L. Rrumbullaku
Albania

Tutore
A. De Agostini
Departamentul de Obstetrică și Ginecologie
Spitalul Universitar din Geneva

Spermatozoizii au fost descriși pentru prima dată de Leeuwenhoek în secolul al XVII-lea, dar abia în 1928 s-a constatat că numărul spermatozoizilor este asociat cu potențialul de fertilitate (17). De atunci, s-au dezvoltat o varietate de teste ale spermei și parametrii materialului seminal cu speranța de a clarifica dacă un bărbat ar putea să-și impregneze partenerul.

MacLeod (1942), MacLeod și Gold (1953), Eliasson (1971) și Hellinga (1949,1976) au condus baza științifică a analizei convenționale a spermatozoizilor și tehnicile recomandate de aceștia sunt încă considerate referința pentru metode mai avansate (6) ).

Analiza semenului cuprinde un set de măsurători descriptive ale spermatozoizilor și parametrilor lichidului seminal care ajută la estimarea calității materialului seminal (4).

Analiza convențională a materialului seminal include măsurarea anumitor aspecte ale spermatozoizilor, cum ar fi concentrația, motilitatea și morfologia și plasma seminală. Cuantificarea și identificarea celulelor non-spermatozoide și detectarea anticorpilor antispermă fac, de asemenea, parte din analiza de bază a materialului seminal (6).

Valorile normale ale parametrilor materialului seminal emise de Organizația Mondială a Sănătății (OMS) în 1992 sunt utilizate în general ca valori de referință (Tabelul I).

În mod ideal, fiecare laborator ar trebui să își stabilească propriile valori normale, reflectând populația specifică analizată.

Tabelul I. Valorile normale ale variabilelor materialului seminal (OMS 1992)

Teste standard
volum 2,0 ml sau mai mult
pH 7.2-8.0
concentrația spermei 20x10 6 spermatozoizi/ml sau mai mult
numărul total de spermatozoizi 40x10 6 spermatozoizi per ejaculare sau mai mult
motilitate 50% sau mai mult cu progresie înainte (categoriile a și b) sau 25% sau mai mult cu progresie rapidă (categoria a) în decurs de 60 de minute de ejaculare
morfologie 30% sau mai mult cu forme normale
vitalitate 75% sau mai mult vii, adică cu excepția colorantului
celule albe mai puțin de 1x10 6/ml
test imunobead mai puțin de 20% spermatozoizi cu particule aderente
Test MAR mai puțin de 10% spermatozoizi cu particule aderente
Teste opționale
α -Glucozidază (neutră) 20 mU sau mai mult per ejaculare
zinc (total) 2,4 μ-mol sau mai mult per ejaculare
acid citric (total) 52 μ-mol sau mai mult per ejaculare
fosfatază acidă (total) 200 U sau mai mult pe ejaculare
fructoza (total) 13 μ-mol sau mai mult per ejaculare

Tabelul II. Nomenclatura pentru variabilele de material seminal (OMS 1992)

normozoospermie ejaculare normală așa cum este definită în tabelul I
oligozoospermie concentrație de spermă mai mică de 20x10 6/ml
astenozoospermia mai puțin de 50% spermatozoizi cu progresie înainte (categoriile a și b) sau mai puțin de 25% spermatozoizi cu categoria a mișcare
teratozoospermie mai puțin de 30% spermatozoizi cu morfologie normală
oligoastenoteratozoospermia semnifică perturbarea tuturor celor trei variabile (poate fi utilizată combinația a doar două prefixe)
azoospermie fără spermatozoizi în ejaculare
aspermia fără ejaculare

Materialul seminal normal este un amestec de spermatozoizi suspendați în secrețiile din testicul și epididim, care sunt amestecate în momentul ejaculării cu secrețiile din prostată, veziculele seminale și glandele bulboretrale. Compoziția finală este un fluid vâscos care cuprinde ejaculatul (25).

Colectarea și livrarea probelor

Următoarele instrucțiuni pentru colectarea și livrarea probelor se bazează pe recomandările OMS (24,25). Subiectului ar trebui să i se furnizeze instrucțiuni scrise sau orale clar privind colectarea și, dacă este necesar, transportul probei de material seminal.

    Proba trebuie recoltată după minimum 48 de ore și nu mai mult de 7 zile de abstinență sexuală. Numele bărbatului, perioada de abstinență, data și ora colectării trebuie înregistrate. Intervalul de timp dintre ultima ejaculare și recoltarea eșantionului ar trebui să fie bine definit și preferențial cât mai constant posibil, pentru a permite o interpretare fiabilă a rezultatelor, în special, a concentrației și motilității spermei (6). Când durata abstinenței este mai mare de 7 zile, motilitatea spermei, adică proporția de spermatozoizi cu motilitate progresivă rapidă, poate scădea (6). Dacă durata abstinenței este de 2 cm (6, 25). O altă metodă de estimare a consistenței nu utilizează ace și se realizează prin introducerea unei tije de sticlă în probă și prin observarea firului care se formează la retragerea tijei. Din nou firul nu trebuie să depășească 2 cm (6, 25).

Consistența crescută are același sens clinic ca lichefierea anormală și poate fi legată de disfuncția prostatei rezultată din inflamația cronică (6).

Specimenele foarte vâscoase pot afecta disponibilitatea spermei fertile la locul fertilizării (18).

Componenta principală a volumului ejaculat este alcătuită din secreții din glandele accesorii. Cea mai mare parte a volumului este secretată de veziculele seminale și între 0,5 și 1 ml provine din prostată (6). Volumul ejaculatului trebuie măsurat fie cu un cilindru gradat, fie prin aspirarea întregii probe într-o pipetă cu gură largă prin intermediul unui dispozitiv mecanic (25). Volumul eșantionului poate fi, de asemenea, determinat direct în tubul de colectare prin cântărire, presupunând că 1ml este egal cu 1g. (9). Astfel, poate fi evitată pierderea volumului asociată cu transferul din tubul de colectare fie în alt tub, fie într-o pipetă (9).

Un volum de ejaculare scăzut poate reflecta anomalii în sinteza sau secreția de lichide ale glandei sexuale accesorii (18). Poate fi, de asemenea, indicativ al unei obstrucții fizice undeva în tractul reproductiv (18) sau poate apărea în caz de ejaculare incompletă sau (parțial) retrogradă (6).

Volumele mari se găsesc uneori în asociere cu varicocele sau după perioade relativ lungi de abstinență sexuală (6).

PH-ul este determinat de secrețiile acide ale prostatei și secrețiile alcaline ale veziculelor seminale. În mod normal, ar trebui să fie în intervalul 7,2-8,0 (25).

Recent, un autor a arătat (8) că valorile medii ale pH-ului sunt în mod constant cu mult peste 8,0, indiferent de metoda de analiză și de momentul examinării și a sugerat că gama valorilor normale trebuie revizuită în continuare.

Pentru a testa pH-ul, se folosește intervalul de hârtie pH 6,1 - 10,0. Indiferent de tipul de hârtie cu pH utilizat pentru această analiză, acuratețea acesteia trebuie verificată în raport cu standardele cunoscute înainte de utilizarea în analiza de rutină a materialului seminal (6, 25).

Dacă pH-ul depășește 8,0, infecția trebuie suspectată cu scăderea secreției de produse acide de către prostată, cum ar fi acidul citric (101). PH-ul anormal poate fi, de asemenea, înregistrat în cazurile de ejaculare incompletă. PH extrem de acid (20% din suprafața capului ocupată de zone vacuolare nepătate) sau capete duble sau orice combinație a acestora.

  • Defecte ale gâtului și ale piesei mijlocii, inclusiv coada absentă, coada neinserată sau îndoită (coada formează un unghi de aproximativ 90 ° față de axa lungă a capului), mijlocul distins/neregulat/îndoit, mijlocul anormal de subțire sau orice combinație a acestora.
  • Defecte ale cozii, inclusiv scurte, multiple, ac de păr, lățime ruptă, neregulată sau cozi înfășurate, cozi cu picături terminale sau orice combinație a acestora.
  • Picături citoplasmatice mai mari de o treime din suprafața unui cap de spermă normal.

    • analiza

    Tehnica tradițională de pene (prin care marginea unui al doilea diapozitiv este utilizată pentru a trage o picătură de material seminal de-a lungul suprafeței diapozitivului curățat) poate fi utilizată pentru a face pete subțiri de spermatozoizi. Frotiul Papanicolaou pentru colorarea spermatozoizilor este cea mai utilizată metodă în laboratoarele de andrologie. În practica noastră am încercat metode mai simple: hematoxilina Meyer, hematoxilina Harris și Giemsa. Am raportat că aceste metode nu sunt la fel de elegante ca metoda Papanicolaou, dar permit clasificarea spermatozoizilor în grupele principale cu aceeași precizie (15).

    Morfologia spermei oferă informații despre funcția tractului reproductiv și este un predictor al potențialului de fertilitate al omului.

    Aberațiile fizice ale spermei pot apărea în timpul producției de spermă sau în timpul depozitării în epididim. În cazurile de teratozoospermie, ar trebui să începeți mai întâi prin excluderea prezenței sindroamelor genetice monomorfe, cum ar fi globozoospermia, microcefalia și spermatozoizii cu coadă scurtă (4). Numărul crescut de spermatozoizi imaturi se poate datora disfuncției epididimale sau este o consecință a ejaculărilor frecvente. Numărul crescut de spermatozoizi cu capete conice se găsește în asociere cu varicocele. Într-un studiu recent, am raportat că procentul de spermatozoizi conici, spermatozoizii care conțin picături citoplasmatice și spermatozoizii cu coada îndoită sunt semnificativ crescuți la pacienții cu varicocel comparativ cu martorii (16).

    Utilitatea evaluării morfologiei spermatozoizilor ca predictor al potențialului fertilizator al unui om a fost adesea contestată din cauza diferitelor sisteme de clasificare, a diferitelor tehnici de pregătire a diapozitivelor și a problemelor cu reproductibilitatea datorită variațiilor observatorilor (12).

    Conform literaturii, importanța morfologiei spermei ca predictor unic și independent al fertilizării in-vivo și in-vitro pare să fie dovedită (12).

    Testarea acoperirii cu anticorpi a spermatozoizilor

    Prezența anticorpilor anti-spermatozoizi în material seminal poate modifica capacitatea de fertilizare a spermei. Fiind haploide, celulele spermatozoide sunt imunogene și prezintă antigeni de suprafață diferiți de omologii lor diploizi (4). În circumstanțe normale, acestea sunt protejate de sistemul imunitar al omului printr-o membrană bazală care constituie bariera sângelui-testicul. Când această barieră este ruptă, celulele spermatozoizilor induc sinteza anticorpilor anti-spermatozoizi (4). Prezența anticorpilor spermatozoizi care acoperă spermatozoizii este tipică și este considerată a fi specifică infertilității imunologice (6). Anticorpii spermatozoizi din material seminal aparțin claselor de imunoglobulină IgG, IgA sau rar IgM. Există unele date care sugerează că anticorpii IgA pot avea o importanță clinică mai mare decât anticorpii IgG. Testul de screening pentru anticorpi se efectuează pe proba de material seminal proaspăt și utilizează fie metoda Immunobead, fie testul mixt de reacție antiglobulină (test MAR).

    Imunobeads sunt sfere de poliacrilamidă cu imunoglobuline anti-umane de iepure legate co-valent. Prezența anticorpilor IgG, IgA și IgM poate fi evaluată simultan cu acest test. Spermatozoizii sunt spălați cu lichid seminal prin centrifugare repetată și resuspendați în tampon. Suspensia de spermă este amestecată cu o suspensie de imunobeads. Testul este considerat pozitiv atunci când 25% sau mai mult dintre spermatozoizii mobili au legare la Immunobead (25).

    Testul IgG MAR se efectuează prin amestecarea semințelor proaspete, netratate, cu particule de latex sau celule sanguine de oaie acoperite cu IgG uman. La acest amestec se adaugă un antiser monospecific antiuman-IgG. Formarea de aglutinate mixte între particule și spermatozoizi mobili dovedește prezența anticorpilor IgG pe spermatozoizi (25). Diagnosticul infertilității imunologice este probabil atunci când 50% sau mai mult din sperma mobilă are particule aderente. Infertilitatea imunologică este suspectată atunci când 10% -50% din sperma mobilă are particule aderente.

    Anticorpii spermatozoizi pot influența funcția spermatozoizilor într-o varietate de moduri. De exemplu, aglutinarea spermei și anticorpii imobilizatori ar putea limita numărul de celule fertile ale spermei la locul fertilizării (18). Producția de anticorpi împotriva macromoleculelor de suprafață a spermei ar putea interfera cu evenimentele critice precursoare ale fertilizării fiziologice, cum ar fi capacitația și reacția acrosomică (18). De asemenea, este posibil ca anticorpii produși împotriva sistemelor enzimatice intraacrosomale esențiale, cum ar fi proacrosin-acrosin, să afecteze penetrarea spermei prin investiții în ouă (18).

    Indiferent de metoda de acțiune, anticorpii spermatozoizi s-au dovedit a afecta fertilitatea și pot reprezenta până la 10% din cuplurile a căror infertilitate este inexplicabilă.

    Infecția tractului genital, varicocelul, criptorhidia, torsiunea testiculară și boala autoimună sunt cele mai frecvente afecțiuni asociate cu anticorpii antispermici (19).

    Există diferiți markeri biochimici ai funcției glandei accesorii, de exemplu, acid citric, zinc și fosfatază acidă pentru glanda prostatică; fructoză și prostaglandine pentru veziculele seminale, L-carnitină liberă, glicerofosfocolină și alfa-glucozidază pentru epididim (25). O funcție secretorie scăzută se reflectă într-o ieșire totală scăzută a markerului (markerilor) specifici, care poate fi, prin urmare, utilizată pentru evaluarea funcției secretoare a glandei accesorii. O infecție poate provoca uneori o scădere considerabilă a funcției secretoare a acestor glande (25). Determinarea fructozei este utilă și în cazurile de disgenezie a veziculelor seminale și în cazurile rare de obstrucție a conductelor ejaculatoare.

    Diagnosticul de laborator al infertilității masculine a fost un subiect de studiat timp de mai multe decenii.

    Datorită varietății de posibile anomalii ale spermei și a materialului seminal, o abordare cuprinzătoare care utilizează mai multe teste este în general utilizată pentru a evalua integritatea specimenelor de material seminal.

    După coitus, bărbații trebuie să depună un număr adecvat de spermatozoizi funcționali în vaginul partenerului său pentru a avea loc sarcina. (18). În consecință, funcția testiculară (endocrină, anatomică, biochimică) trebuie să fie normală pentru ca spermatogeneza să se desfășoare normal.

    În plus, sperma trebuie transportată printr-un sistem funcțional de canal de reproducere masculin, depozitat pentru maturare în epididim și amestecat cu fluide accesorii ale glandelor sexuale.

    În cele din urmă, sperma care conține material seminal trebuie expulzat în vagin; care necesită un sistem nervos intact care va induce erecția penisului și ejaculare normală (18). Anomaliile din aceste sisteme duc în cele din urmă la subfertilitate sau infertilitate.

    Testarea fertilității masculine este concepută pentru a evalua calitatea și cantitatea spermatozoizilor mobili prezenți în ejaculat, precum și potențialul fertilizant al specimenului unei persoane.

    Din motivele menționate mai sus, nu există un singur test care să confirme în mod absolut fertilitatea sau infertilitatea unui individ.

    Trebuie subliniat faptul că materialul seminal este o excepție în rândul fluidelor biologice, deoarece parametrii săi prezintă variații foarte mari intra și interindividuale (4).

    Când parametrii dintr-un specimen de material seminal diferă considerabil de la o populație mare de bărbați testați, este posibil ca ejacularea să fie subfertilă (18).

    Mai multe specimene sunt necesare pentru a stabili că un om produce în mod constant semințe anormale.

    Dovezile biologice ale sterilității masculine sunt prezente numai în cazuri de azoospermie sau globozoospermie sau în prezența unei lipse complete a motilității spermei cu deficiențe genetice de bază, cum ar fi sindromul Kartageners.

    Deoarece astfel de cazuri de sterilitate masculină sunt mai puțin frecvente, clinicienii se așteaptă să obțină o indicație clară a potențialului fertilizator al bărbaților din analiza materialului seminal.

    Valoarea clinică a parametrilor tradiționali ai materialului seminal în diagnosticul infertilității masculine a făcut recent obiectul unei dezbateri considerabile.

    Unele autorități susțin în mod clar că, în afară de diagnosticul de azoospermie (sau oligozoospermie foarte severă), o evaluare de bază a materialului seminal are o valoare clinică redusă (2).

    Diagnosticul unui eșantion de material seminal ca „anormal” sau „normal” utilizând liniile directoare ale OMS este artificial și are o valoare diagnostică redusă.

    Este bine documentat că un număr considerabil de bărbați fertili sunt diagnosticați ca anormali dacă se utilizează astfel de criterii (2).

    Cu toate acestea, mai multe studii mai puțin cuprinzătoare au examinat valoarea predictivă a caracteristicilor tradiționale ale materialului seminal pentru fertilitatea in vivo și au concluzionat că acești parametri sunt predictivi pentru rezultatul sarcinii (2).

    Disponibilitatea acestor date permite estimarea probabilității concepției ulterioare pentru un cuplu nou care frecventează clinica pe baza parametrilor materialului seminal (2).

    În plus față de furnizarea unei valori diagnostice/predictive pentru concepția in-vivo, există o multitudine de studii care documentează evaluarea parametrilor tradiționali ai materialului seminal care sunt clinic utili în gestionarea unui cuplu care necesită ART. Recent s-a demonstrat că sub o valoare limită de 1x106 spermatozoizi mobili total prezenți în material seminal nu s-au realizat sarcini după IUI (5).

    De asemenea, se raportează (3) că se obține o rată de sarcină semnificativ mai mică pe ciclu dacă proporția de spermatozoizi normali din material seminal a fost editată de Aldo Campana,