Cromatograma UPLC a sucului de V. opulus purificat (PJ) la 280 nm. Consultați Tabelul 1 pentru identificarea fiecărui vârf numerotat.

abateri standard

Efect inhibitor al sucului proaspăt (FJ) (A), sucului purificat (PJ) (B) și Orlistat (C) asupra lipazei pancreatice. Datele sunt mijloace de teste triplicate ± abateri standard.

Influența V. opulus FJ și PJ asupra activității metabolice a celulelor 3T3L-1 determinată de testul PrestoBlue după expunerea la 48 h de FJ (A) și PJ (B); celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt media ± abateri standard de la cel puțin trei experimente independente, n ≥ 12; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele martor (netratate), *** p ≤ 0,001. Morfologia celulelor 3T3L1 observată în a 5-a zi a procesului de diferențiere celulară (C) cu 25 și 50 μg/mL de PJ și 100 μg/mL de FJ; câmpurile alese aleatoriu au fost fotografiate la contrast de fază × 200 și la un microscop fluorescent (celule colorate cu calceină AM 2 µM).

Influența preparatelor V. opulus FJ și PJ asupra acumulării picăturilor de lipide în celulele 3T3-L1 colorate cu roșu de Nil observate în a 7-a zi de diferențiere (A). Celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt medii ± abateri standard de la cel puțin trei experimente independente, n ≥ 12; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele martor ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001. Picăturile de lipide celulare cu roșu de Nil au fost vizualizate la microscop fluorescent (mărire 200 ×) (B). Colorarea DAPI a permis vizualizarea nucleelor ​​celulare cu 25 μg/mL de PJ și 100 μg/mL de FJ.

Influența extractelor de V. opulus asupra nivelului trigliceridelor (A) și a absorbției analogice a acidului gras TF2-C12 măsurată în celule 3T3L1 în a 7-a zi de diferențiere (B); celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt media ± abateri standard de la cel puțin trei experimente independente, n ≥ 9; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele martor * p ≤ 0,05, *** p ≤ 0,001. Captarea celulară a analogului FFA-C12 vizualizat la microscop fluorescent (mărire 400 ×) (C).

Activitatea lipolitică a preparatelor V. opulus FJ și PJ pe 3T3L1 diferențiat; ca martor pozitiv s-a utilizat 10 uM izoproterenol; celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt medii ± abateri standard, n = 6; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele martor * p ≤ 0,05, *** p ≤ 0,001.

Influența preparatelor V. opulus FJ și PJ asupra expresiei genetice în celule diferențiate 3T3-L1 cuantificate prin PCR în timp real și normalizate utilizând β-actina ca genă de referință. Celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt medii ± abateri standard, n ≥ 4; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele martor (netratate), * p ≤ 0,05, ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001.

Efectul preparatelor V. opulus FJ și PJ asupra nivelului relativ de proteine ​​ale proteinelor cruciale implicate în adipogeneză și lipogeneză determinat de analiza Western blot în celule 3T3-L1 diferențiate (A); nivelul de PPARγ determinat cu test ELISA în fracția nucleară (B); celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt medii ± abateri standard, n ≥ 5; semnificația statistică a fost calculată între celulele de tratament și celulele martor (netratate), * p ≤ 0,05, ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001.

Efectul preparatelor V. opulus FJ și PJ asupra nivelurilor relative de proteine ​​fosforilate implicate în adipogeneză determinate de analiza Western blot în celule 3T3-L1 diferențiate. Celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt medii ± abateri standard, n ≥ 4; semnificația statistică a fost calculată între celulele de tratament și celulele de control (netratate) cu *** p ≤ 0,001.

Influența preparatelor V. opulus FJ și PJ asupra generației de specii reactive intracelulare de oxigen analizate prin test DCFH-DA în celule 3T3-L1 diferențiate (A); celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; ca control pozitiv pentru generarea ROS, s-a folosit 500 µM t-BOOH; valorile sunt media ± abateri standard de la cel puțin trei experimente independente, n ≥ 9; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele martor * p ≤ 0,05, ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001. Celule vizualizate sub contrast de fază și microscop fluorescent (mărire 200 ×) (B).

Influența preparatelor V. opulus FJ și PJ asupra expresiei ARNm (A) și secreției de proteine ​​(B) a adipokinelor și citokinelor selectate în celulele 3T3-L1 diferențiate; celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt medii ± abateri standard, n = 6; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele martor * p ≤ 0,05, ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001.

Efectul preparatelor V. opulus FJ (25 și 100 pg/mL) și PJ (25 pg/mL) asupra activării PPARγ în testul genei reporter GeneBLAzer® PPAR gamma 293H DA; ca agonist a fost utilizată rosiglitazonă 1 uM, în timp ce ca antagonist 1 uM T0070967; celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt medii ± abateri standard, n = 4; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele martor cu * p ≤ 0,05, ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele după tratamentul cu rosiglitazonă cu ## p ≤ 0,01, ### p ≤ 0,001.

Interacțiunea compușilor fenolici testați cu receptorul PPARγ verificată cu andocare moleculară. Situl activ al receptorului PPARγ este situat în spatele helixului E3, unde se formează o mică cavitate. Un agonist al PPARγ, rosiglitazona, intră în situsul receptor-activ și localizează adânc în interiorul buzunarului de legare. Modele moleculare de rosiglitazonă, (+) - catehină, acid clorogenic, procianidină B1 și procianidină C1 sunt prezentate la intrarea în locul activ de buzunar. Orientarea modelelor este prezentată în comparație cu modelul de cristal al rosiglitazonei. Interacțiunile modelelor cu afinități de legare corespunzătoare sunt prezentate în ultimele două coloane. Andocarea moleculară a fost efectuată cu AutoDock Vina.

V. opulus suc compuși fenolici ca modulatori ai metabolismului lipidelor - mecanismul de acțiune propus. V. opulus reglează în jos adipogeneza celulelor 3T3-L1, scade expresia și activitatea receptorului nuclear PPARγ, precum și a proteinelor reglate de PPARγ (de exemplu, acidul gras sintetaza (FAS), acetil-CoA carboxilaza (ACC)), diminuează eliberarea citokinelor inflamatorii și a leptinei, posedă activitate citoprotectoare împotriva generării ROS și crește secreția de adiponectină. V. opulus inhibă pancreasul-lipaza și limitează eliberarea de acizi grași din matricea alimentară.

Abstract

Cromatograma UPLC a sucului de V. opulus purificat (PJ) la 280 nm. Consultați Tabelul 1 pentru identificarea fiecărui vârf numerotat.

Efect inhibitor al sucului proaspăt (FJ) (A), sucului purificat (PJ) (B) și Orlistat (C) asupra lipazei pancreatice. Datele sunt mijloace de teste triplicate ± abateri standard.

Influența V. opulus FJ și PJ asupra activității metabolice a celulelor 3T3L-1 determinată de testul PrestoBlue după expunerea la 48 h de FJ (A) și PJ (B); celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt media ± abateri standard de la cel puțin trei experimente independente, n ≥ 12; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele martor (netratate), *** p ≤ 0,001. Morfologia celulelor 3T3L1 observată în a 5-a zi a procesului de diferențiere celulară (C) cu 25 și 50 μg/mL de PJ și 100 μg/mL de FJ; câmpurile alese aleatoriu au fost fotografiate la contrast de fază × 200 și la un microscop fluorescent (celule colorate cu calceină AM 2 µM).

Influența preparatelor V. opulus FJ și PJ asupra acumulării picăturilor de lipide în celulele 3T3-L1 colorate cu roșu de Nil observate în a 7-a zi de diferențiere (A). Celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt medii ± abateri standard de la cel puțin trei experimente independente, n ≥ 12; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele martor ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001. Picăturile de lipide celulare cu roșu de Nil au fost vizualizate la microscop fluorescent (mărire 200 ×) (B). Colorarea DAPI a permis vizualizarea nucleelor ​​celulare cu 25 μg/mL de PJ și 100 μg/mL de FJ.

Influența extractelor de V. opulus asupra nivelului trigliceridelor (A) și a absorbției analogice a acidului gras TF2-C12 măsurată în celule 3T3L1 în a 7-a zi de diferențiere (B); celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt media ± abateri standard de la cel puțin trei experimente independente, n ≥ 9; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele martor * p ≤ 0,05, *** p ≤ 0,001. Captarea celulară a analogului FFA-C12 vizualizat la microscop fluorescent (mărire 400 ×) (C).

Activitatea lipolitică a preparatelor V. opulus FJ și PJ pe 3T3L1 diferențiat; ca martor pozitiv s-a utilizat 10 uM izoproterenol; celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt medii ± abateri standard, n = 6; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele martor * p ≤ 0,05, *** p ≤ 0,001.

Influența preparatelor V. opulus FJ și PJ asupra expresiei genetice în celule diferențiate 3T3-L1 cuantificate prin PCR în timp real și normalizate utilizând β-actina ca genă de referință. Celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt medii ± abateri standard, n ≥ 4; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele martor (netratate), * p ≤ 0,05, ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001.

Efectul preparatelor V. opulus FJ și PJ asupra nivelului relativ de proteine ​​ale proteinelor cruciale implicate în adipogeneză și lipogeneză determinat de analiza Western blot în celule 3T3-L1 diferențiate (A); nivelul de PPARγ determinat cu test ELISA în fracția nucleară (B); celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt medii ± abateri standard, n ≥ 5; semnificația statistică a fost calculată între celulele de tratament și celulele martor (netratate), * p ≤ 0,05, ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001.

Efectul preparatelor V. opulus FJ și PJ asupra nivelurilor relative de proteine ​​fosforilate implicate în adipogeneză determinate de analiza Western blot în celule 3T3-L1 diferențiate. Celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt medii ± abateri standard, n ≥ 4; semnificația statistică a fost calculată între celulele de tratament și celulele de control (netratate) cu *** p ≤ 0,001.

Influența preparatelor V. opulus FJ și PJ asupra generației de specii reactive intracelulare de oxigen analizate prin test DCFH-DA în celule 3T3-L1 diferențiate (A); celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; ca control pozitiv pentru generarea ROS, s-a folosit 500 µM t-BOOH; valorile sunt media ± abateri standard de la cel puțin trei experimente independente, n ≥ 9; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele martor * p ≤ 0,05, ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001. Celule vizualizate sub contrast de fază și microscop fluorescent (mărire 200 ×) (B).

Influența preparatelor V. opulus FJ și PJ asupra expresiei ARNm (A) și secreției de proteine ​​(B) a adipokinelor și citokinelor selectate în celulele 3T3-L1 diferențiate; celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt medii ± abateri standard, n = 6; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele martor * p ≤ 0,05, ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001.

Efectul preparatelor V. opulus FJ (25 și 100 pg/mL) și PJ (25 pg/mL) asupra activării PPARγ în testul genei reporter GeneBLAzer® PPAR gamma 293H DA; ca agonist a fost utilizată rosiglitazonă 1 uM, în timp ce ca antagonist 1 uM T0070967; celulele martor nu au fost expuse niciunui compus; valorile sunt medii ± abateri standard, n = 4; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele martor cu * p ≤ 0,05, ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001; semnificația statistică a fost calculată comparativ cu celulele după tratamentul cu rosiglitazonă cu ## p ≤ 0,01, ### p ≤ 0,001.

Interacțiunea compușilor fenolici testați cu receptorul PPARγ verificată cu andocare moleculară. Situl activ al receptorului PPARγ este situat în spatele helixului E3, unde se formează o mică cavitate. Un agonist al PPARγ, rosiglitazona, intră în situsul receptor-activ și localizează adânc în interiorul buzunarului de legare. Modele moleculare de rosiglitazonă, (+) - catehină, acid clorogenic, procianidină B1 și procianidină C1 sunt prezentate la intrarea în locul activ de buzunar. Orientarea modelelor este prezentată în comparație cu modelul de cristal al rosiglitazonei. Interacțiunile modelelor cu afinități de legare corespunzătoare sunt prezentate în ultimele două coloane. Andocarea moleculară a fost efectuată cu AutoDock Vina.