Departamentul de Biotehnologie, Universitatea din Burdwan, Burdwan-713104, Bengalul de Vest, India

* Autor corespondent: Atanu Koner
Departamentul de Biotehnologie,
Universitatea din Burdwan,
Burdwan-713104, Bengalul de Vest, India.
E-mail: [e-mail protejat]

Primit:2013-11-14 Admis: 2013-11-30 Publicat: 12/12/2013

Vizitați pentru mai multe articole similare la Cercetări și recenzii: Research Journal of Biology

Abstract

Cuvinte cheie

Creșterea bacteriană și fungică, dogma centrală, corpul eucariot, potența homeopatică.

Introducere

Argentum nitricum, cunoscut și sub numele de azotat de argint (AgNO3), este un compus anorganic care este utilizat ca medicament antiseptic datorită proprietăților sale antiseptice. Denumirea comună a Argentum nitricum este Piatra Iadului sau Piatra Diavolului. Se prepară prin dizolvarea azotatului de argint în alcool pentru a forma tinctura mamă. Utilizarea medicinală a nitratului de argint datează din Evul Mediu, când a fost folosit ca antiseptic și caustic pentru tratarea rănilor. Astăzi azotatul de argint este încă utilizat în tratamentul verucilor și, deși nu este comun. Intoxicația ușoară apare încă din tratarea negilor, oferind o idee despre toxicitatea acestui compus. Simptomele otrăvirii ușoare sunt anxietatea și agitația, inițial conduse de Hahnemann și din nou de Muller în 1845.

Cea mai importantă acțiune este asupra sângelui, producând un efect antiplastic, făcându-l mai fluid și mai întunecat; corpusculii roșii își pierd materia colorantă; sângele stagnează în vase și nutriția este interferată. Centrii nervoși sunt, de asemenea, implicați, dând naștere la diferite simptome de tulburări cerebrale și spinale. Azotatul de argint este aplicat pentru îndepărtarea diferitelor tipuri de tulburări, cum ar fi nervozitatea, temerile, tulburările digestive, astmul și anxietatea. Potența sa se află între 6c și 200c. Utilizarea terapeutică specială a acestui remediu homeopatic se potrivește perfect pentru evul mediu ori de câte ori este utilizat ca antiseptic împreună cu coroziv pentru a face față leziunilor.

Materiale și metode

Izolarea ADN-ului genomic din surse bacteriene și fungice

Gram pozitiv-Bacillus sp. (MTCC-2497) și Gram negativ - E. coli (BL-12) au fost utilizate ca tulpini bacteriene și au fost crescute peste noapte în bulion LB, au fost transferate într-un tub de microcentrifugă și centrifugate. Peleta a fost resuspendată în tampon TE (Tris-EDTA, pH 8,0). 10% SDS a fost adăugat și incubat. S-a adăugat amestec fenol-cloroform (1: 1) și s-a amestecat. Amestecul a fost centrifugat la 10.000 rpm. Faza apoasă superioară a fost transferată într-un tub nou și re-extrasă cu volum egal de fenol-cloroform. Amestecul a fost centrifugat din nou la 10.000 rpm. Apa superioară a fost luată și amestecată cu acetat de sodiu 3M (pH 5,2) și s-a adăugat izopropanol și s-a amestecat ușor pentru a precipita ADN-ul. Din nou s-a efectuat centrifugarea la 10.000 rpm pentru a precipita ADN-ul. ADN-ul a fost spălat cu etanol 70% timp de 30 de secunde și centrifugat scurt. ADN-ul a fost resuspendat în tampon TE.

S-a luat bulionul de ciuperci (YEPD) și s-a amestecat tampon de suspensie 0,5 M (Tris Cloride, pH-7,5) împreună cu particule de nisip și s-a păstrat în gheață timp de 15 secunde. 1% SDS a fost adăugat și incubat. Tuburile au fost centrifugate și s-a adăugat amestec de fenolcloroform (1: 1) urmat de centrifugare. S-a adăugat acetat de sodiu 3M (pH 5,5) la supernatant urmat de adăugarea imediată de alcool absolut. Apoi a fost plasat în congelator la -20 ° C timp de 30 de minute. După răcire, s-a făcut centrifugarea și peleta a fost spălată cu etanol 70%. În cele din urmă a fost suspendat în tampon TE.

Electroforeza pe gel de agaroză a ADN-ului

Gelul de agaroză (0,8%) a fost preparat prin dizolvare în tampon TAE 1X. Pieptenele au fost introduse înainte de turnarea gelului. Gelul a fost lăsat timp de 30-40 minute pentru solidificare și pieptenul a fost îndepărtat din gel. Rezervorul de electroforeză care conține gelul a fost umplut cu 1X tampon de electroforeză TAE. 1 volum de tampon de probă a fost amestecat cu 5 volume de probă de ADN. Probele au fost aplicate pe godeurile formate în gel. Bromura de etidiu la o concentrație de 0,5 μg/ml a fost încorporată în gel. Electrozii au fost conectați și curentul de 70 volți a fost aplicat timp de 1 oră. După electroforeză, gelul a fost vizualizat sub lumină UV.

Electroforeză pe gel de dodecil sulfat de sodiu (SDS):

Electroforeza cu gel SDS a fost făcută în conformitate cu metodologia urmată de Konar și colab. (2013). Pentru aceasta, au fost asamblate plăcile SDS. Gelul de separare a acrilamidei a fost preparat într-un balon conic și turnat între plăci. S-a preparat gel de stivuire cu acrilamidă. Componentele au fost amestecate și turnate peste gelul de separare. Puțurile au fost preparate folosind piepteni. Probele au fost preparate cu un volum egal de tampon de probă. Probele au fost apoi încălzite în baie de apă clocotită și încărcate. Tensiunea a fost aplicată în funcție de dimensiunea gelului. Gelul a fost lăsat să ruleze până când proba a ajuns la fundul gelului de rezolvare. Sursa de alimentare a fost apoi oprită; gelul a fost îndepărtat din aparat. Gelul a fost lăsat să se coloreze peste noapte. A doua zi, gelul a fost scufundat într-o soluție de îndepărtare și observat.

Lucrări in vivo:

Patru șobolani albini au fost luați și tratați cu alcool pentru setul de control, argentum nitricum Mother, argentum nitricum potency-30, argentum nitricum potency-200. După 60 de zile, au fost sacrificați și au fost studiați diferiți parametri fiziologici, cum ar fi prezența sau absența chistului, modificarea dimensiunii organelor și prezența oricărei alte anomalii în ficat, inimă, splină și rinichi (tabelul 1). Au fost studiați parametrii fenotipici și hematologici ai acestora. Sângele a fost preluat din inimă pe o lamă și a fost colorat cu pata Leishmann, spălat cu apă și observat la microscop.

nitricum

Tabelul 1: În stare in vivo, au fost luați patru șobolani albini; au fost studiați diferiți parametri fiziologici și efecte în diferite potențe homeopate

Rezultate și discuții

Au fost observate trei rezultate in vitro, și anume, creșterea bacteriilor, medicina bacteriilor și homeopatiei, ciupercilor și medicina homeopatiei. Când bacteriile cresc normal, a existat o creștere a valorii densității optice în raport cu timpul. Când bacteriile cresc cu medicamente homeopatice, densitatea optică menționată în masa 2 scade pe măsură ce potențialele homeopate inhibă creșterea bacteriilor, deci scăderea valorii densității optice a fost observată la bacteriile gram negative, în timp ce bacteriile gram pozitive au prezentat o creștere treptată. Dogma centrală a fost studiată și prezența (+) sau absența (-) unei benzi de ADN (electroforeză pe gel de agaroză) și proteine ​​(SDS-PAGE) este menționată în tabelul 3.

Masa 2: Densitate optică la 400 nm de culturi de bacterii și ciuperci

Tabelul 3: Rezultatul electroforezei pe gel de agaroză și SDS-PAGE

Din figura 1, se poate concluziona că medicina homeopatică nu a avut niciun efect semnificativ asupra creșterii ciupercilor, deoarece creșterea lor a rămas statică. Graficul s-a deplasat inițial în sus din cauza creșterii normale a bacteriilor/ciupercilor, apoi scade (bactericid/fungicid) sau se află într-o fază staționară din cauza potenței homeopatice.

Figura 1: Efectul Argentum nitricum asupra ciupercilor

În mod surprinzător, medicina homeopatică nu a inhibat creșterea bacteriilor gram pozitive, deoarece acestea arată activitatea lor de creștere a noramlului cu creșterea densității optice (figura 2). Pe de altă parte, s-a observat inhibarea creșterii bacteriilor gram negative de către medicina homeopatică indicată de scăderea densității optice (figura 3).

Figura 2: Efectul Argentum nitricum asupra bacteriilor gram pozitive

Figura 3: Efectul Argentum nitricum asupra bacteriilor gram negative

Vizualizarea microscopică a filmului sanguin a arătat că celulele, cele care au fost tratate cu argentum nitricum cu potență-200, au o contracție și restul nu au prezentat nicio modificare semnificativă (figura 4).

Figura 4: Vedere diapozitivă microscopică; (a) lamelă de film de sânge pentru control, (b) lamelă de film de sânge de AgNO3-200

Tratamentul șoarecilor cu argentum nitricum a dus la formarea chistului în ficat (figura 5). Șoarecii tratați cu o diluție mai mare de medicament (potență - 200) au prezentat un număr mai mare de chist, deoarece a fost absorbit mai ușor de celulele corpului său în comparație cu medicamentul cu diluție mai mică (potență - 30).

Figura 5: Disecția șoarecilor; (a) chist unic în ficatul șoarecilor tratați cu AgNO3 cu potență 30 (b) chist dublu în ficatul șoarecilor tratați cu AgNO3 cu potență - 200.

Figura 6: Vedere histologică; (a) organele de șoareci au fost utilizate ca martor, (b) organele de șoareci au fost tratate cu AgNO3-30, (c) prin tratament cu AgNO3-200 și (d) tratate cu AgNO3 brut

Concluzie

Scopul experimentului a fost acela de a studia efectul medicinii homeopate argentum nitricum asupra sistemului eucariot și procariot. Atât in vitro, cât și in vivo au arătat detoxifierea potenței homeopatice. Dar bacteriile gram pozitive au arătat o creștere continuă a densității optice cu timpul din anumite motive necunoscute. De asemenea, în condiții in vivo, s-au observat unele modificări fiziologice, cum ar fi scăderea dimensiunii splinei și s-a constatat formarea chistului în albino-ul tratat împotriva celui netratat. Unele modificări fenotipice au fost, de asemenea, observate, cum ar fi căderea părului și schimbarea bruscă a greutății. După cum știm cu toții că medicina homeopatică nu are efecte secundare, dar din acest experiment putem concluziona că medicina homeopatică nu este sigură pentru aplicarea pe termen lung.