1 Departamentul de Științe Clinice, Colegiul de Medicină Veterinară, Universitatea de Stat din Carolina de Nord, Raleigh, NC 27606, SUA

efectele

2 Center for Marine Sciences and Technology, North Carolina State University, Morehead City, NC 28557, SUA

3 Departamentul de mediu și resurse naturale din Carolina de Nord, Divizia pentru pescuit marin, Morehead City, NC 28557, SUA

4 Karen Beasley Sea Turtle Rescue and Rehabilitation Center, Topsail Island, NC, 28445, SUA

Abstract

La mamifere, sângele lipemic provenit de la prelevarea de probe prea repede după hrănirea unui animal poate avea efecte substanțiale asupra valorilor biochimice. Valorile biochimice plasmatice la reptile pot fi afectate de specii, vârstă, anotimp și stare nutrițională. Cu toate acestea, starea de post nu este luată în considerare în mod obișnuit la prelevarea de sânge de reptilă. În această lucrare, am evaluat o recoltare de sânge postprandială de 2 ore la două specii de broaște țestoase marine pentru a investiga efectele hrănirii asupra valorilor biochimice hematologice și plasmatice. Hrănirea nu a avut efecte semnificative asupra valorilor hematologice la nici una dintre specii și nici nu a avut un efect asupra valorilor biochimiei plasmatice la broaștele țestoase marine Kemp. La țestoasele verzi postprandiale, proteinele totale, albumina, ALP, AST, ALT, amilaza și colesterolul au crescut semnificativ, iar clorura a scăzut semnificativ. Deși s-au observat modificări semnificative statistic, diferențele procentuale mediane între valorile pre- și postprandiale nu au depășit 10% pentru oricare dintre acești analiți și nu ar modifica probabil interpretarea clinică.

1. Introducere

Broaște țestoase verzi (Chelonia mydas) se găsesc în apele tropicale până la cele semitropicale din întreaga lume și sunt a doua cea mai abundentă broască țestoasă marină găsită în largul statelor unite din est [1, 2]. Țestoasele verzi juvenile găsite în apele de coastă se află într-o fază de tranziție de la o dietă mai carnivoră (creveți, melci și ctenofori) la o dietă în principal erbivoră (ierburi marine), care creează un statut fiziologic unic de la alte broaște țestoase marine [3]. Țestoasele marine Kemp’s ridley (Lepidochelys kempii) sunt cele mai mici și mai periclitate dintre toate țestoasele marine. Se găsesc în apele de-a lungul coastei de est a Americii de Nord, variind de la Mexic până la nord până la New York și Massachusetts [2]. Testoasele ridley ale lui Kemp sunt carnivore și oportuniste, hrănindu-se în principal cu crabi, moluște și pești [3]. Testoasele juvenile verzi și Kemp’s ridley folosesc ape de coastă puțin adânci pentru terenurile de hrănire, făcându-le susceptibile la o serie de traume induse de om (de exemplu, lovirea cu barca și interacțiunile de pescuit) și procesele de boli naturale (de exemplu, uluirea la rece). Sute de broaște țestoase juvenile sunt găsite moarte sau grav debilitate în fiecare an, multe fiind aduse în centrele de reabilitare pentru tratamente.

Hematologia și biochimia plasmei sunt valoroase pentru monitorizarea sănătății animalelor; totuși, factorii de mediu și procedurali pot avea efecte variabile asupra valorilor raportate. Recoltarea de sânge postprandială poate produce probe lipemice datorită creșterii trigliceridelor serice sub formă de chilomicroni. Mai mulți analiți biochimici se schimbă odată cu dieta, hrănirea și lipemia într-o gamă largă de specii, inclusiv mamifere [4-13], păsări [14-19], rechini [20] și reptile [21, 22]. Modificările observate ale valorilor biochimice au condus la recomandări cu privire la timpii de post de preflebotomie pentru multe specii [4, 6, 17, 19]. Cu toate acestea, puține recomandări au fost făcute pentru reptile.

La reptile, factorii de mediu și fiziologici, inclusiv sezonul, sexul, vârsta, mărimea și starea nutrițională, pot modifica valorile patologiei clinice [22-24]. La broaștele țestoase marine, s-au investigat valorile hematologice și ale biochimiei plasmatice pentru mai multe specii [21, 25-34], iar valorile biochimice s-au dovedit a fi influențate de sex, mărime, vârstă, starea de sănătate și hrănire [21, 31, 34 –37]. Cu toate acestea, există puține date cu privire la efectele prelevării de probe postprandiale asupra analiților chimici ai plasmei la broaștele țestoase marine, ceea ce duce la incertitudine în necesitatea probelor de sânge în repaus alimentar.

Înțelegerea dacă sau cum, hrănirea are impact asupra valorilor patologiei clinice la broaștele țestoase marine ar fi utilă atât în ​​mediul captiv, cât și în cea sălbatică, din cauza marii incertitudini în a ști când a fost hrănită ultima dată o broască țestoasă sălbatică și a dificultăților ocazionale de a încadra colectarea eșantionului în rutinele de gestionare și logistică. a unei facilități de reabilitare sau acvariu. Acest studiu a evaluat efectele eșantionării postprandiale asupra valorilor biochimice hematologice și plasmatice la broaștele de mare verzi și Kemp’s ridley.

2. Materiale și metode

2.1. Animale și mediu

Zece broaște țestoase marine verzi și zece broaște țestoase marine Kemp’s ridley în curs de reabilitare pentru diferite condiții la Centrul de salvare și reabilitare a țestoaselor marine Karen Beasley, Topsail Island, Carolina de Nord, au fost utilizate pentru acest studiu. Mediana și gama de greutăți, lungimile drepte ale carapacei (crestătura nucală până la crestătura pygal) și zilele de reabilitare sunt prezentate în Tabelul 1. Au fost incluse doar broaștele țestoase care au fost active, au mâncat bine și nu au urmat tratamente majore. Nu toate au fost considerate pregătite pentru eliberare, deoarece unele erau încă tratate pentru leziuni minore ale cochiliei (tratament topic) și pentru că se aflau în starea corporală dorită pentru eliberare. Țestoasele au fost adăpostite individual în rezervoare de plastic sau fibră de sticlă de dimensiuni variabile care conțin apă sărată filtrată. Rezervoarele mai mari au fost introduse într-un sistem comun de filtrare cu multiple forme de filtrare mecanică și biologică; tancurile mai mici se aflau într-o rutină zilnică de depozitare și umplere. Majoritatea broaștelor țestoase au rămas în tancuri interioare, dar puține au fost plasate în incinte temporare în aer liber în timpul după-amiezii pentru a facilita operațiunile zilnice ale facilității de reabilitare și pentru a asigura expunerea la lumina UV. Temperatura apei a variat între 25 ° C - 29 ° C.

) și Kemp’s ridley (

) broaște țestoase marine cercetate pentru efectele hrănirii asupra profilelor hematologice și biochimiei plasmei.

2.2. Eșantionare și hrănire
2.3. Prelucrarea și analiza sângelui

Pentru fiecare broască țestoasă, au fost făcute două frotiuri de sânge, două tuburi de hematocrit umplute, iar restul de sânge a fost plasat într-un flacon conic steril de 1,5 ml fără aditiv (Fisher Scientific Company, Pittsburgh, Pa, SUA) pe gheață umedă până la centrifugare. Toate probele au fost centrifugate în decurs de 67 de minute de la colectare. Tuburile de hematocrit au fost centrifugate la 3900 × g timp de 5 minute și s-a determinat volumul celulei ambalate (PCV). Solidele totale (TS) au fost determinate prin refractometru. Flacoanele conice au fost centrifugate la 1000 × g timp de 10 minute, iar plasma a fost recoltată. Probele de plasmă au fost prezentate împreună cu două frotiuri de sânge corespunzătoare la un laborator de diagnostic comercial (Antech Diagnostics, Memphis, Tenn, SUA) pentru analize biochimice și număr diferențiat de celule sanguine în decurs de o zi de la recoltare. Panourile de biochimie cu plasmă au fost efectuate pe un autoanalizator de chimie Hitachi 717 (Hitachi Instruments Inc., San Jose, California, SUA). Detalii despre metodologia de testare a biochimiei plasmei sunt rezumate în altă parte [39].

2.4. Analize statistice

Toate analizele au fost efectuate cu JMP 7 (Institutul SAS, Cary, NC, SUA). Mediana și intervalul au fost determinate pentru toate datele biochimice hematologice și plasmatice. Testul de rang semnat cu perechi potrivite Wilcoxon a fost utilizat pentru a compara diferențele dintre valorile preprandiale și postprandiale. Datele au fost apoi grupate după valori hematologice (PCV,% heterofile,% limfocite,% monocite,% eozinofile și% bazofile), enzime plasmatice (ALP, AST, ALT, CPK, amilază și lipază), indicatori metabolici, albumină, globuline, glucoză, BUN, creatinină, acid uric, colesterol, trigliceride și bilirubină totală) și ioni (sodiu, potasiu, clorură, calciu, fosfat anorganic și magneziu), iar tehnica Bonferroni secvențială a fost aplicată în fiecare grup pentru a reduce șansa de eroare de tip I [40]. A

), fosfataza alcalină (ALP;

), alanină aminotransferază (ALT;), aspartat aminotransferază (AST;

), amilaza () și colesterolul (). În plus, a existat o scădere semnificativă a clorurii (

). Dintre acești analiți care au fost statistic diferiți după hrănire, niciunul nu a avut o diferență mediană procentuală mai mare de 10% între probele pre- și postprandiale (Tabelul 4). Deși diferențele procentuale mediane au fost mai mari de 10% pentru globulină și creatin kinază (CK) la broaștele țestoase verzi și pentru lipază și acid uric la broaștele țestoase Kemp, variabilitatea datelor a fost ridicată, iar aceste diferențe nu au fost semnificative statistic.

). Sunt furnizate sisteme internaționale și unități convenționale (între paranteze).

). Sunt furnizate sisteme internaționale și unități convenționale (între paranteze).

) și Kemp’s ridley (

4. Discutie

Toate valorile hematologice și biochimice pentru ambele specii de broaște țestoase marine au fost în concordanță cu valorile raportate anterior pentru aceste specii [25, 30, 31, 35, 41-43], cu excepția fosfatului anorganic, AST și ALT la broaștele verzi. . Fosfatul anorganic a fost în intervalul superior sau ușor mai mare decât valorile raportate [25, 30, 35, 41, 43], ceea ce este probabil legat de dietă. Creșterea marcată în AST și ALT a majorității broaștelor țestoase verzi, în comparație cu valorile raportate, este un fenomen care a fost observat anterior la această populație (date nepublicate). Cauza de bază este incertă, dar poate fi, de asemenea, de origine alimentară legată de o dietă mai carnivoră în captivitate. Deoarece valorile postprandiale au fost comparate cu valorile preprandiale pentru fiecare broască țestoasă, valorile inițiale nu au fost un factor în analiză.

Nu s-au găsit diferențe semnificative între valorile hematologice preprandiale și postprandiale, fie pentru broasca țestoasă verde, fie pentru broasca țestoasă de mare Kemp’s ridley. Această constatare era de așteptat deoarece eșantionarea postprandială este legată de lipemie și interferența cu analiții care utilizează analize fotometrice [4, 5, 12, 44]. Valorile hematologice sunt obținute prin evaluarea microscopică directă a numărului și tipurilor de celule; prin urmare, nu ar fi de așteptat modificări datorate eșantionării postprandiale. Lipemia a fost, de asemenea, legată de hemoliza crescută datorită fragilității eritrocitelor [4]; cu toate acestea, hemoliza puțin sau deloc a fost observată în oricare dintre probele utilizate.

Broasca testoasa verde a aratat mai multe modificari postprandiale in valorile chimiei plasmei decat au fost observate la broasca testoasa de mare Kemp’s ridley. La broasca testoasa verde, proteinele totale, albumina, ALP, AST, ALT, colesterolul și amilaza au crescut semnificativ după hrănire, dar niciuna nu s-a schimbat într-un grad care ar duce probabil la modificări ale managementului medical. La broasca țestoasă marină Kemp, nu au existat diferențe semnificative între probele pre- și postprandiale. Diferențele dintre cele două specii s-ar putea referi la diferențele din dietele lor naturale. Testoasele ridley juvenile Kemp sunt carnivore, consumând în primul rând crustacee [3], în timp ce broaștele verzi juvenile trec de la un stil de viață carnivor la un stil de viață mai erbivor [3, 45]. Cu toate acestea, în cadrul reabilitării din studiul actual, ambele specii sunt hrănite în principal cu capelin cu niște calamari, iar multe râuri Kemp sunt hrănite și cu crab albastru cu coajă moale. Diferența observată s-ar putea datora apoi fiziologiei specializate a fiecărei specii pentru dieta lor naturală (adică, includerea vegetației în dieta broaștelor țestoase verzi de această dimensiune). Cercetarea efectelor dietelor naturale asupra profilelor biochimice plasmatice în diferite etape ale vieții este justificată.