Nuria Ruiz

1 Grupul de Cercetare Neuroendocrinologie și Nutriție. Departamentul de Științe ale Sănătății, Universitatea din Jaén, 23071 Jaén, Spania

Ana Belén Segarra

1 Grupul de Cercetare Neuroendocrinologie și Nutriție. Departamentul de Științe ale Sănătății, Universitatea din Jaén, 23071 Jaén, Spania

Luis Lara

2 Departamentul de Fiziologie și Biochimie a Nutriției Animalelor, Stația Experimentală din Zaidín. Consiliul Spaniol pentru Cercetare Științifică (CSIC), Armilla, 18100 Granada, Spania

Manuel Ramírez-Sánchez

1 Grupul de Cercetare Neuroendocrinologie și Nutriție. Departamentul de Științe ale Sănătății, Universitatea din Jaén, 23071 Jaén, Spania

Isabel Prieto

1 Grupul de Cercetare Neuroendocrinologie și Nutriție. Departamentul de Științe ale Sănătății, Universitatea din Jaén, 23071 Jaén, Spania

Abstract

1. Introducere

Dieta mediteraneană se caracterizează printr-un aport ridicat de alimente vegetale, precum legume, fructe, nuci și semințe, cereale și ulei de măsline extravirgin (EVOO), ca sursă principală de grăsimi dietetice. Cu toate acestea, un aport moderat de alimente de origine animală, cum ar fi produse lactate, păsări de curte și alte tipuri de carne, ouă, pește și crustacee, face, de asemenea, parte din acest model dietetic [1,2]. Alimentele vegetale oferă o sursă excelentă de antioxidanți, care păstrează alimentele de la fermă la farfurie și mențin stabilitatea nutrienților și funcționalitatea altor componente minore [3]. Mai important, acestea oferă un rol protector împotriva majorității bolilor cronice, cum ar fi diabetul și hipertensiunea, care a fost demonstrat în mai multe studii [4], și susține rolul dietei mediteraneene ca unul dintre cele mai sănătoase modele dietetice disponibile în întreaga lume.

În cadrul componentelor antioxidante ale dietei mediteraneene, polifenolii se remarcă. De obicei, polifenolii sunt împărțiți în mai multe grupuri, conținute în cantități mari în fructe [5,6], precum și în alte surse alimentare, cum ar fi legumele, leguminoasele, cerealele integrale și EVOO; toate alimentele tipice dietei mediteraneene [7,8]. Măslinul (Olea europaea L., familia Oleaceae) produce propria baterie de polifenoli. Acești polifenoli se găsesc în EVOO și includ hidroxitirosol, tirozol, oleuropeină și oleocantal [9,10]. Aportul acestor compuși fenolici în dietă a fost profund legat de scăderea bolilor cronice și metabolice [3,4,8,11,12], pe lângă modificările microbiomului intestinal, care este, de asemenea, legat de dezvoltarea sindrom metabolic [13.14].

Aceste beneficii ale polifenolilor pentru sănătate sunt legate de o creștere a stării antioxidante totale și o scădere a inflamației în organism. Nivelurile ridicate de excreție totală a polifenolului sunt asociate cu niveluri mai scăzute de trigliceride plasmatice, glucoză și tensiune arterială diastolică [15]. Alte studii au arătat, de asemenea, relația dintre nivelurile diferiților polifenoli din urină și un risc mai mic de boli metabolice [16,17,18].

Obiectivul principal al studiului de față a fost de a analiza, la un grup de femei spaniole sănătoase, relația dintre tiparele dietetice (în principal aportul zilnic al grupurilor tipice de alimente mediteraneene bogate în polifenoli și aportul total de polifenoli) și starea antioxidantă (determinată prin testul Folin-Ciocalteu în probe de urină), precum și nivelurile de 8-izoprostani în urină, ca marker al peroxidării lipidelor.

2. Materiale și metode

2.1. Subiecte

2.2. Evaluare dietetică

Fiecare participant a completat un chestionar pentru a colecta informații despre dietă, caracteristicile stilului de viață și măsurătorile antropometrice. Mai puțin de 9% dintre subiecți erau fumători ușori (sub 10 țigări/zi). Datele privind aportul alimentar au fost colectate prin interviuri față în față pentru a estima aportul obișnuit în ultimele 3 luni. Au fost incluse fotografii pentru a facilita estimarea aportului de dimensiuni.

Aportul de polifenoli a fost estimat folosind baza de date Phenol-Explorer [20]. Pentru fiecare grup de alimente (cereale, leguminoase, legume crude, legume gătite, fructe și EVOO crude/gătite), conform bazei de date, media conținutului de fenol a fost calculată în funcție de dimensiunile standard ale porțiunilor înregistrate în chestionarul de frecvență alimentară (FFQ) ) și transformat în aport de 24 de ore.

Aportul total de polifenoli a fost calculat ca suma tuturor aporturilor individuale de polifenol din toate sursele de alimente raportate de polifenolul FFQ. Aporturile de polifenoli au fost exprimate în termeni reglați energetic (mg pe 1000 kcal/zi de energie totală consumată).

Participanții au completat, de asemenea, un chestionar cu 14 puncte privind aderarea la dieta tradițională mediteraneană (AMDI) [21].

2.3. Excreția fenolilor totali în urină

Prima probă de urină a fost colectată de la voluntari dimineața folosind sticle sterilizate. Probele de 10 ml de urină au fost centrifugate timp de 5 minute (1000 g, la 4 ° C). După îndepărtarea sedimentului, acestea au fost fracționate în alicote și congelate la -80 ° C. Probele de urină și standardele de acid galic (GAE) au fost diluate cu 1 ml de apă Milli-Q și acidulate cu 34 μL de acid clorhidric la 35%. Au fost apoi folosite pentru încărcarea cartușelor Oasis ® MAX SPE 30 mg (Waters, Milford, CT, SUA). A fost aplicată procedura de extracție descrisă pentru cartușele Oasis® MAX și 15 μL din fracțiile eluate au fost amestecate cu 170 μL de apă Milli-Q în placa cu 96 de godeuri cu microtitrare termos, adăugând 12 μL de reactiv Folin-Ciocalteu (FC), și 30 μL de carbonat de sodiu (200 gL -1). Amestecurile au fost incubate timp de 1 oră la temperatura camerei în întuneric. După perioada de reacție, s-au adăugat 73 pl de apă Milli-Q cu pipeta multicanal. Absorbanța a fost măsurată la 765 nm în spectrofotometrul Optima Fluostar Ultraviolet/Vizibil (UV/VIS) (BMG LabTech, Ortenberg, Germania) [15,22].

2.4. Determinarea urinei 8-izoprostani

Concentrațiile de 8-isoprostan au fost măsurate în triplicat cu un kit de imunoanaliză enzimatică 8-isoprostan (Cayman Chemical, Ann Arbor, GM, SUA). efectuate manual și citite cu FluoStar Optima Spectrophotometry. Concentrațiile au fost exprimate ca izoprostani pg/mg creatinină. Pentru creatinina din probele de urină, metoda picatului alcalin Jaffé a fost utilizată cu un kit comercial (Spinreact, Barcelona, ​​Spania). În absența bolii, concentrațiile de creatinină în urină sunt de obicei foarte stabile și pot fi utilizate pentru a estima excreția urinară a substanțelor cu doar probe de urină la fața locului.

2.5. Analize statistice

Datele au fost organizate și analizate folosind Microsoft Excel și programul statistic IBM SPSS statistic 24 (IBM, Armonk, Nueva York, SUA). Datele au fost exprimate ca medie ± SEM și au reprezentat procentul de contribuție al grupurilor de alimente la conținutul total de polifenoli din dietă.

Diferențele dintre cele trei grupe de vârstă la momentul inițial au fost testate prin Analiza Varianței (ANOVA) și analiza post hoc, cu testul diferenței cele mai puțin semnificative (LSD) Fisher pentru comparații multiple. Analiza de regresie liniară a fost utilizată pentru a evalua relația dintre concentrațiile de 8-izoprostan, echivalenții acidului galic (GAE) în urină și aportul total de polifenoli. Semnificația a fost definită ca o valoare a p Figura 1 pentru cele trei grupe de vârstă luate în considerare. Numărul total de participanți disponibili pentru analizele finale a fost de 207. Potrivit bazei de date Phenol-Explorer, nouă alimente tipice mediteraneene, care conțin polifenoli relevanți, au fost incluse în chestionar: cereale, leguminoase, cartofi, nuci, legume crude, legume gătite, fructe și EVOO crud/gătit. Aportul mediu de polifenoli a fost de 1098 ± 45 mg/zi.

aportul zilnic

Aportul alimentar de polifenoli a corespuns fiecărui grup alimentar mediteranean, exprimat ca% din aportul zilnic total de polifenoli. EVOO = Ulei de măsline extravirgin.

Relația dintre diferite grupuri de alimente (exprimată ca porție pe zi) și aportul total estimat de polifenoli (mg/zi). R 2: coeficient de determinare.

3.3. Relația dintre aportul total de polifenoli, urina 8-izoprostani și capacitatea antioxidantă

tabelul 1

Corelațiile dintre diferitele grupuri de alimente și AMDI și urina 8-izoprostan și nivelurile de echivalenți ai acidului galic (GAE) în urină.

PCereală Cartofi EVOO (crud) EVOO (gătit) Fructe Legume (crud) Legume (gătit) Pulsuri Nuci AMDI
8-isop/creat (pg/mg)0,0905−0,0174−0,06800,1249−0.3079 ***−0.0313−0.1834 *−0,0579−0.1997 **−0.2070 **
GAE/creat (mg/mg)0,10610,11160,2379 ***0,08600,4183 ***0,2777 ***0,2143 **0,08710,2365 ***0,4064 ***

Analiză factorială biplot (scor grafic + diagramă de încărcare) Factor 1 vs. Factorul 2. Factorul 1 (varianță de 31,2%) este reprezentat de variabilele: echivalent acid galic (GAE, mg/mg creatinină, sarcină = 0,745), aport total de polifenoli (mg/zi, sarcină = 0,627), aderență la indicele dietei mediteraneene (AMDI, încărcare = 0,530), ulei de măsline extravirgin brut (EVOO brut, porții/zi, încărcare = 0,535), fructe (porții/zi, încărcare = 0,550) și legume crude (porții/zi, încărcare = 0,606). Factorul 2 (12,7% varianță) este reprezentat de urina 8-izoprostani (pg/mg creatinină, sarcină = -0,803), aport total de polifenoli (mg/zi, sarcină = 0,654), fructe (porții/zi, sarcină = 0,664) și nuci (porții/zi, sarcină = 0,526).

4. Discutie

Dieta tradițională mediteraneană include în principal alimentele vegetale și EVOO ca surse mai importante de fitosteroli, care joacă un rol esențial în încetinirea stresului oxidativ și contribuie la prevenirea bolilor cronice, în special a bolilor cardiovasculare, a cancerului și a sindromului metabolic [23, 24.25]. Rezultatele obținute din studiul populației arată un aport zilnic de pâine, paste, orez, legume, fructe, leguminoase și nuci, care este mai mic decât cel recomandat [26]. Aceste rezultate sunt în conformitate cu valoarea medie a aderării la dieta mediteraneană (8,6, 9,2 și, respectiv, 9,8 pentru grupele de vârstă, pe o scară de la 0 la 14) și se aliniază cu rezultatele altor studii [27,28 ]. Principalele abateri de la modelele dietetice mediteraneene au fost consumul redus de legume și fructe și consumul ridicat de carne, produse lactate, băuturi răcoritoare și alimente gătite în prealabil. Doar aportul zilnic de EVOO a fost peste nivelurile recomandate.

Măsurarea capacității antioxidante totale în urină utilizând metoda Folin-Ciocalteu a fost validată ca o modalitate de estimare a nivelurilor consumului de polifenoli, care a fost la rândul său legată de mai multe patologii, cum ar fi obezitatea și hipertensiunea [15,22,37]. Ambele măsurători obținute prin colectarea urinei de 24 de ore sau a urinei spot, normalizate de creatinină, au fost utilizate pentru a estima aportul total de polifenoli [20]. Rezultatele noastre susțin această metodă ca biomarker al polifenolilor din dietă totală, pe baza regresiei pozitive și semnificative care a fost stabilită între aportul estimat de polifenoli și mg de GAE/mg de creatinină în probele de urină ale participanților.

În plus, s-a stabilit o regresie liniară semnificativă, dar negativă, între polifenoli dietetici totali și nivelurile de 8-izoprostani urinare. 8-izoprostanii din urină sunt folosiți ca biomarker al stării oxidative, în special pentru deteriorarea lipidelor oxidative [38], iar scăderea sa a fost asociată cu consumul de alimente bogate în polifenoli, cum ar fi EVOO [15].

Capacitatea antioxidantă totală în urină se corelează pozitiv cu aportul zilnic de fructe, legume, nuci, EVOO crud și cu aderarea la dieta mediteraneană. Cu toate acestea, nivelurile de 8-isoprostani urinare se corelează negativ cu aportul zilnic de fructe, nuci și cu IMDI.

În cele din urmă, analiza factorială a arătat că indicii urinari (GAE mg/mg creatinină și 8-izoprostani pg/mg creatinină) utilizați în prezentul studiu ar putea fi utilizați ca markeri atât ai aportului total de polifenoli din dietă, cât și al consumului de alimente tipice Dieta mediteraneană, cum ar fi EVOO, fructe și legume crude.

Cu toate acestea, studiul nostru are unele limitări: am înscris exclusiv femei sănătoase dintr-o anumită zonă (sudul Spaniei), proiectul experimental actual (studiu transversal) referitor doar la asocierile dintre variabile și alți markeri urinari ar fi putut fi inclus în analiză . Studiile viitoare în acest domeniu ar putea crește dimensiunile eșantionului, să analizeze alte populații (de exemplu, să compare bărbații și femelele, în interiorul și în afara zonei mediteraneene), să analizeze alți factori de stil de viață, să evalueze diferiți markeri dietetici în probele de urină și să efectueze studii intervenționale cu diferite tipare dietetice pentru a ne permite să stabilim relații cauză-efect.

5. Concluzii

Luate împreună, aceste rezultate demonstrează că aderența la dieta mediteraneană și aportul ridicat de grupuri tipice de alimente mediteraneene cu conținut ridicat de polifenoli, sunt asociate cu starea antioxidantă și cu markeri îmbunătățiți ai stresului oxidativ lipidic la femeile sănătoase. În plus, rezultatele indică faptul că măsurarea capacității antioxidante totale în urină și a nivelurilor de 8-izoprostani în urină pot fi biomarkeri adecvați ai aportului total de polifenoli.

Mulțumiri

Sprijinul tehnic și uman oferit de CICT și de la Universidad de Jaén (UJA, 286 MINECO, Junta de Andalucía, FEDER) este recunoscut cu recunoștință.

Contribuțiile autorului

Conceptualizare, A.B.S. și I.P.; Curarea datelor, N.R., A.B.S., M.R.-S. și I.P.; Investigație, N.R., A.B.S., M.R.-S. și I.P.; Metodologie, A.B.S. și L.L; Supraveghere, M.R.-S. și I.P.; Scriere - proiect original, N.R., A.B.S., M.R.-S., L.L. și I.P.

Finanțarea

Această cercetare a fost finanțată de Universitatea din Jaén (Planul de Apoi la I + D + i al Universității din Jaén. Acțiunea 1_2017)

Conflicte de interes

Autorii nu declară niciun conflict de interese.