Abstract

Analiza imunomorfologică a țesutului adipos.

Histopatologie hepatică.

Analize de laborator.

Probele de sânge au fost colectate după un post peste noapte de 12 ore. Nivelurile de glucoză plasmatică, colesterol și colesterol HDL au fost măsurate enzimatic. Concentrațiile serice de insulină au fost determinate cu un kit de testare imunoradiometrică (Bi-Insulin IRMA; CisBio International, Saclay, Franța). Concentrațiile serice de amiloid A au fost măsurate, utilizând un kit de test imunosorbent legat de enzimă Cytoscreen kit de imunoanaliză (BioSource International, Camarilla, CA). Leptina și adiponectina serice au fost determinate, folosind kituri de radioimunologie de la Linco Research (St. Louis, MO), conform instrucțiunilor producătorului. Nivelurile serice ale interleukinei 6 și ale factorului de necroză tumorală (TNF) -α au fost măsurate printr-un sistem de testare imunosorbent legat de enzimă ultrasensibil (Quantikine; R&D System Europe, Abingdon, Marea Britanie). Proteina orosomucoidă și C-reactivă cu sensibilitate ridicată au fost măsurate utilizând un sistem de imunoanaliză automată Immage (Beckman-Coulter, Fullerton, CA). Sensibilitatea la insulină a fost evaluată prin metoda indicelui cantitativ de verificare a sensibilității la insulină (QUICKI). Calculul a fost efectuat din glucoză și insulină în repaus alimentar așa cum s-a descris anterior (23).

țesutul

Analize statistice.

Am folosit o metodă de selecție variabilă înainte pentru a identifica cel mai bun model pentru a estima gradul de infiltrare a macrofagelor. Variabilele au fost adăugate conform unui criteriu bazat pe scăderea sumei de eroare a pătratelor (criteriu bazat pe valoarea F a ANOVA). Acest model a arătat că infiltrarea macrofagelor în WAT omentală a fost cel mai bine prezisă de valorile trigliceridelor în post, sex și vârstă. Acești parametri pot fi utilizați pentru a obține o ecuație care estimează procentul de infiltrare de macrofage în WAT omental după cum urmează: 12.163 + 9.98 (× 1 dacă sex = M, sau × 0 dacă sex = F) + 0.332 × vârstă + 11.491 × (log trigliceride de post în mmol/l). Acest model explică 30% din variabilitatea infiltrării macrofagelor în WAT omental.

DISCUŢIE

Prezența macrofagelor rezidente în WAT și recrutarea crescută a acestora în timpul obezității a fost recent stabilită atât la oameni, cât și la rozătoare (3-6). În prezent, consecințele patologice ale infiltrării macrofagelor în WAT rămân ipotetice. O întrebare cheie fără răspuns este dacă infiltrația crescută a macrofagelor într-un anumit depozit WAT este asociată cu comorbidități specifice obezității. Acest studiu arată clar că acumularea de macrofage în WAT depinde de localizarea anatomică. Într-adevăr, există o infiltrație de două ori mai mare în omental decât în ​​WAT subcutanat. În plus, acumularea de macrofage WAT omentale este asociată semnificativ cu leziuni fibroinflamatorii hepatice severe la obezitatea morbidă la om.

Din câte știm, acesta este primul studiu care demonstrează o diferență între acumularea de macrofage în WAT omentală și subcutanată, bazată pe cuantificarea directă a celulelor HAM56 + infiltrate pe lamele de țesut adipos. Celulele CD68 + s-au dovedit a fi mai frecvente la visceral decât la WAT ​​subcutanat la subiecți umani cu greutate normală (10), sugerând că infiltrația WAT ​​omentală crescută include indivizi non-obezi. Gradul de infiltrare a macrofagelor reprezintă o nouă diferență legată de situl WAT, pe lângă capacitățile metabolice distincte, expresia genelor, funcțiile secretoare și capacitatea de răspuns hormonală (24). Factorii reali responsabili pentru recrutarea mai mare de macrofage în omental decât în ​​WAT subcutanat nu sunt cunoscuți. La modelele animale de obezitate, s-a arătat o relație între mărimea celulelor adipoase și cantitatea de macrofage din fracția vasculară a stromei din WAT (3). Studiul actual indică faptul că, în plus față de hipertrofia celulelor adipoase, vascularizația specifică depozitului și/sau inervația ar putea explica o infiltrație distinctă a WAT ​​cu celule imune.

Cea mai importantă constatare a noastră este că acumularea macrofagelor omatale WAT este asociată în mod semnificativ cu leziuni fibroinflamatorii hepatice severe, care au fost găsite la aproximativ 40% din populația obeză morbidă. Această asociere dăunătoare pare a fi specifică pentru infiltrarea macrofagelor în WAT omentală, deoarece nu a fost observată nicio relație între afectarea hepatică histologică și cantitatea de macrofage din WAT subcutanat. Corelația robustă găsită în întreaga populație între macrofagele omatale WAT și doi parametri hepatici, AST și γGT, susține ipoteza că infiltrarea macrofagelor omatale WAT contribuie la agravarea leziunilor hepatice. Acesta este primul raport care identifică o asociere între infiltrarea macrofagelor în WAT și o comorbiditate în obezitatea umană.

Mecanismele moleculare care leagă infiltrarea macrofagelor în WAT omental și modificările hepatice sunt încă de investigat. Studii recente la om au evaluat implicația adipokinelor, cum ar fi leptina, adiponectina și TNF-α, în patogeneza bolilor hepatice (25-27). La populația noastră de pacienți cu obezitate masivă, nici leptina, nici nivelurile circulante de TNF-α nu au fost semnificativ asociate cu severitatea leziunilor hepatice. În ceea ce privește adiponectina, studiile anterioare (26,27) au arătat că nivelurile circulante scăzute se asociază cu agravarea gradelor de necroinflamare hepatică. În studiul actual, pacienții obezi cu leziuni fibroinflamatorii hepatice marcate au prezentat niveluri semnificativ reduse de adiponectină. Aceste observații sugerează rolul adiponectinei de a proteja împotriva afectării inflamatorii hepatice. În prezent, nu se cunoaște dacă infiltrarea macrofagelor în WAT omental contribuie la reducerea producției de adiponectină la obezitatea umană.

În studiul nostru de corelație, trigliceridele au fost cel mai bun predictor al infiltrării macrofage omatale WAT și au crescut odată cu severitatea leziunilor hepatice. Deoarece trigliceridele sunt, de asemenea, crescute în diabetul de tip 2, am examinat diferiți parametri la subiecții diabetici versus nondiabetici din populația noastră. Datele noastre sugerează că diabetul nu este un factor determinant major al acumulării de macrofage WAT omentale. În ceea ce privește gravitatea leziunilor hepatice, există o tendință către un număr crescut de subiecți diabetici în grupurile „marcate” față de grupul „ușor”. Cu toate acestea, trebuie remarcat faptul că numărul mic de subiecți diabetici din cohorta noastră ar putea explica absența diferențelor statistice. Sunt necesare studii suplimentare, inclusiv subiecți diabetici obezi și non-obezi, pentru a evalua dacă diabetul contribuie la agravarea leziunilor hepatice la om.

Un studiu longitudinal recent la pacienții cu NAFLD, utilizând biopsie hepatică secvențială, a arătat că fibroza progresează la 37% dintre pacienți, cu o variabilitate ridicată a ratei de progresie la subiecți (34). Acest lucru subliniază necesitatea parametrilor predictivi pentru a evalua cantitatea de daune hepatice. S-a propus un scor clinic-biologic care combină IMC, vârstă, alanină aminotransferază și trigliceride pentru a prezice fibroza septală la pacienții supraponderali (35). În acest studiu, am folosit o abordare în trepte pentru a găsi cei mai buni predictori clinici și biologici ai leziunilor fibroinflamatorii hepatice severe din date, inclusiv măsurarea biomoleculelor inflamatorii candidate și cantitatea de macrofage în WAT omental. Un model care combină macrofagele adiponectinei, AST și WAT omentale (măsurate direct sau estimate de la vârstă, sex și trigliceride) s-a dovedit a fi cea mai bună combinație asociată cu gradul de leziuni hepatice fibroinflamatorii. Această constatare susține un rol dăunător pentru infiltrarea macrofagelor în WAT omental și nivelurile reduse de adiponectină circulantă în agravarea leziunilor fibroinflamatorii hepatice.

În concluzie, aceasta este prima demonstrație a unei legături între acumularea macrofagelor omatale WAT și daunele inflamatorii hepatice severe la obezitatea umană. Ecuația predictivă pe care o propunem ar putea fi utilizată ca surogat pentru biopsia hepatică la indivizii obezi morbid pentru a estima severitatea leziunilor hepatice. În prezent, valabilitatea acestui model trebuie luată în considerare numai pentru pacienții cu obezitate morbidă. Investigațiile viitoare ale cohortelor umane independente cu diferite grade de boală hepatică și IMC ar trebui să valideze acuratețea și potențialul său de aplicare generală. În plus, deoarece am găsit legături semnificative între recrutarea macrofagelor, trigliceridele și colesterolul HDL, consecințele infiltrației macrofage WAT omentale asupra bolilor cardiovasculare legate de obezitate ar putea fi de interes în studiile viitoare.