Intenția noastră este de a arăta că o baterie de măsurători biochimice de bază combinate cu măsurători simple de reper și analize morfometrice moderne pot ajuta la atribuirea unui indice cantitativ al stării de dezvoltare a etapelor embrionare și larvare ale peștilor. Această baterie de măsurători va utiliza o tehnologie modernă ieftină, care poate fi aplicată embrionilor individuali. Această abordare ar permite proiectarea experimentelor factoriale pentru a evalua diferite aspecte ale metodelor de acvacultură în funcție de rata și uniformitatea creșterii larvelor. Experimentele factoriale sunt proiectate de partenerii noștri NMF, Dean Perry și Laurel Ramseyer, pentru a testa eficacitatea regimurilor nutriționale aplicate definite. Factorii dietetici care urmează să fie testați includ diverse specii de alge vii cultivate la laboratorul Milford NMF care vor fi analizate în funcție de spectrul lor de conținut de acid gras polinesaturat și aminoacizi. Momentul conversiei la o dietă comercială mai puțin costisitoare din pește va fi un factor în proiectarea experimentală. Dietele contrastante vor fi construite din componente analizate cu acizii grași polinesaturați C3 și C6 (PUFA) ca variabile majore. 3. PROGRESUL METODOLOGIC

tautog

Metode biochimice.
Laboratorul Kunkel este familiarizat cu tehnicile de extracție a lipidelor, analiza aminoacizilor și determinarea gravimetrică a% lipidelor în probe biologice (Kunkel și Pan, 1976). Primele câteva luni din timpul proiectului nostru s-au petrecut dezvoltând tehnicile de extracție și analiză a lipidelor. Acum suntem capabili să pregătim extracte lipidice din probele care urmează să fie furnizate de laboratorul Milford la un singur nivel de pește. Profilurile polinesaturate sunt analizate sub conducerea profesorului asociat Eric Decker de la U. Mass. Departamentul de Științe Alimentare. Analiza conținutului de proteine, ARN și ADN al ouălor și larvelor rezultate va fi efectuată prin protocoale stabilite în laboratorul Kunkel. Am obținut o probă de 8 ml de ouă tautog cu care să purificăm calmodulina și Lv și să facem un antiser anti-tautog-Lv. Mai mult, procedurile noastre în acest sens au fost recent publicate pe măsură ce le-am aplicat la Winter Flounder (Hartling și colab., 1997, 1999)

Măsurători ale creșterii.
Morfometria a cunoscut o revoluție în ultimul deceniu. Vechile tehnici statistice sunt abandonate în favoarea unei noi abordări care să permită abordarea dimensiunii și formei generale a unui organism. Au fost dezvoltate noi instrumente pentru examinarea formei și sunt aplicate pe tautog.
4. PRODUSE PENTRU DATA

  1. Doi muncitori instruiți în protocolul de extracție a lipidelor și pregătirea probelor pentru cromatografia gazoasă a PUFA.
  2. Standard extern stabilit și standarde identificate pentru PUFA
  3. Standardele pentru PUFA-uri din pești au fost analizate și utilizate pentru a estima modelele PUFA ale eșantionului de țesuturi ale peștilor.
  4. Trei loturi mici de embrioni tautog au fost obținute din laboratorul Milford și două dintre acestea au fost utilizate până acum pentru a stabili abordarea morfometrică a indicilor de creștere și dezvoltare.
  5. Ouăle Tautog au fost obținute pentru purificarea Lv și calmodulinei, iar un student a primit pregătire în analiza CaM.

Hartling RC, JJ Pereira și JG Kunkel. 1997. Caracterizarea unei fracții de lipovitelină stabilă la căldură și dezvoltarea unui test imunologic pentru vitelogenina și proteina gălbenușului în plată de iarnă (Pleuronectes americanus). J. Exp. Zool. 278: 156-166.

Hartling RC și JG Kunkel. 1999. Soarta de dezvoltare a lipovitelinei proteinei gălbenușului la embrioni și larve de plată de iarnă, Pleuronectes americanus. J. Exp. Zool. (in presa).

Kunkel JG și ML Pan. 1976. Selectivitatea absorbției de proteine ​​de gălbenuș: comparația vitellogeninelor a două insecte. J. Insect Fiziol. 22: 809-818.

Perry, D. și L. Ramseyer. 1997. Efectul compoziției dietetice a acizilor grași și a aminoacizilor asupra ratei de creștere și a compoziției corporale a larvei Tautog (Tautoga Onitis) și asupra succesului reproductiv al adultului Tautog. Propuneri de proiect către NOAA/CMER.