SCRISOARE DE CERCETARE

  • Articol complet
  • Cifre și date
  • Referințe
  • Citații
  • Valori
  • Licențierea
  • Reimprimări și permisiuni
  • PDF

ABSTRACT

Acidul Aristolochic-I (AA-I) este prezent în mod obișnuit ca produs natural în plante medicinale, cum ar fi Asarum și Radix aristolochiae. S-a raportat că utilizarea abuzivă a unor produse de slăbire și a suplimentelor alimentare care conțin AA-I ca regulator cauzează cancer, hepatită acută și insuficiență renală. Prin urmare, controlul calității și cuantificarea AA-I în aceste produse la un nivel de urmărire sunt semnificativ necesare. În această abordare, pentru determinarea AA-I a fost utilizată o metodă de detectare a chemiluminescenței (CL) simplă și precisă a injecției secvențiale (SIA). Nanoparticulele de aur au fost utilizate pentru a spori semnalul CL al reacției luminol-fericianură-AA-I. Rezultatele au arătat că metoda propusă a afișat o relație liniară de 10-20.000 ng mL −1, (r = 0,9992) cu 10 și 3 ng mL -1 ca limite minime de cuantificare și respectiv de detectare. Au fost testate posibilele interferențe, cum ar fi unele metale comune, aditivi și compuși de acțiune farmacologici asociați. Rezultatele SIA-CL înregistrate au fost evaluate statistic și comparate cu cele obținute din alte metode publicate.

complet

ABSTRACT GRAFIC

1. Introducere

Acidul Aristolochic-I (AA-I) este cunoscut chimic ca acid 8-metoxi-6-nitrofenantro [3,4-d] -1,3-dioxol-5-carboxilic (Figura 1). Este unul dintre acizii 1-fenantren carboxilici substituiți, o familie de compuși cancerigeni, mutageni și nefrotoxici care se găsesc frecvent în plantele medicinale, cum ar fi Aristolochia și Asarum. Mulți oameni cred că utilizarea ierburilor naturale pentru tratament este sigură și eficientă. Din punct de vedere istoric, Aristolochia a fost utilizat pe scară largă în diferite culturi ca remediu popular pe bază de plante pentru diferite tratamente, cum ar fi nașterea, durerile articulare și pierderea în greutate ( 1 ). În ciuda credinței pe scară largă că remediile pe bază de plante nu sunt medicamente datorită caracterului lor natural, cercetări ample au confirmat că remediile pe bază de plante și produsele pentru slăbit, care sunt utilizate în mod obișnuit în mai multe țări din Asia, precum și din S.U.A. conțin AA-I. Acest AA-I nu numai că provoacă leziuni la rinichi ( 2 ), dar și un motiv mediu pentru cancerul tractului urinar superior ( 3 ). Aceste descoperiri au încurajat SUA Food and Drug Administration (FDA) pentru a avertiza împotriva utilizării oricărui medicament tradițional care conține AA-I 4 ).

Publicat online:

Figura 1. Structura chimică a sării de sodiu aristolochic-I.

Figura 1. Structura chimică a sării de sodiu aristolochic-I.

2. Experimental

2.1. Substanțe chimice și reactivi

Sigma-Aldrich (Hamburg, Germania) a furnizat un grad pur de AA-I (97% puritate), soluția standard conținând AA-II, luminol, peroxid de hidrogen, metanol, etanol, mentol 99%, menton 90%, pulegonă 97%, piperitonă 98%, acetat de carvacrol 99% și acid cloroauric HAuCl4. Produs comercial de slăbire (Guang Fang Ji) care conține AA-IAristolochia fangchi) era disponibil de la farmacii locale. Hidroxid de sodiu, periodat de potasiu, permanganat de potasiu, fericianură de potasiu și citrat de sodiu deshidratat au fost cumpărate de la WINLAB (East Midlands, Marea Britanie). Cinci probe diferite de medicamente pe bază de plante numite Aristolochia fangchi (rădăcină), Aristolochia contorta (planta), Aristolochia debilis (Ierburi și fructe Radix), Aristolochia mandshuriensis (tulpina) și Asarum (rizom) au fost importate din California, S.U.A. Frunze de plante naturale (M. longifolia și M. pulegium) au fost cumpărate de pe piața locală a orașului Al-Madinah, Arabia Saudită. O fază mobilă compusă din 0,1% acid formic și metanol (50:50, v/v) a fost utilizată pentru separarea AA-I și AA-II de probele medicinale.

2.2. Aparat

Instrumentul aplicat pentru detectarea CL a fost sistemul FIAlab-3500. Acest sistem este compus dintr-un colector cu opt porturi Vici Valco Cheminer RT ® 125-0718, o pompă seringă cu model de volum de 2,5 ml-CAVRO XL 3000 (Cavro Scientific Instrument Int., SUA) conectată la un autosampler ALM-3200 și un Pentru colectarea datelor, a fost utilizată o tensiune a tubului fotomultiplicator de 320 V. Software-ul Windows FIAlab (versiunea 5.9.321). Separarea AA-I și AA-II de probele naturale a fost efectuată folosind placa de cromatografie în strat subțire (TLC) cu silicagel F254. Caracterizarea AuNP-urilor sintetizate a fost efectuată cu ajutorul unui microscop electronic de transmisie (TEM) model JEOL 1200EX, operat la o tensiune de accelerare de 100 kV și cu o mărire de 20.000 ×. Spectrofotometrul ultra-vizibil ultrospec-2100 pro, a fost folosit pentru a detecta spectrul de absorbție ultravioletă (UV) al nanoparticulelor preparate.

2.3. pregătirea unei mostre

2.3.1. Pregătirea soluției standard AA-I

O soluție standard stoc AA-I (100 μg ml -1) a fost preparată prin dizolvarea a 10 mg sare de sodiu AA-I pură în 100 ml apă distilată. Soluțiile seriale au fost preparate zilnic prin diluare adecvată. Soluția de lucru utilizată a fost în intervalul de 10-20.000 ng mL -1 .

2.3.2. Plante medicinale probe reale

Pentru prepararea probelor reale, probele uscate ale plantelor medicinale au fost măcinate fin. Aproximativ 0,5 g din fiecare probă de plantă au fost marinate în 10 ml de metanol timp de 16 ore. Probele obținute au fost ultrasunetate timp de 25 min, apoi centrifugate la 3000 rpm timp de 5 min. Extractele au fost combinate după extracție de 3 ori, s-au diluat, filtrat folosind filtru cu membrană Millipore de 0,45 μm și s-a folosit 20 ml metanol pentru a completa volumul. Interferența posibilă a AA-II în probele reale a fost eliminată prin separarea sa pe silicagel TLC F254 folosind acid formic: metanol (50:50, v/v) și a fost detectată densitometric la 254 nm. Soluția pură finală a fost supusă analizei SIA-CL în prezența AuNP pentru a identifica conținutul AA-I.

2.3.3. Pregătirea probelor de produse comerciale de slăbire

Pentru prepararea eșantionului comercial de slăbire, produsul pe bază de plante (Guang Fang Ji) a fost măcinat fin și aproximativ 10 g de pulbere s-au dizolvat în 50 ml de metanol. Soluția a fost ultrasunetată timp de 25 min și centrifugată la 3000 rpm timp de 5 min. Soluția rezultată a fost filtrată folosind un filtru cu membrană Millipore de 0,45 μm și s-au folosit 50 ml de metanol pentru a completa volumul. Soluțiile de lucru în intervalul de concentrație de 10-20.000 ng mL −1 au fost preparate prin diluții în serie folosind același solvent.

2.4. Sinteza nanoparticulelor de aur

2.4.1. Sinteza AuNPs folosind extract natural de plante

Extractul de plante din frunze naturale (M. longifolia și M. pulegium) s-a obținut prin spălarea frunzelor cu apă distilată și uscarea lor timp de 2 zile la temperatura camerei. Frunzele uscate au fost măcinate până la pulbere fină și cernute cu grijă pentru a îndepărta particulele grosiere. Aproximativ 1 g de pulbere de frunze fine a fost marinată în 100 ml etanol timp de 1 zi și centrifugată la 2500 rpm timp de 30 min. Extractul a fost filtrat și filtratul a fost utilizat pentru sinteza AuNPs. Alicote ale extractului de frunze de apă etanolică au fost amestecate cu 1,0 × 10-3 mol L -1 HAuCl4 în raporturi echivalente cu 2-10% (v/v). Soluția preparată a fost agitată magnetic la o temperatură ambiantă de 25 ± 1 ° C, iar culoarea soluției a fost schimbată în roz indicând formarea AuNP-urilor. AuNP-urile au fost caracterizate folosind detectarea spectrofotometrică TEM și UV, așa cum se arată în Figura 2 (a, b).