Univ Clermont1, Pathogénie Bactérienne Intestinale, JE2526, USC - INRA 2018, Clermont - Ferrand F - 63001, Franța.

asociat

Univ Clermont1, Pathogénie Bactérienne Intestinale, JE2526, USC - INRA 2018, Clermont - Ferrand F - 63001, Franța.

Institut Universitaire de Technologie en Génie Biologique, Aubière F - 63172, Franța.

Unitatea gastrointestinală și Centrul pentru Biologie Computațională și Integrativă, Spitalul General Massachusetts, Harvard Medical School, Boston 02141 SUA.

Unitate gastrointestinală și Centrul pentru Biologie Computațională și Integrativă, Spitalul General Massachusetts, Harvard Medical School, Boston 02141 SUA.

Univ Clermont1, Pathogénie Bactérienne Intestinale, JE2526, USC - INRA 2018, Clermont - Ferrand F - 63001, Franța.

Institut Universitaire de Technologie en Génie Biologique, Aubière F - 63172, Franța.

Univ Clermont1, Pathogénie Bactérienne Intestinale, JE2526, USC - INRA 2018, Clermont - Ferrand F - 63001, Franța.

Univ Clermont1, Pathogénie Bactérienne Intestinale, JE2526, USC - INRA 2018, Clermont - Ferrand F - 63001, Franța.

Institut Universitaire de Technologie en Génie Biologique, Aubière F - 63172, Franța.

Unitate gastrointestinală și Centrul pentru Biologie Computațională și Integrativă, Spitalul General Massachusetts, Harvard Medical School, Boston 02141 SUA.

Unitate gastrointestinală și Centrul pentru Biologie Computațională și Integrativă, Spitalul General Massachusetts, Harvard Medical School, Boston 02141 SUA.

Univ Clermont1, Pathogénie Bactérienne Intestinale, JE2526, USC - INRA 2018, Clermont - Ferrand F - 63001, Franța.

Institut Universitaire de Technologie en Génie Biologique, Aubière F - 63172, Franța.

Conflict de interese: Autorii au declarat că nu există niciun conflict de interese.

Contribuția autorilor: Experimente concepute și proiectate: PL, ALG, RX, ADM. A efectuat experimentele: PL, AH. Analiza datelor: PL, ALG, AH, RX, ADM. Am scris lucrarea: PL, ALG, RX, ADM.

Această lucrare este dedicată amintirii Annei - Lise Glasser care s - a stins din păcate pe 7 septembrie 2009.

rezumat

Numărul de ori citat conform CrossRef: 200

  • Tamia A. Harris-Tryon, Shai Bel, Interacțiune gen/mediu și boala autoimună, dincolo de genele noastre, 10.1007/978-3-030-35213-4, (139-156), (2020).

FIG. S1. Comportamentul intracelular al E coli tulpini în MEF în greutate versus ATG5 -/- MEF. Infecțiile au fost efectuate cu cele nepatogene E coli K - 12 tulpina MG1655, de mediu E coli tulpina SMS 3.5, comensalul E coli tulpina HS, enteropatogenă E coli (EPEC) tulpina E2348/69 (D), aderentă difuză E coli (DAEC) tulpina C1845, enterotoxigenul E coli (ETEC) tulpina H10407, enteroinvaziva E coli (EIEC) tulpina E12860/0 și aderentul asociat CD - invaziv E coli (AIEC) tulpina LF82. Numărul de bacterii intracelulare a fost determinat în diferite momente după infecție variind de la 1 la 6 ore. Rezultatele sunt exprimate ca procent de bacterii intracelulare după diferite perioade de tratament cu gentamicină față de cea obținută la 1 oră după expunerea la gentamicină, luată ca 100%.

FIG. S2. Cinetica achiziției markerului lizozomal LAMP-1 și acidificarea vacuolului în MEF. Experimentele au fost efectuate cu MEF cu greutate infectată AIEC LF82 (linii negre) și MEF atg5 -/- (linii gri). MEF-urile au fost infectate cu GFP - exprimând tulpina AIEC LF82 timp de 1 oră la moi de 10 și apoi incubate timp de 1, 2, 4 sau 6 ore în mediu de cultură celulară conținând gentamicină (80 μg ml -1). A. Marcarea LAMP-1 a fost efectuată folosind anticorpi de șobolan la LAMP-1 murin. B. AIEC LF82 care conține acidificare vacuolă a fost evaluată utilizând Lysotracker Red DND-99 așa cum este descris în procedura experimentala. Pentru fiecare punct, cel puțin 100 de vacuole care conțin AIEC LF82 au fost numărate și punctate pentru prezența sau absența markerilor. Rezultatele prezentate sunt procentele medii de colocalizare a markerului pe AIEC LF82 - care conține fagozom ± eroare standard a mediei (SEM). Au fost efectuate cel puțin trei experimente independente.

FIG. S3. Micrografii confocale reprezentative ale MEF-urilor infectate cu AIEC LF82 - GFP sau ATG5 -/- MEF la 6 ore după infecție marcate cu AIEC LF82 citosolică liberă cu anticorpi O83 (roșu) după permeabilizarea membranei plasmatice cu digitonină. Vacuolele au fost colorate cu anticorpi LAMP-1 (violet).

FIG. S4. Cinetica achiziționării markerului lizozomal LAMP-1 (linii negre) și acidificarea vacuolului (linii gri) în celulele Hela infectate cu AIEC LF82. Celulele au fost infectate cu GFP - exprimând tulpina AIEC LF82 timp de 3 h la moi de 10 și apoi incubate timp de 1, 2, 4 sau 6 h în mediu de cultură celulară conținând gentamicină (80 μg ml -1). Marcarea LAMP-1 a fost efectuată folosind anticorpi de șoarece la LAMP-1 uman. AIEC LF82 care conține acidificare vacuolă a fost evaluată utilizând Lysotracker Red DND - 99 așa cum este descris în procedura experimentala. Pentru fiecare punct, au fost numărate cel puțin 100 AIEC LF82 care conțin vacuole și au fost punctate pentru prezența sau absența markerilor. Rezultatele prezentate sunt procentele medii de colocalizare a markerului pe AIEC LF82 - care conține fagozom ± eroare standard a mediei (SEM). Au fost efectuate cel puțin trei experimente independente.

FIG. S5. Analiza confocală a procentului de colocalizare a AIEC LF82 - conținând vacuole cu marker autofagic LC3 fie în celule netratate (bare negre), fie în celule tratate timp de 3 ore cu rapamicină (40 μg ml -1, bare albe) pentru a induce autofagia. Celulele Hela au fost infectate cu GFP - exprimând tulpina AIEC LF82 timp de 3 ore la moi de 10 și apoi incubate în mediu conținând gentamicină. Celulele au fost tratate pentru încă 3 ore cu rapamicină la 1 sau 20 de ore după infecție. Cel puțin 100 de vacuoli care conțin AIEC LF82 au fost numărate și punctate pentru prezența sau absența imunocolorării endogene a LC3. Rezultatele prezentate sunt procentul mediu de colocalizare LC3 pe fagozomi care conțin AIEC LF82 ± eroare standard a mediei. Au fost efectuate cel puțin trei experimente independente.

Vă rugăm să rețineți: Wiley - Blackwell nu este responsabil pentru conținutul sau funcționalitatea materialelor suport furnizate de autori. Orice întrebare (alta decât materialul lipsă) trebuie să fie adresată autorului corespunzător pentru articol.

Descrierea numelui de fișier
CMI_1381_sm_figS1.tif3 MB Element de informații de susținere
CMI_1381_sm_figS2.tif6.2 MB Element de informații de susținere
CMI_1381_sm_figS3.tif4 MB Element de informații de susținere
CMI_1381_sm_figS4.tif4,4 MB Element de informații de susținere
CMI_1381_sm_figS5.tif4,4 MB Element de informații de susținere

Vă rugăm să rețineți: editorul nu este responsabil pentru conținutul sau funcționalitatea oricăror informații de susținere furnizate de autori. Orice întrebări (altele decât conținutul lipsă) ar trebui să fie adresate autorului corespunzător pentru articol.