Abstract

Laptele matern joacă un rol important în dezvoltarea icterului laptelui matern (BMJ) și este sursa majoră a factorului de creștere epidermică (EGF) pentru nou-născuți. Scopul acestui studiu a fost de a investiga dacă există o relație între nivelurile EGF în serul sugarului și în laptele mamelor care alăptează și BMJ. Au fost definite două grupuri: grupul de studiu (n = 30), nou-născuți care au fost urmăriți pentru BMJ fără nicio cauză patologică identificabilă; grup de control, nou-născuți sănătoși ale căror niveluri serice de bilirubină totală au fost

Obiectivul prezentului studiu a fost de a investiga dacă există o relație între nivelurile EGF în laptele matur al mamelor care alăptează și BMJ, cu implicațiile consecvente asupra dezvoltării hiperbilirubinemiei neonatale.

MATERIALE ȘI METODE

Pacienți.

Acest studiu prospectiv a fost realizat în perioada ianuarie 2007 - iunie 2008 în secțiile de neonatologie ale spitalului universitar Dokuz Eylul. În total, 60 de sugari au fost admiși la acest studiu. Protocolul de studiu a fost aprobat de către Comitetul de investigație clinică umană al Facultății de Medicină a Universității Dokuz Eylul și s-a obținut consimțământul informat de la părinții tuturor sugarilor pentru prelevarea de sânge a copilului lor.

Probele de ser pentru sugari.

Eșantionul de sânge pentru măsurarea EGF în grupul de studiu a fost obținut atunci când sângele a fost extras de la sugar pentru alte teste necesare pentru evaluarea cauzei icterului. Grupurile de control au fost un eșantion convenabil de sugari de vârstă similară (între 3 și 4 săptămâni) care au necesitat admiterea la unitatea noastră de neonatologie din motive de control al sănătății sau din alte motive, cum ar fi screening-ul fenilcetonuriei. Probele de ser pentru sugari au fost colectate în tuburi sterile, plasate pe gheață și trimise imediat la laborator. După centrifugarea sângelui la 3000 × g timp de 30 min la 4 ° C, lichidul supernatant plasmatic a fost separat și depozitat la -80 ° C până când a fost analizat în continuare (25).

Probele de lapte uman.

Probele de lapte matern au fost colectate între a treia și a patra săptămână postpartum. Colectarea a fost standardizată pentru a reduce prejudecata și variabilitatea diurnă potențială în măsurătorile EGF. În timp ce probele de sânge pentru studiile bilirubinei serice au fost obținute în mod obișnuit la 0700 și 1600 h, iar probele de lapte au fost obținute din cele două grupuri în decurs de 1 oră de la prima hrănire dimineața, definite între 0800 și, respectiv, 0900 h. Toate mamele au putut furniza lapte la fiecare punct de prelevare. O alicotă de 5 ml a fost luată folosind o pompă de sân manuală (Avent, Suffolk, Marea Britanie). Probele de lapte uman au fost colectate în tuburi sterile, plasate pe gheață și trimise imediat la laborator. Probele au fost centrifugate la 3.750 × g timp de 2 minute pentru a îndepărta grăsimea și resturile celulare. Alicote supernatante de 1,5 ml au fost depozitate la -80 ° C pentru analiza EGF (26).

Măsurarea EGF în laptele și sângele uman.

Șaizeci de probe de lapte au fost diluate la 1: 400. Măsurătorile EGF în laptele uman și serul pentru sugari au fost obținute folosind un kit ELISA (Biosource International Inc., Belgia). Probele de lapte diluat și ser infantil (200 μL) au fost incubate cu anticorp EGF monoclonal uman acoperit pe o placă cu 96 de godeuri la temperatura camerei timp de 2 ore. După mai multe spălări, anticorpul EGF policlonal conjugat cu peroxidaza de hrean (200 μL) a fost adăugat la placă și a reacționat timp de 1 oră. Probele au fost apoi incubate cu 200 ul substraturi (tetrametilbenzidină: H2O2 = 1: 1) timp de 20 de minute după mai multe spălări. Reacția a fost încheiată cu 50 μL acid sulfuric (1 mol/L). Concentrațiile EGF au fost determinate la 450 nm și corectate la 540 nm folosind un cititor ELISA (Multiskan RC; Labsystems, Helsinki, Finlanda) (26).

analize statistice.

Greutatea medie și vârsta gestațională a grupurilor au fost comparate cu analiza unică a varianței. Mann-Whitney U testele au fost folosite pentru a determina dacă a existat o diferență în bilirubina totală serică, nivelurile EGF din sânge și nivelurile EGF din lapte. A p valoare

REZULTATE

Sugarii din cele două grupuri, martorul și studiul, au fost comparate în funcție de caracteristicile lor antropometrice, clinice și peripartale (Tabelul 1). Dintre cei 30 de sugari icterizați din grupul de studiu, 13 (43,3%) erau fete și 17 (56,7%) erau băieți. Vârsta gestațională medie și greutatea nou-născuților din grupul de studiu au fost de 40 ± 0,9 săptămâni și, respectiv, de 3008 ± 325 g. Nivelul lor mediu de bilirubină a fost de 15,01 ± 2 mg/dL. Când s-a reluat alăptarea, concentrațiile serice de bilirubină au crescut la unii sugari, dar concentrațiile au scăzut în intervalul normal (8,55-12,2 mM) sau icterul a dispărut vizual pentru toți sugarii până la vârsta de 4 luni. În grupul de control, 12 (40%) au fost băieți și 18 (60%) au fost fete. Vârsta gestațională medie și greutatea nou-născuților din grupul de control au fost de 39 ± 1,6 săptămâni și respectiv 3168 ± 298 g, iar nivelul lor mediu total de bilirubină serică a fost de 5,9 ± 1,6 mg/dL. Sugari din ambele grupuri (grupul de studiu, n = 30 și grupul de control, n = 30) au fost similare în ceea ce privește sexul, calea nașterii, greutatea medie la naștere, vârsta gestațională și vârsta la momentul studiului (Tabelul 1).

Nivelurile de EGF din ser și lapte ale grupului de studiu au fost mai mari decât grupurile de control (Tabelul 2). A existat o relație pozitivă între nivelurile serice de bilirubină totală și nivelurile de EGF din lapte și sânge în grupul de studiu (t = 4,08, p = 0,001, FIG. 1 și t = 3,39, p = 0,002, Fig. 2). În plus, a existat o relație pozitivă între nivelurile de EGF din lapte și serul sugarului (t = 3,37, p = 0,002, Fig. 3).

icterul

Relația pozitivă între nivelurile serice de bilirubină totală și nivelurile serice de EGF în grupul de studiu (R 2 liniar = 0,373).

Relația pozitivă între nivelurile serice totale de bilirubină și nivelurile EGF din lapte în grupul de studiu (R 2 liniar = 0,291).

Relația pozitivă între laptele și nivelurile serice de EGF din sugar în grupul de studiu (R 2 liniar = 0,289).

DISCUŢIE

În acest studiu, prezentăm dovezi noi care sugerează că funcția de creștere a glandelor mamare, care influențează semnificativ furnizarea de lapte a FEG pentru alăptare, poate afecta dezvoltarea icterului la nou-născuți. Pentru a clarifica rolul factorilor de creștere în laptele uman în adaptarea gastro-intestinală a fătului și a nou-născutului, efectele acestor fluide și factori multipli de creștere au fost investigate într-o linie de celule intestinale subțiri fetale umane (22). Sugarii alăptați au niveluri mai ridicate de bilirubină decât sugarii hrăniți cu formule, posibil din cauza variațiilor în compoziția laptelui matern. În mod interesant, în studiul nostru, gradul de BMJ a fost asociat cu niveluri crescute de EGF în lapte.

În concluzie, concentrațiile de EGF au fost mai mari în laptele matern al mamelor ai căror sugari aveau BMJ. Ipoteza noastră a fost că aportul enteral de EGF ar putea crește dezvoltarea și incidența BMJ. Gradul de BMJ a fost asociat cu niveluri crescute de EGF în lapte. O mai bună înțelegere a proceselor moleculare care stau la baza hiperbilirubinemiei mediate de EGF ar putea constitui baza viitoarelor strategii terapeutice pentru tratamentul BMJ.

Referințe

Schneider AP 1986 Icterul laptelui matern la nou-născut o entitate reală. JAMA 255: 3270-3274

DeAngelis C, Sargent J, Chun MK 1980 Icter de lapte matern. Wis Med J. 79: 40–42

Osborn LM, Reiff MI, Bolus R 1984 Icter la nou-născutul pe termen lung. Pediatrie 73: 520-525

Saigal S, Lunyk O, Bennett KJ, Patterson MC 1982 Nivelurile serice de bilirubină la sugarii hrăniți cu sân și cu formulă în primele 5 zile de viață. Can Med Assoc J. 127: 985–989

Maisels MJ, Gifford K 1986 Niveluri normale de bilirubină serică la nou-născut și efectul alăptării. Pediatrie 78: 837–843

Narayanan I, Gupta A, Mandal RN, Chugh RK, Singh S 1987 Hrănirea sugarului și icterul neonatal precoce. Indian J Pediatr 54: 257–260

Kivlahan C, James EJ 1984 Istoria naturală a icterului neonatal. Pediatrie 74: 364-370

Stiehm ER, Ryan J 1965 Raport despre opt cazuri și efectul alăptării asupra incidenței și severității hiperbilirubinemiei inexplicabile. Sunt J Dis Copil 109: 212–216

Gartner LM, Arias IM 1966 Studii de icter neonatal prelungit la sugarul alăptat. J Pediatr 68: 54–66

Cole AP, Hargreaves T 1972 Inhibitori de conjugare și hiperbilirubinemie neonatală precoce. Copilul Arch Dis 47: 415–418

Arthur LJ, Bevan BR, Holton JB 1966 Hiperbilirubinemia neonatală și alăptarea. Dev Med Child Neurol 8: 279-284

Gourley GR 1998 Fiziopatologia icterului din laptele matern. În: Polin RA, Fox WW (eds) Fiziologie fetală și neonatală, Ed. A II-a. WB Saunders Company, Philadelphia pp 1499-1505

Alonso EM, Whitington PF, Whitington SH, Rivard VA, Date G 1991 Circulația enterohepatică a bilirubinei neconjugate la șobolani hrăniți cu lapte uman. J Pediatr 118: 425–430

Arias IM, Gartner LM, Seifter S, Furman M 1964 Hiperbilirubinemie neonatală prelungită asociată cu alăptarea și un steroid, pregnane-3a, 20 b-diol, în laptele matern care inhibă formarea glucuronidei in vitro. J Clin Invest 43: 2037–2047

Koldovsky O Funcții de absorbție digestivă la făt, sugari și copii. În: Polin RA, Fox WW (eds) Fiziologie fetală și neonatală. WB Saunders, Philadelphia 1401–1418

Polk DB 1998 Factorul de creștere epidermică stimulat de receptor migrația celulelor epiteliale intestinale necesită activitate de fosfolipază C. Gastroenterologie 114: 493-502

Carpenter G, Stoschech CM, Preston YA, De Larco JE 1983 Anticorpii împotriva receptorului factorului de creștere epidermică blochează activitățile biologice ale factorului de creștere al sarcomului. Proc Natl Acad Sci SUA 80: 5627–5630

Todaro GJ, Fryling C, De Larco JE 1980 Transformarea factorilor de creștere produși de anumite celule tumorale umane: polipeptide care interacționează cu receptorii factorilor de creștere epidermici. Proc Natl Acad Sci SUA 77: 5258-5262

Rao RK, Thornburg W, Korc M, Matrisian L, Magun BE, Koldovsky O 1986 Prelucrarea factorului de creștere epidermică prin alăptarea și celulele intestinale de șobolan adult. Sunt J Physiol 250: G850 - G855

Thompson JF, Van Den Berg M, Stokkers PC 1994 Reglarea dezvoltării receptorului kinazei factorului de creștere epidermic în intestinul șobolanului. Gastroenterologie 107: 1278–1287

Toyoda S, Lee PC, Lebenthal E 1986 Interacțiunea factorului de creștere epidermică cu locurile de legare specifice ale enterocitelor izolate din intestinul subțire de șobolan în timpul dezvoltării. Biochim Biophys Acta 886: 295-301

Dvorak B, Fituch CC, Williams CS, Hurst NM, Schanler RJ 2004 Concentrațiile factorului de creștere epidermică și transformarea factorului de creștere-alfa în laptele prematur. Adv Exp Med Biol 554: 407-409

Warner BB, Ryan AL, Seeger K, Leonard AC, Erwin CR, Warner BW 2007 Ontogenia factorului de creștere epidermică salivară și a enterocolitei necrozante. J Pediatr 150: 358–363

Grimes J, Schaudies RP, Davis D, Williams CS, Curry BJ, Walker MD, Koldovsky O 1992. Proc Soc Exp Biol Med 199: 75-80

Radfar M, Larijani B, Hadjibabaie M, Rajabipour B, Mojtahedi A, Abdollahi M 2005 Efectele pentoxifilinei asupra stresului oxidativ și a nivelurilor de EGF și NO în sângele pacienților cu diabet zaharat de tip 2: un studiu clinic randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo. Biomed Pharmacother 59: 302–306

Chang CJ, Chao JC 2002 Efectul laptelui uman și al factorului de creștere epidermică asupra creșterii celulelor Caco-2 intestinale umane. J Pediatr Gastroenterol Nutr 34: 394-401

Brown KD, Blakeley DM 1983 Activitate de promovare a creșterii celulare în secrețiile mamare de capră, vacă și oaie. Fr Vet J. 139: 68–78

Cera K, Mahan DC, Simmen FA 1987 Activitatea care promovează creșterea in vitro a secrețiilor mamare porcine: caracterizarea inițială și relația cu factorii de creștere peptidici cunoscuți. J Anim Sci 65: 1149–1159

Britton JR, George-Nascimento C, Udall JN, Koldovsky O 1989 Hidroliza minimă a factorului de creștere epidermică de către fluidul gastric al sugarilor prematuri. Bun 30: 327–332

Berseth CL 1987 Îmbunătățirea creșterii intestinale la șobolanii neonatali de către factorul de creștere epidermică din lapte. Sunt J Physiol 253: G662 - G665

Opleta-Madsen K, Meddings JB, Gall DG 1991 Factorul de creștere epidermică și dezvoltarea postnatală a transportului intestinal și a structurii membranei. Pediatru Res 30: 342–350

Thornburg W, Matrisian L, Magun B, Koldovsky O 1984 Absorbția gastro-intestinală a factorului de creștere epidermică la șobolanii care alăptează. Sunt J Physiol 246: G80 - G85

Kong WY, Koldovsky O, Rao RK 1992 Aspectul factorului de creștere epidermic exogen la nivelul ficatului, bilei și lumenului intestinal al șobolanilor care alăptează. Gastroenterologie 102: 661–667

Herrington MK, Adrian TE 1998 Efectele factorului de creștere epidermică, colecistokinina și secretina asupra creșterii tractului digestiv la cobai neonatal. Biol Neonate 73: 129–136

Shinohara H, Williams CS, Yakabe T, Koldovsky O 1996 Factorul de creștere epidermică întârzie golirea gastrică și tranzitul intestinal subțire la șobolanii care alăptează. Pediatru Res 39: 281-286