Structurile chimice ale tol-mitoFluo (ester fluorescein decil (tri-p-tolil) fosfoniu), mitoFluo (ester fluorescein decil (trifenil) fosfoniu) și C10-FL (ester decil fluoresceinic).

(A) Dependența de doză a stimulării respirației mitocondriilor hepatice de șobolan de către tol-mitoFluo (curba neagră), mitoFluo (curba roșie) și C10-FL (curba verde) cu succinat ca substrat. (B) Efectul tol-mitoFluo, mitoFluo și C10-FL (concentrație, 1 μM) asupra potențialului de membrană al RLM a fost estimat de modificările de absorbție ale safraninei O colorante sensibile la potențial (15 μM). Măsurătorile potențialului membranei și ale respirației au fost efectuate în mediul de incubație (vezi secțiunea experimentală) cu succinat de 5 mM și rotenonă de 2 µM. Datele sunt media ± SD a cel puțin trei măsurători.

(A - C) Efectul dependent de doză al (A) tol-mitoFluo, (B) mitoFluo sau (C) C10-FL asupra creșterii celulelor Bacillus subtilis. Creșterea B. subtilis a fost evaluată prin absorbanță la 620 nm la 37 ° C cu un cititor de microplăci Multiskan FC cu 96 de godeuri. (D) măsurători OD620 ale celulelor B. subtilis la 20 de ore după tratament cu diferite concentrații de tol-mitoFluo, mitoFluo, C10-FL, FCCP, CCCP și DNP. Linia punctată gri arată nivelul de creștere a celulei în control. Punctele de date reprezintă media ± SD a cel puțin trei experimente.

Efectul tol-mitoFluo, mitoFluo și C10-FL asupra potențialului membranei în B. subtilis. Modificările potențialului membranei au fost monitorizate prin măsurarea fluorescenței DiS-C3- (5) (10 uM) în tamponul PBS. Concentrația de gramicidină A, 0,5 ng/ml.

Efectul tol-mitoFluo, mitoFluo și C10-FL (0,5 și 1,5 µM fiecare) asupra permeabilizării membranei în B. subtilis. Modificările permeabilizării membranei au fost monitorizate prin măsurarea fluorescenței TO-PRO-3 (1 μM) în tamponul PBS. Fosta alameticină a canalului a fost adăugată la sfârșitul fiecărei înregistrări ca un control pozitiv (concentrație, 10 µg/mL).

Fluorescența din celulele B. subtilis colorate cu tol-mitoFluo (rândul superior), mitoFluo (rândul mijlociu) și C10-FL (rândul inferior) și imaginile corespunzătoare ale luminii de transmisie. Celulele au fost incubate cu 5 μM de coloranți timp de 5 min, spălate cu LB și imaginate.

Efectul CCCP (10 µM) asupra acumulării de mitoFluo de către celulele B. subtilis, monitorizat de FCS. (A) Urmele intensității fluorescenței de mitoFluo (100 nM) înregistrate cu setarea FCS în prezența sau absența celulelor bacteriene (10 6 per ml de PBS). (B) Dependențele corespunzătoare numărului de vârfuri cu intensitatea fluorescenței F care depășește pragul F0, n (F> F0), de valoarea F0.

Viabilitatea celulelor Rko în prezența mitoFluo. Celulele Rko au fost incubate cu mitoFluo timp de 17 ore. Viabilitatea celulară a fost determinată cu reactivul Cell Titer-Blue (Promega). Datele sunt media ± SD a cel puțin trei măsurători.

Abstract

pentru

Structurile chimice ale tol-mitoFluo (fluoresceină decil (tri-p-tolil) fosfoniu ester), mitoFluo (fluoresceină decil (trifenil) fosfoniu ester) și C10-FL (fluoresceină decil ester).

(A) Dependența de doză a stimulării respirației mitocondriilor hepatice de șobolan de către tol-mitoFluo (curba neagră), mitoFluo (curba roșie) și C10-FL (curba verde) cu succinat ca substrat. (B) Efectul tol-mitoFluo, mitoFluo și C10-FL (concentrație, 1 μM) asupra potențialului de membrană al RLM a fost estimat de modificările de absorbție ale safraninei O colorante sensibile la potențial (15 μM). Măsurătorile potențialului membranei și ale respirației au fost efectuate în mediul de incubație (vezi secțiunea experimentală) cu succinat de 5 mM și rotenonă de 2 µM. Datele sunt media ± SD a cel puțin trei măsurători.

(A - C) Efectul dependent de doză al (A) tol-mitoFluo, (B) mitoFluo sau (C) C10-FL asupra creșterii celulelor Bacillus subtilis. Creșterea B. subtilis a fost evaluată prin absorbanță la 620 nm la 37 ° C cu un cititor de microplăci Multiskan FC cu 96 de godeuri. (D) Măsurători OD620 ale celulelor B. subtilis la 20 de ore după tratament cu diferite concentrații de tol-mitoFluo, mitoFluo, C10-FL, FCCP, CCCP și DNP. Linia punctată gri arată nivelul de creștere a celulei în control. Punctele de date reprezintă media ± SD a cel puțin trei experimente.

Efectul tol-mitoFluo, mitoFluo și C10-FL asupra potențialului membranei în B. subtilis. Modificările potențialului membranei au fost monitorizate prin măsurarea fluorescenței DiS-C3- (5) (10 uM) în tamponul PBS. Concentrația de gramicidină A, 0,5 ng/ml.

Efectul tol-mitoFluo, mitoFluo și C10-FL (0,5 și 1,5 µM fiecare) asupra permeabilizării membranei în B. subtilis. Modificările permeabilizării membranei au fost monitorizate prin măsurarea fluorescenței TO-PRO-3 (1 μM) în tamponul PBS. Fosta alameticină a canalului a fost adăugată la sfârșitul fiecărei înregistrări ca un control pozitiv (concentrație, 10 µg/mL).

Fluorescența din celulele B. subtilis colorate cu tol-mitoFluo (rândul superior), mitoFluo (rândul mijlociu) și C10-FL (rândul inferior) și imaginile corespunzătoare ale luminii de transmisie. Celulele au fost incubate cu 5 μM de coloranți timp de 5 min, spălate cu LB și imaginate.

Efectul CCCP (10 µM) asupra acumulării de mitoFluo de către celulele B. subtilis, monitorizat de FCS. (A) Urmele intensității fluorescenței de mitoFluo (100 nM) înregistrate cu setarea FCS în prezența sau absența celulelor bacteriene (10 6 per ml de PBS). (B) Dependențele corespunzătoare ale numărului de vârfuri cu intensitatea fluorescenței F care depășește pragul F0, n (F> F0), de valoarea F0.

Viabilitatea celulelor Rko în prezența mitoFluo. Celulele Rko au fost incubate cu mitoFluo timp de 17 ore. Viabilitatea celulară a fost determinată cu reactivul Cell Titer-Blue (Promega). Datele sunt media ± SD a cel puțin trei măsurători.