1 Catedră de Pediatrie, Universitatea de Medicină și Farmacie „Carol Davila”, str. Dionisie Lupu 37, București, România

nivelurile

2 Institutul Național pentru Sănătatea Mamei și Copilului „Alessandrescu-Rusescu”, Bulevardul Lacul Tei 120, București, România

3 Departamentul de Imunologie Clinică CDPC, Spitalul Clinic Colentina, str. Ștefan cel Mare 19-21, București, România

4 Clinical Research Unit RECIF (Reseau d’Epidemiologie Clinique International Francophone), 19-21 Street Stefan cel Mare, Bucharest, Romania

5 Catedra de Medicină Internă, Universitatea de Medicină și Farmacie „Carol Davila”, str. Dionisie Lupu 37, București, România

Abstract

1. Introducere

Obezitatea este o problemă la nivel mondial și, din păcate, prevalența sa la copii este în creștere [1]. Obezitatea este asociată cu diferite comorbidități, inclusiv rezistența la insulină, hipertensiunea arterială și boala hepatică grasă nealcoolică (NAFLD) [2]. De asemenea, obezitatea este un factor de risc pentru dezvoltarea NAFLD. NAFLD cuprinde diverse leziuni hepatice, de la steatoză simplă la progresivă și inflamație, fibroză, ciroză și, în cele din urmă, carcinom hepatocelular [3]. Prevalența sa crește în copilărie și se fac eforturi de cercetare pentru a găsi predictori cu debut precoce pentru NAFLD la copiii obezi [4]. Biomarkerii pentru NAFLD sunt de o importanță capitală pentru diagnosticarea timpurie și implementarea strategiilor preventive pentru a reduce poverile asociate la vârsta adultă.

Proteinele de șoc termic (Hsp, proteinele de stres) sunt o clasă eterogenă de proteine ​​cu roluri esențiale precum plierea proteinelor, sortarea proteinelor și prezentarea antigenului [5]. Hsp90 este o chaperonă moleculară omniprezentă implicată în supraviețuirea celulară, transducția semnalului și răspunsul celular împotriva diferiților factori de stres [6]. Este prezent în citoplasma celulei sub mai multe izoforme, dar cele mai importante sunt Hsp90α (forma majoră și inductibilă) și Hsp90β (formă minoră și constitutivă) [7].

Studiile proteomice anterioare [8] au indicat că familia Hsp90 are expresie diferențială la pacienții adulți cu NAFLD obezi față de indivizii sănătoși de control, propunându-i ca potențiali biomarkeri pentru NAFLD. Cu toate acestea, nu există niciun studiu anterior care să se adreseze familiei Hsp90 într-un grup obez pediatric. În mod specific, acești biomarkeri ar trebui să fie confirmați într-o cohortă independentă folosind metode de detectare specifice bazate pe detectarea anticorpilor. Scopul studiului a fost de a examina nivelurile circulante de Hsp90α și Hsp90β la copiii supraponderali și obezi. În plus, Hsp90α și Hsp90β au fost evaluați ca biomarkeri pentru NAFLD la copiii supraponderali și obezi.

2. Materiale și metode

2.1. Pacienți

Au fost prelevate probe de sânge de la fiecare participant, iar serul a fost stocat la -80 ° C pentru o analiză suplimentară a biomarkerilor de interes. Pentru a testa rezistența la insulină, indicele HOMA-IR (evaluarea modelului de homeostazie) a fost calculat pentru fiecare individ din probe de post [13]. Insulina a fost dozată folosind un kit ELISA de diagnostic „in vitro” furnizat de Mercodia Ultrasensitive Insulin Assay. Probele au fost analizate conform indicațiilor producătorului kitului. Absorbanța optică a fost analizată folosind cititorul de plăci ELISA de la Bio-Rad. Rezistența la insulină a fost luată în considerare dacă valorile HOMA-IR au fost mai mari de 2,5 pentru copiii prepubertali și peste 4 pentru copiii pubertari (conform Calcaterra și colab. [14]). ASAT, ALAT, fosfataza alcalină și acidul uric au fost analizate spectrofotometric folosind sistemul chimic Dimension RXL Max.

2.2. Analiza serică Hsp90

Serul stocat la -80 ° C a fost analizat în continuare pentru Hsp90 circulantα și Hsp90β expresie folosind truse ELISA comerciale. Hsp90α a fost analizat din probe de ser în duplicat folosind trusa ELISA de la Novus Biologicals (limită de detecție 0,03 ng/ml, variație a coeficientului intra-test 8,6%, variație coeficient inter-test 10%). Analiza a fost efectuată conform instrucțiunilor producătorului. Hsp90β a fost analizat din probe de ser în duplicat cu trusa ELISA de la CUSABIO (limită de detecție 0,1 ng/ml, variație a coeficientului intra-test 8%, coeficient de variație inter-test 10%). Nu au fost raportate reactivități încrucișate pentru ambele truse ELISA utilizate. Analiza a fost efectuată conform instrucțiunilor producătorului. Incubațiile, etapele de spălare și absorbția optică au fost efectuate utilizând sistemul ELISA de la Bio-Rad. Absorbanța optică medie din duplicate a fost luată în considerare și transformată în concentrație după ce a fost comparată cu o curbă standard 4PL, așa cum au indicat producătorii. Ser Hsp90α și Hsp90β concentrațiile au fost exprimate în același mod, ca ng/ml.

Nivelurile serice totale de Hsp90 au fost estimate prin adăugarea de Hsp90α cu Hsp90β valori.

2.3. Abordare statistică

Variabilele continue au fost rezumate prin deviație medie și standard dacă au distribuție normală sau ca valoare mediană și minim-maximă dacă distribuția nu a fost normală. Variabilele categorice au fost rezumate ca valoare și procente. Testele parametrice au fost folosite pentru a evalua diferențele dintre variabilele continue dacă distribuția a fost normală sau au fost utilizate teste nonparametrice dacă distribuția nu a fost normală. Testele Chi-pătrat au fost utilizate pentru a analiza diferențele dintre variabilele categorice. SPSS versiunea 16 (Chicago, SUA) a fost utilizată pentru analiza statistică. Analiza puterii a fost efectuată utilizând calculatorul pentru dimensiunea eșantionului ClinCalc (https://clincalc.com/stats/samplesize.aspx). Pentru a detecta o diferență de 5 ng/ml pentru Hsp90α și 1 ng/ml pentru Hsp90β niveluri cu o rată de alocare de 1/3, pentru un α probabilitatea de eroare la 0,05 și pentru o putere de studiu de 0,80, ar fi nevoie de minimum zece controale și 30 de pacienți obezi.

3. Rezultate

Grupul supraponderal și obez a fost format din 68 de copii: 35 de băieți (51,5%) și 33 de fete (48,5%). Vârsta lor medie a fost de 10 ani (3 ani-17 ani). 25 de pacienți (36,8%) aveau sindrom metabolic, așa cum este definit de criteriile consens IDF [15]. 26 de pacienți (38,2%) au fost considerați cu NAFLD, 7 pacienți dintre aceștia 26 având hepatocitoliză severă și au fost considerați cu NASH (steatohepatită nealcoolică). Indicele HOMA-IR median a fost de 2,20 (0,34-13,57). Caracteristicile pacienților sunt rezumate în Tabelul 1. Grupul de control a fost format din zece copii sănătoși, egalați cu vârsta și vârsta, 3 fete (30%) și 7 băieți (70%)

comparativ cu grupul supraponderal și obez, exact testul Fisher) cu o vârstă mediană de 9 ani (4 ani-16 ani,

, comparativ cu grupul supraponderal și obez, Mann-Whitney