Izolarea exosomilor din laptele de vacă și cel uman. Exosomii derivați din lapte (MDE) au fost izolați din laptele de vacă (EXO COW) și uman (EXO HUMAN) prin centrifugare secvențială. MDE-urile au fost analizate folosind microscopia electronică de transmisie cu colorare negativă (A, F). Profilul distribuției mărimii MDE a fost investigat folosind NanoSight. (B, G) Distribuția mărimii particulelor (în funcție de intensitate) a MDE izolate a fost determinată prin împrăștierea dinamică a luminii (DLS) (C, H). Expresia proteinelor a markerilor specifici exosomilor CD81 și CD9 a fost evaluată prin western blot, cu HSP70 utilizat ca control negativ (D, I). Expresia RNU6 miARN-148 și miARN-320 în MDEs a fost măsurată prin qRT-PCR. Rezultatele analizei qRT-PCR sunt prezentate ca valori Ct (E, J). Pdl = Indicele polidispersității, CT = pragul ciclului.

uman

Exosomii sunt absorbiți de intestin. Șoarecii Balb/c au fost exosomi administrați prin gavaj, izolați din laptele de vacă și de om, timp de 7 zile. (50 mg/kg în 200 μL soluție salină tamponată cu fosfat (PBS)). Șoarecii au fost cântăriți pe parcursul întregii perioade de administrare a exosomilor (A) MDR-uri marcate cu colorant DiR izolate din vacă (EXO COW), iar laptele uman (EXO HUMAN) a fost administrat prin gavaj începând cu a șasea zi. Imaginile au fost obținute pentru analiza fluorescentă folosind scanerul Typhoon FLA 9500 (B, C), n = 4.

Administrarea orală de MDE a crescut conținutul de miARN de lapte foarte exprimat în colonul șoarecilor colici după tratamentul cu MDE. Exprimarea miARN în colonul șoarecilor colitici tratați sau nu cu MDE. Exprimarea a 4 din 12 miARN extrem de exprimate derivate din lapte, și anume let-7a, miR-320, miR-375 și miR148a prin analiza RT-PCR. Valorile qRT-PCR obținute au fost calculate utilizând metoda 2 ^ (-∆∆ CT), valorile fiind normalizate față de expresia RNU6B (A). Reprezentarea primelor 10 gene țintă cunoscute a fi reglementate de cele mai abundente 11 miARN de lapte. Genele țintă au fost cântărite în funcție de rangul miARN-urilor din lapte (MiRTarBase). Cele 11 cele mai puternic exprimate miARN au fost determinate de rezultatele secvențiale de generație următoare (NGS) anterioare în ARN izolat din fracțiunile din zer din laptele uman [4] (B). Exprimarea DNMT3 și DNMT1 în colonul șoarecilor colitici tratați cu MDE (EXO +) și netratați (EXO-). Nivelul de expresie al DNMT3 și DNMT1 a fost analizat prin qRT-PCR. Valorile au fost calculate utilizând metoda 2 ^ (-ΔΔ CT) și normalizate față de expresia GAPDH (C, D). Datele sunt medii ± SEM. ** p p ≤ 0,05, ns = nesemnificativ. n = 5 (test Mann - Whitney).

MDE-urile au redus expresia citokinelor legată de colită. Colita a fost indusă la șoarecii Balb/c folosind 5% DSS furnizat timp de 1 săptămână în apa de băut. Șoarecii Balb/c au fost tratați timp de 5 zile cu 0,5 mg/șoarece în 200 μL PBS (EXO +) sau PBS ca martor (EXO-). Nivelul de expresie al IL-6 și TNF-α în colonul șoarecilor tratați cu MDE sau PBS a fost analizat prin qRT-PCR Valorile au fost calculate utilizând metoda 2 ^ (-ΔΔ CT), normalizată față de expresia GAPDH ( A, B). Datele sunt medii ± SEM. * n C). Valorile au fost calculate utilizând metoda 2 ^ (-ΔΔ CT), normalizată în raport cu expresia TBP. Datele sunt medii ± SEM. * p t -test).