I. TESTA SALIVA

PRINCIPIU

Aproximativ 80% din populație are gena secretor (Se). Acești oameni secretă substanțe grupe sanguine solubile în apă în saliva și alte fluide ale corpului. Grupul A secretă o substanță și o cantitate mică de H, grupul B secretă substanța B (și H), grupul O secretă numai substanța H și grupul AB secretă A, B și o cantitate mică de H.

determinarea

Pentru a determina dacă o persoană este secretară, principiul Inhibarea aglutinării este utilizat, în cazul în care prezența aglutinării înseamnă un test negativ și nici o aglutinare nu este interpretată ca un rezultat pozitiv.

Partea I - Neutralizarea anticorpilor:

Saliva se amestecă cu antiserul comercial (Anti-A, Anti-B sau Anti-H) și se lasă să se incubeze scurt. Dacă pacientul este secretor, antigenele solubile din grupa sanguină din salivă vor reacționa și neutraliza anticorpii din antiserul comercial. Cu toate acestea, este necesar să se dilueze antiserul comercial astfel încât titrul anticorpului său să se potrivească mai bine cu nivelul de antigen din salivă.

Partea II - Inhibiție de aglutinare:

Atunci când RBC-urile comerciale ale grupului sanguin adecvat sunt apoi adăugate la amestecul de testare, nu ar trebui să existe niciun anticorp liber care să le aglutineze dacă pacientul este secretor, deoarece anticorpii au reacționat deja cu antigenele grupului sanguin din salivă. Reacția va fi negativă pentru aglutinare, dar este interpretată ca pozitivă pentru statutul de secretor.

Dacă pacientul este nesecretor, nu vor exista antigene ale grupelor sanguine în salivă; anticorpii din antiser nu vor fi neutralizați și vor fi liberi să reacționeze atunci când se adaugă celulele testate. Prin urmare, aglutinarea este un test negativ pentru statutul de secretor.

REACTIVI, ECHIPAMENTE ȘI PRODUSE

  • Curățați tubul pentru a colecta saliva
  • Eprubetă Pyrex de 16 x 100 mm
  • aruncați pipetele
  • baie de apă clocotită
  • Tuburi de 12 x 75 mm
  • stilou
  • Reactiv Anti-A, Anti-B sau Anti-H, diluat pentru a da o reacție 2+
  • Celule A1 reactive, celule B sau celule O (celule de screening)
  • serofugă
  • vizualizator de aglutinare luminat

PROCEDURĂ

  1. Se colectează 2 până la 3 ml de salivă într-un tub curat de 16 x 100 mm. Folosiți ceară de parafină sau curățați benzi de cauciuc pentru a stimula secrețiile - nu utilizați gumă.
  2. Se pune într-o baie de apă clocotită timp de 10 minute. Aceasta inactivează enzimele care altfel ar putea distruge substanțele grupului sanguin.
  3. Se lasă să se răcească scurt, apoi se transferă într-un tub de 12 x 75 mm.
  4. Centrifugați cel puțin 5 minute.
  5. Etichetați trei eprubete de 12 x 75 mm:
  • UN TEST
  • B TEST
  • H TEST
  1. Etichetați încă trei tuburi:
  • UN CONTROL
  • B CONTROL
  • H CONTROL
    (Acestea sunt controale de diluare pentru a se asigura că anti-serul nu a fost diluat dincolo de capacitatea sa de aglutinare).
  1. Adăugați o picătură din antiserul diluat corespunzător în fiecare tub:
  • o picătură diluează anti-A până la testul A și controlul A.
  • o picătură diluează anti-B la testul B și controlul B.
  • o picătură anti-H la testul H și controlul H.
  1. La fiecare tub TEST, adăugați o picătură de salivă limpede.
  2. În fiecare tub CONTROL, adăugați o picătură de soluție salină.
  3. Se amestecă și se incubează la temperatura camerei 10 minute.
  4. Adăugați o picătură de celule roșii reactive corespunzătoare în fiecare tub:

  • Celule A1 pentru testul și controlul A.
  • Celule B pentru testul și controlul B.
  • Screening Cell I sau II pentru testul și controlul H.
  1. Se amestecă și se incubează la temperatura camerei 10 minute.
  2. Centrifugați perioada de timp pentru reacțiile saline în serofug.
  3. Folosind vizualizatorul de aglutinare luminat, citiți, notați și înregistrați reacțiile.
  4. Tubul CONTROL ar trebui să aibă aglutinare pentru ca testul să fie valid.

INTERPRETARE

  1. Aglutinarea în toate tuburile TEST ale pacientului indică un rezultat negativ pentru statutul de secretor.
  2. Dacă oricare dintre tuburile TEST pentru pacienți nu este aglutinată, aceasta indică un test pozitiv pentru starea de secretor, iar tubul care arată non-aglutinarea ar trebui să indice tipul ABO.

II. TIPURI LEWIS

PRINCIPIU

Antigenele Lewis nu sunt intrinseci celulei roșii. Persoanele care au gena Lewis (Le) produc antigeni Lewis care sunt transportați de substanțe în plasmă și sunt adsorbiți pe globulele roșii din sânge.

Lewis a este inițial format și, dacă pacientul este nesecretor (nu are gena Se), Lewis o substanță este adsorbită pe celula roșie, iar pacientul tip ca Lewis a .

Dacă pacientul este secretor, totuși, gena Se activează gena H, ceea ce determină adăugarea unui zahăr suplimentar la Lewis a, transformându-l în Lewis b. Atât Lewis a, cât și Lewis b sunt prezenți în plasma secretorilor, dar Lewis b se adsorbe preferențial pe celula roșie, iar pacientul tip ca Lewis b .

REACTIVI, ECHIPAMENTE ȘI PRODUSE

  • Raft pentru eprubete cu tuburi de 12 x 75 mm
  • marcaj pen dispo pipete
  • sticla de spălare cu soluție salină fiziologică Reactiv Anti-Lewisa
  • serofug Reactiv Anti-Lewisb
  • vizualizator de aglutinare luminat

PROBĂ

Celulele roșii colectate în EDTA sau heparină pot fi utilizate dacă sunt testate în termen de 2 zile de la colectare. Sângele integral coagulat poate fi testat până la 14 zile de la data recoltării. Celulele donatoare dintr-un segment pot fi testate până la 35 de zile de la momentul colectării.

PROCEDURĂ

  1. Etichetați un tub de 12 x 75 mm cu numele pacientului și adăugați 2-3 picături de eritrocite.
  2. Spălați celulele de 4 ori cu ser fiziologic.
  3. După a patra spălare, reconstituiți la 3%.
  4. Etichetați șase tuburi de 12 x 75 mm: numele pacientului, Lea
  • numele pacientului, Le b
  • Controlul POS
  • Controlul NEG
  • Le b POS Control
  • Le b NEG Control
  1. Adăugați o picătură Anti-Lewis a la toate tuburile Le a și o picătură Anti-Lewis b la toate tuburile Le b.
  2. Adăugați o picătură de celule 4x spălate ale pacientului în fiecare tub de pacient.
  3. Controale:
  • Adăugați o picătură dintr-o celulă cunoscută a fi pozitivă pentru Lewis a la controlul Le a POS.
  • Adăugați o picătură dintr-o celulă cunoscută a fi negativă pentru Lewis a la controlul Le a NEG.
  • Adăugați o picătură dintr-o celulă cunoscută a fi pozitivă pentru Lewis b la controlul POS Le b.
  • Adăugați o picătură dintr-o celulă cunoscută a fi negativă pentru Lewis b la controlul Le b NEG.
  1. 8. Agitați ușor toate tuburile pentru a amesteca și incubați la temperatura camerei 5-10 minute.
  2. 9. Centrifugați durata necesară serofugului pentru reacții saline.
  3. 10. Resuspendați ușor și examinați MACROSCOPIC pentru aglutinare, utilizând vizualizatorul de aglutinare iluminat.
  4. 11. Citiți, notați și înregistrați rezultatele.

INTERPRETARE

Dacă o persoană are gena Lewis, va scrie fie Lewis pozitiv, cât și Lewis b negativ; sau Lewis un negativ și Lewis b pozitiv. Pacientul nu va fi pozitiv pentru ambele.

Persoanele cu gena Lewis și gena secretor tip ca Lewis un negativ, Lewis b pozitiv.

Persoanele cu gena Lewis, dar nu genul secretor, ca Lewis pozitiv, Lewis b negativ.

Dacă un pacient nu are gena Lewis, el sau ea va tasta ca Lewis negativ și Lewis b negativ, indiferent de statutul de secretor.

REFERINȚE

Bryant, N. O introducere în imunohematologie, Ed. 3 (1994), paginile 115-116, 136

Indicațiile producătorului Ortho Diagnostics, serul de tip Anti-Lewis a și Anti-Lewis b, revizuit 2/86.

Manual tehnic AABB, ediția a XI-a, 1993, paginile 626-626