS; aspirat.
  3. Lizați celulele adăugând 1X tampon de probă SDS (100 perl per godeu de placă cu 6 godeuri sau 500 (l pentru o placă de 10 cm diametru). Îndepărtați imediat celulele de pe placă și transferați extractul într-un tub de microcentrifugă. Păstrați pe gheață.
  4. Sonicați timp de 10-15 secunde pentru a finaliza liza celulară și tăiați ADN-ul (pentru a reduce vâscozitatea probei).
  5. Se încălzește un eșantion de 20 de probe la 95-100 ° C timp de 5 minute; rece pe gheață.
  6. Microcentrifuga timp de 5 min.

Încărcați 20 de ontol pe gelul SDS-PAGE (10 cm x 10 cm).

NOTĂ: Se recomandă încărcarea markerilor de greutate moleculară preconizați (# 13953, 5 µl/bandă) pentru a verifica electrotransferul și scara de proteine ​​biotinilate (# 7727, 10 µl/bandă) pentru a determina greutățile moleculare.

  • Electrotransfer la membrana de nitroceluloză (# 12369).

    • C. Blocarea membranei și incubațiile de anticorpi

    NOTĂ: Volumele sunt pentru membrană de 10 cm x 10 cm (100 cm 2); pentru membrane de dimensiuni diferite, reglați volumele în mod corespunzător.

    I. Blocarea membranei

    1. (Opțional) După transfer, spălați membrana de nitroceluloză cu 25 ml TBS timp de 5 minute la temperatura camerei.
    2. Se incubează membrana în 25 ml de tampon de blocare timp de 1 oră la temperatura camerei.
    3. Se spală de trei ori timp de 5 min fiecare cu 15 ml TBST.

    II. Incubația primară a anticorpilor

    1. Incubați membrana și anticorpul primar (la diluarea și diluantul adecvat, așa cum se recomandă în pagina web a produsului) în 10 ml tampon de diluare a anticorpului primar cu agitare ușoară peste noapte la 4 ° C.
    2. Se spală de trei ori timp de 5 min fiecare cu 15 ml TBST.
    3. Incubați membrana cu IgG anti-iepure, anticorp legat de HRP (# 7074 la 1: 2000) și anti-biotină, anticorp legat de HRP (# 7075 la 1: 1000–1: 3000) pentru a detecta markeri de proteine ​​biotinilate în 10 ml de tampon de blocare cu agitare ușoară timp de 1 oră la temperatura camerei.
    4. Se spală de trei ori timp de 5 min fiecare cu 15 ml TBST.
    5. Continuați cu detectarea (secțiunea D).

    D. Detectarea proteinelor

    Instrucțiunile de utilizare:

    1. Se spală HRP legat de membrană (anticorp conjugat) de trei ori timp de 5 minute în TBST.
    2. Pregătiți 1X Reactiv ECL SignalFire ™ (# 6883) prin diluarea unei părți Reactiv 2X A și o parte Reactiv B 2X (de exemplu, pentru 10 ml, adăugați 5 ml Reactiv A și 5 ml Reactiv B). Amesteca bine.
    3. Se incubează substratul cu membrană timp de 1 minut, se îndepărtează soluția în exces (membrana rămâne umedă), se înfășoară în plastic și se expune la film cu raze X.

    * Evitați expunerea repetată la piele.

    postat în iunie 2005

    revizuit în iunie 2020

    Specificitate/Sensibilitate

    UBE1L/UBA7 (D6U4S) mAb de iepure recunoaște nivelurile endogene ale proteinei UBE1L/UBA7 totale. Acest anticorp nu reacționează încrucișat cu proteinele UBE1/UBA1 sau UBE1L2/UBA6.

    Reactivitatea speciilor:

    Sursă/purificare

    Anticorpul monoclonal este produs prin imunizarea animalelor cu o peptidă sintetică corespunzătoare reziduurilor din apropierea capătului carboxi al proteinei umane UBE1L/UBA7.

    fundal

    Enzima activatoare a Ubiquitinei Proteina asemănătoare E1/Enzima activatoare Ubiquitina 7 (UBE1L/UBA7) este enzima activatoare pentru ISG15. Studiile de cercetare au sugerat că pierderea expresiei UBE1L/UBA7 contribuie la dezvoltarea cancerului pulmonar datorită inhibării compromise a expresiei ciclinei D1 (12-15). UBE1L/UBA7 a fost, de asemenea, implicat în patogeneza leucemiei promielocitice acute printr-un mecanism în care UBE1L/UBA7 determină ISG15ilarea proteinei de fuziune PML-RARα oncogenă pentru a promova degradarea acesteia (16,17).

    Căi și proteine

    Explorează căi + proteine ​​legate de acest produs.