Termeni asociați:

  • Agar
  • Enterobacteriaceae
  • Shigella
  • Agar de ciocolată
  • Salmonella
  • Bacterii Gram-negative
  • Bacterie
  • Agent infecțios
  • Escherichia coli

Descărcați în format PDF

macconkey

Despre această pagină

Medii pentru Laboratorul Clinic de Microbiologie

Medii selective și diferențiale

Agarul MacConkey selectează nu numai organismele gram-negative prin inhibarea organismelor gram-pozitive și drojdie, ci diferențiază și organismele gram-negative prin fermentarea lactozei. Fermentii de lactoză se vor pata de roz, în timp ce fermentii de non-lactoză vor fi colonii limpezi. Mass-media are, de asemenea, avantajul adăugat de a inhiba roiul Proteus.

Eozina-albastru de metilen este un alt mediu care crește în mod electiv organismele Gram-negative, inhibând în același timp organismele Gram-pozitive și unele drojdii prin utilizarea coloranților toxici. Bacteriile enterice vor varia ca aspect pe acest mediu, în funcție de capacitatea lor de a fermenta lactoza și fermentarea zaharozei. Escherichia coli va avea un luciu verde metalic.

Mediile suplimentare selective pentru Gram negative, dar special concepute pentru a diferenția agenții patogeni ai scaunului includ agar Hektoen enteric (HE) care conține săruri biliare. În plus față de selectarea organismelor gram-negative, media permite, de asemenea, diferențierea prezumtivă a Salmonella și Shigella de alte organisme Gram-negative, cum ar fi E. coli. Escherichia coli și alți fermenti ai lactozei vor produce colonii galbene sau portocalii. Fermentatorii fără lactoză, inclusiv Shigella, produc colonii verzi, în timp ce Salmonella apare ca colonii negre datorită producției de hidrogen sulfurat. Alte organisme produc sulfură de hidrogen și apar ca colonii negre pe agar HE, inclusiv Citrobacter spp.

EXAMENUL MICROBIOLOGIC AL ALIMENTELOR

W.F. Harrigan, Margaret E. McCance și Laboratory Methods in Microbiology, 1966

1 Detectarea și enumerarea bacteriilor indicator

(a) Organisme coliforme

Bulionul MacConkey și agarul MacConkey nu sunt medii satisfăcătoare pentru detectarea și enumerarea organismelor coliforme din alimente. Una dintre cele mai fiabile metode folosește agarul biliar roșu violet în numărul de plăci turnate.

Procedură

Pregătiți seturi duplicate de farfurii folosind cantități de 1 ml din gama aleasă de diluții ale alimentelor. Adăugați la fiecare farfurie 15 ml de agar biliar roșu violet, topit și răcit la 45 ° C, amestecați bine și lăsați să se stabilească. În cele din urmă, acoperiți cu încă 5 ml de agar biliar roșu violet. După ce lăsați să se solidifice, inversați plăcile și incubați la 35 ° C timp de 24 de ore. După incubare, numărați numărul de colonii roșu închis. În mod normal, coloniile coliforme tipice vor avea diametrul de 0,5 mm sau mai mult și prezintă dovezi ale precipitațiilor sărurilor biliare în mediul care înconjoară imediat coloniile, dar, desigur, supraaglomerarea coloniilor va determina o reducere a dimensiunii. În cazul alimentelor care conțin carbohidrați, în afară de lactoză, mediile la care s-au adăugat diluții scăzute ale alimentelor pot da rezultate anormale. Cu plăci cu diluții de 10 −2 sau mai mici, este, prin urmare, necesar să se confirme coloniile coliforme prezumtive fie ca coliforme, ridicându-le și inoculând bulion de lactoză sau bulion MacConkey și incubând la 35 ° C sau ca E. coli prin testul Eijkman (vezi pagina 94).

Procedură alternativă

Dacă se așteaptă prezența unui număr foarte mic de coliformi într-o probă alimentară, se poate efectua un număr de tuburi de diluare, dar se recomandă utilizarea bulionului de lauril triptoză, mai degrabă decât bulionului MacConkey. Pipetați aseptic 1 ml din fiecare dintre diluțiile preparate ale alimentelor în fiecare dintre cele cinci tuburi de bulion de lauril triptoză. Se incubează la 35 ° C. Examinați după 24 și 48 de ore pentru producerea de acid și gaze. Producția de acid este determinată de adăugarea unui indicator de pH în tuburi după incubare. Un pozitiv prezumtiv este înregistrat dacă un tub arată producția de acid și fie suficient gaz pentru a umple concavitatea tubului Durham, fie efervescență atunci când partea tubului de testare este lovită. În testele de rutină, producția de gaze este de obicei considerată ca indicând un prezumtiv pozitiv fără a fi nevoie de testarea producției de acid. Tuburile pozitive prezumtive la diluții mici (până la 10 -2) trebuie confirmate prin subcultivare în bulion de lauril triptoză și incubare la 35 ° C. Pentru numărul de E. coli, subcultura tuburilor prezumtive pozitive în bulion de lauril triptoză și se incubează la 44 ± 0 · 25 ° C. Numărul cel mai probabil de coliformi sau E. coli poate fi calculat din tabelele de probabilitate (a se vedea apendicele).

(b) Enterococi

Enterococul este un organism indicator util pentru unele alimente deoarece, comparativ cu E. coli, este mai rezistent la îngheț, pH scăzut și tratament termic moderat. Astfel, enterococii pot fi frecvent detectați în alimente congelate, sucuri de fructe sau alimente care au primit un tratament termic superficial, chiar și atunci când E. coli a fost ucis de condițiile inimice. Enterococii sunt considerați aici incluzând Strep. faecalis și Strep. faecium (și formele varietale Strep. faecalis var. liquefaciens, Strep. faecalis var. zymogenes) și Strep. duran dar excluzând Strep. bovis și Strep. echinus.

Procedură

Pipetați cantități de 1 ml din gama aleasă de diluții într-un set de cutii Petri. Adăugați pe fiecare farfurie 15 ml agar de tetrazolium maltoză azoză topită la 45 ° C, amestecați bine cu inoculul și lăsați să se stabilească. Se incubează la 35 ° C timp de 48 de ore. După incubare, numărați numărul de colonii care sunt roșu închis sau au o zonă centrală roșie sau roz (dacă este posibil, selectând plăci cu între 30 și 300 de colonii). Calculați și înregistrați numărul de enterococi pe gram de alimente.

Procedură alternativă

Dacă se așteaptă prezența unui număr foarte mic de enterococi într-o probă alimentară, se poate efectua un număr de tuburi de diluare, utilizând bulion de azoză de maltoză ca mediu selectiv. Pipetați aseptic 1 ml din fiecare dintre diluțiile preparate în fiecare dintre cele cinci tuburi de bulion de azoză de maltoză. Se incubează la 35 ° C timp de 48 de ore. Examinați tuburile după incubare pentru producerea acidului, ceea ce indică enterococi. Calculați cel mai probabil număr de enterococi utilizând tabele de probabilitate (a se vedea anexa).