• Găsiți acest autor pe Google Scholar
  • Găsiți acest autor pe PubMed
  • Căutați acest autor pe acest site
  • Pentru corespondență: kareemlgraham @ gmail.comebutcher @ stanford.edu

Editat de Lawrence Steinman, Școala de Medicină a Universității Stanford, Stanford, CA și aprobat pe 26 decembrie 2018 (primit pentru examinare 16 octombrie 2018)

celule

Figurile articolelor și SI

Cifre

Analiza transcriptomică a celulelor CD4 + T din memoria infiltrată în SNC în timpul EAE. Transcrierile în memCD4T-uri sortate de FACS derivate de la șoareci femele cu EAE au fost analizate folosind cipuri genetice Affymetrix. Software-ul GeneSpring a fost utilizat pentru analiza și vizualizarea datelor (15.288 de sonde cu criteriile de selecție descrise în Metode). Transcrierile foarte exprimate diferențial în cadrul memCD4T-urilor CNS (comparativ cu memCD4T-urile EAE dLN) sunt afișate sub formă de complot vulcanic. Fiecare simbol reprezintă o genă individuală; simbolurile roșii indică transcrieri care au prezentat cel puțin o diferență de patru ori în valoarea expresiei între CNS și EAE dLN memCD4Ts. Lista completă a genelor exprimate diferențial poate fi găsită în anexa SI, tabelul S1.

Celulele T CD4 + fenotip cu memorie infiltrată în SNC reglează în sus Dgat1. Gene exprimate diferențial identificate în Fig. 1 au fost selectați pentru analize ulterioare. (A) Afișarea hărții de căldură a genelor cu o diferență de cel puțin de patru ori în expresie în CNCD memCD4T versus EAE dLN memCD4T. Fiecare rând reprezintă o genă individuală și fiecare coloană reprezintă un experiment/țesut individual. Roșul indică gene reglate în sus, în timp ce genele reglate în jos sunt în albastru. Asteriscul roșu evidențiază poziția Dgat1. (B) Graficele împrăștiate ilustrează valori de expresie brute scăzute până la nedetectabile (determinate de microarray) pentru Dgat1, Dgat2 și Lrat în EAE dLN, comparativ cu Dgat1 în CNCD memCD4T. Fiecare simbol reprezintă un experiment individual, iar barele descriu valoarea medie a expresiei brute ± SEM. * Celule P + T. Fiecare punct reprezintă o replică biologică, iar barele reprezintă media ± SEM. * P

Inhibarea farmacologică DGAT1 și deficiența genetică modulează EAE. (A) Șoarecii C57BL/6 de sex feminin au fost induși să dezvolte EAE prin imunizare activă cu MOG35-55/CFA și apoi urmăriți zilnic pentru semne clinice. Începând cu ziua 12 postimunizare (săgeată), șoarecilor li s-a administrat vehicul sau 10 mg/kg inhibitor DGAT1 prin injecție subcutanată o dată pe zi (n = 10 șoareci per grup). Datele clinice sunt prezentate ca scor mediu ± SEM. * Metode P (total = meningi + parenchim). Barele reprezintă media ± SEM. * P

DGAT1 în limfocitele encefalitogene promovează inducerea EAE după transferul adoptiv. (A) Șoarecii C57BL/6 WT masculi naivi au fost injectați cu limfocite WT (WT → WT) reactive MOG35-55 reactive generate in vitro sau DGAT1 KO (KO → WT). Șoarecii au fost urmăriți pentru semne clinice. Datele sunt reunite din două experimente independente (n = 3-5 șoareci primitori per grup pentru fiecare experiment) și sunt prezentate ca scor clinic mediu ± SEM. * Metode P. * P

Efectul deficienței DGAT1 asupra numărului de IFN-γ– sau IL-17 - producând celule T CD4 + în dLN și CNS. Șoarecii masculi WT și DGAT1 KO (n = 5 per grup) au fost induși să dezvolte EAE. În ziua 17 după imunizare, șoarecii au fost uciși. Celulele dLN (superioare) sau celulele mononucleare ale SNC (inferioare) au fost restimulate timp de 3 zile cu MOG35-55, iar PMA/ionomicina și inhibitorul transportului proteinelor au fost adăugate în ultimele 5 ore din perioada de cultură. Celulele au fost apoi colorate cu mAbs la markeri de suprafață și citokine intracelulare și analizate prin citometrie în flux. Limfocitele viabile au fost închise ca NK1.1 - CD4 + și evaluate pentru expresia IFN-γ și IL-17. (A) Graficele FACS reprezentative indică procentul de celule T CD4 + care au colorat pozitiv pentru IFN-γ sau IL-17 în dLN-urile WT și DGAT1 KO și CNS. (B) Graficele dispersate indică procentul de celule T CD4 + IFN-γ + (stânga) și IL-17 + (dreapta) în țesuturile WT și DGAT1 KO. Fiecare simbol reprezintă un mouse individual; bara ilustrează media ± SEM. Niciuna dintre diferențe nu a atins semnificația statistică.

DGAT1 influențează frecvența Treg în țesuturile limfoide și SNC. Șoarecii masculi C57BL/6 și DGAT1 KO (n = 8 per grup) au fost induși să dezvolte EAE prin imunizare cu MOG35-55/CFA. În ziua 17 postimunizare, șoarecii au fost uciși și celulele din țesuturile dLN sau SNC au fost analizate prin citometrie în flux. Limfocitele NK1.1 - CD4 + au fost apoi analizate pentru exprimarea CD25 și Foxp3. (A) Graficele FACS reprezentative indică frecvența T25 CD25 + Foxp3 + în țesuturile dLN și CNS ale șoarecilor WT și DGAT1 KO. Numerele reprezintă procentul de Tregs din poartă. (B) Graficele dispersate indică procentul (stânga) sau numărul (dreapta) de Treguri CD4 + în țesuturile WT și DGAT1 KO. Fiecare simbol reprezintă un mouse individual; bara ilustrează media ± SEM. * Celule P + T. Treisprezece zile mai târziu, CNM CNS au fost recoltate și combinate de la șoareci primiți (n = 4 per grup). Limfocitele viabile CD4 + au fost închise pe alotul CD45.1 (gazdă) și apoi evaluate pentru exprimarea CD25 și Foxp3 prin citometrie în flux. Au fost efectuate două experimente independente cu rezultate similare.