Jie Meng

1 Departamentul de Ortopedie, Spitalul Afiliat al Universității Hebei, Baoding, China

efectelor

Taoping Chen

1 Departamentul de Ortopedie, Spitalul Afiliat al Universității Hebei, Baoding, China

Yu Zhao

2 Universitatea Hebei, Baoding, China

Sucai Lu

1 Departamentul de Ortopedie, Spitalul Afiliat al Universității Hebei, Baoding, China

Huiling Yu

1 Departamentul de Ortopedie, Spitalul Afiliat al Universității Hebei, Baoding, China

Ying Chang

1 Departamentul de Ortopedie, Spitalul Afiliat al Universității Hebei, Baoding, China

Dalei Chen

1 Departamentul de Ortopedie, Spitalul Afiliat al Universității Hebei, Baoding, China

Abstract

Introducere

Acest studiu își propune să evalueze efectele gastro-protectoare ale uleiului de cocos virgin (VCO) asupra diferitelor modele de ulcer în comparație cu medicamentul standard (omeprazol).

Material si metode

Trei grupuri de șobolani (6 șobolani per grup pentru fiecare model de ulcer) au fost pre-tratați cu apă distilată pentru grupul martor negativ, 30 mg/kg de omeprazol pentru grupul martor pozitiv și VCO (2 ml per șobolan) pentru grupul de tratament . Animalele au fost pretratate timp de 7 zile, iar ulcerele au fost induse cu stres de reținere la rece, piroxicam, etanol și ligare pilor. În ziua a opta, animalele au fost sacrificate și scorurile ulcerului au fost determinate pe baza evaluării macroscopice. Volumul gastric, pH-ul, aciditatea totală și conținutul de mucus au fost măsurate în modelul ligat cu pilor. Nivelurile de antioxidanți au fost determinate din omogenatele de țesut gastric.

Rezultate

Ulei de cocos virgin în mod semnificativ (p Cuvinte cheie: antioxidant, gastro-protector, ulcer peptic, tratament, ulei de cocos virgin

Introducere

Ulcerul peptic este o boală multifactorială și cronică [1]. Până în prezent, ulcerele gastrice și duodenale sunt dominante printre bolile care afectează un număr considerabil de oameni din populația lumii [2]. Pe baza unei revizuiri sistematice, s-a subliniat că rata anuală de incidență a ulcerului peptic a fost estimată la 0,10-0,19% pentru cazurile diagnosticate de medic și 0,03-0,17% pentru cele înregistrate la data spitalizării cu prognosticul strâns asociat cu Helicobacter. infecție pylori [3].

În general, ulcerația are loc din cauza întreruperilor echilibrului gastric normal, care este cauzată de rezistența mucoasă crescută sau diminuată [4]. Mai mult, unii dintre factorii predispozanți asociați cu dezvoltarea bolii includ obiceiuri alimentare inadecvate, cum ar fi fumatul sau alcoolul, durata foametei, natura alimentelor ingerate, infecția persistentă cu H. pylori, utilizarea acidului acetilsalicilic (ASA) și nesteroidienii medicamente antiinflamatoare (AINS), perturbarea barierei mucoasei din cauza stresului, sindrom Zollinger-Ellison și, în cele din urmă, factori genetici, ereditari, care duc la șanse mai mari de a dobândi ulcere duodenale pentru persoanele cu antecedente familiale ale bolii, în afară de a avea sânge tip O grup [5]. Tratamentele pentru ulcerul peptic care sunt utilizate pe scară largă în practica clinică sunt antagoniști muscarinici (pirenzepină), antiacide (hidroxid de aluminiu și trisilicat de magneziu), antagoniști ai receptorilor histaminei-H-2 (cimetidină și ranitidină), inhibitori ai pompei de protoni (omeprazol și lansoprazol) și antimicrobieni agenți pentru eradicarea H. pylori (amoxicilină și claritromicină) [6].

Scopurile actuale ale tratamentului cu ulcer peptic sunt ameliorarea durerii, vindecarea și prevenirea reapariției ulcerului. Farmacologia fiecărei categorii de medicamente este diferită. Cu toate acestea, mecanismul comun sau regula care se aplică tuturor categoriilor este acela că toate acționează în general pentru a inhiba secreția de acid gastric prin blocarea H + K + -ATPazei gastrice (inhibitori ai pompei de protoni) [7], blocând receptorii H-2 (H ). -2 antagonist al receptorilor) sau prin stimularea secreției de mucus și bicarbonat pentru a modifica fluxul sanguin al mucoasei [8].

Cu toate acestea, nu există o recuperare completă pentru ulcerul peptic utilizând abordările farmacologice actuale. În afară de aceasta, multe efecte adverse au fost abordate în legătură cu utilizarea continuă a medicamentelor, cum ar fi aritmia, hipomagneziemia, hipersensibilitatea, impotența și ginecomastia [9]. În plus, unele dintre aceste medicamente sunt costisitoare [10] și prezintă un risc ridicat de a provoca cancer gastric și boli în stadiu ulterior [11]. Astfel, această enigmă a încurajat cercetătorii să identifice un nou tratament sigur și eficient terapeutic pentru a eradica complet problema. Din această perspectivă, plantele câștigă importanță deoarece sunt principalii factori care contribuie la molecule bioactive cu proprietăți anti-ulcerogene [12]. Dintre plantele medicinale, uleiurile derivate din speciile de plante câștigă, de asemenea, o popularitate largă pentru proprietățile lor terapeutice.

Recent, mai multe studii au raportat eficacitatea uleiului de cocos virgin (VCO) în tratarea și prevenirea semnificativă a bolii ulcerului peptic în comparație cu uleiul de cocos comercial, cunoscut și sub numele de ulei de copra (CO) [13]. Diferențele majore dintre VCO și CO se datorează metodei de extracție, ceea ce duce la diferențe în beneficiile lor. Uleiul de nucă de cocos virgin este clasificat ca ulei extras din boabe de nucă de cocos matură proaspăt-uscată (Cocos nucifera L.) utilizând tehnica enzimatică și/sau de fermentare fără a implica încălzirea directă, în timp ce uleiul de copra este produs prin procesul de încălzire directă [14]. Deoarece procesul de producție nu implică căldură, VCO nu trece prin nicio transformare și, astfel, păstrează componentele benefice, cum ar fi vitaminele, antioxidanții, componentul acidului gras acidul lauric și alți acizi grași cu lanț mediu (MCFA) care ajută la digestie [15] . Mai mult, VCO este un aliment comestibil care poate fi inclus în dieta noastră și luat direct fără prescripție medicală de la un medic, fără a provoca efecte secundare.

Deși studiile au raportat efectele VCO asupra ulcerului peptic [13], nu a existat încă niciun studiu care să elucideze mecanismul implicat în inhibarea ulcerării. Prezentul studiu își propune să dezvăluie posibilul mecanism implicat în acțiunea VCO în modelele ulcerative.

Material si metode

Prepararea uleiului de cocos virgin

Tehnica temperaturii scăzute a fost aplicată în prepararea VCO. Endospermul solid al nucii de cocos proaspete maturate a fost zdrobit și transformat într-o suspensie vâscoasă [16]. Ulterior a fost stors mecanic printr-o cârpă de brânză pentru a colecta laptele de cocos. Laptele a fost păstrat în frigider și congelat timp de 48 de ore, apoi încălzit la 500 ° C folosind un cuptor cu termostat. După procesul de încălzire, uleiul colectat a fost filtrat folosind o cârpă de brânză. Randamentul total a fost de aproximativ 40-50%.

Droguri și substanțe chimice

Toate substanțele chimice și solvenții au fost de calitate analitică și au inclus omeprazol (Sigma Aldrich, St. Louis, MD, SUA), etanol (Merck, Marea Britanie), fenolftaleină (Merck, Marea Britanie), albastru alcian (Merck, Marea Britanie), clorură de magneziu (Merck, UK), zaharoză (Merck, UK) și citrat de sodiu (Merck, UK).

Pregătirea animalelor

Un total de 72 de șobolani Wistar (în vârstă de 40 de zile), cu o greutate de 200-250 g, au fost obținuți de la centrul nostru de hrănire a animalelor. Toate studiile efectuate au fost aprobate de comitetul etic și de îngrijire a animalelor, în conformitate cu protocoalele utilizate (nr. ACUC: HDFY-LL-2016-19). Animalele au fost ținute la temperatura camerei (25-28 ° C) timp de minimum șapte zile pentru aclimatizarea la condițiile camerei înainte de procedura experimentală. Animalele au fost adăpostite în grupuri de șase animale pe cușcă standard pentru fiecare grup experimental în condiții de mediu standard (25 ± 3 ° C), cu 12 ore de întuneric/12 ore de cicluri de lumină, și hrană și apă ad libitum [17].

Studii anti-ulcer și citoprotectoare

Șobolanii experimentali au fost împărțiți în trei grupe formate din 6 șobolani per grup. Șobolanii din fiecare grup au fost pre-tratați oral cu apă distilată (10 mg/kg) pentru grupul martor negativ, omeprazol (30 mg/kg) [13, 18] pentru grupul martor pozitiv și VCO (2 ml per șobolan) [ 19] pentru grupul de tratament timp de șapte zile și postit 24 de ore în a opta zi înainte de procedura de inducere a ulcerului. Gruparea a fost aceeași pentru fiecare model de inducție a ulcerului.

Inducerea ulcerului gastric

Ulcerații gastrice induse de stres prin reținere la rece

În ziua 8, șobolanii au fost paralizați prin legarea membrelor anterioare și posterioare pe o scândură plană de lemn și transferați în frigider (4-6 ° C). După două ore, șobolanii au fost sacrificați prin dislocare cervicală. Stomacul a fost incizat de-a lungul curburii mai mari și lumenul a fost clătit cu ser fiziologic normal. Scorarea ulcerului a fost efectuată pe baza metodei descrise de Minano și colab. [20]. Apoi, partea fundică a stomacului a fost omogenizată (5%) și centrifugată. Supernatantul dobândit a fost utilizat pentru a studia activitatea folosind un test de enzime antioxidante. Procentul de inhibiție a fost calculat conform următoarei formule [21]:% de inhibiție = (IU pentru control (negativ) - IU pentru grupul de tratament)/IU pentru control (negativ).

Ulcerații gastrice induse de etanol

Șobolanii experimentali ai fiecărui grup au fost tratați în prealabil, după cum sa explicat anterior timp de 7 zile și au postit 24 de ore în a opta zi. În ziua 8, ulcerarea a fost indusă la animale prin administrarea orală de etanol absolut (1 ml/200 g) [22, 23]. După 1 oră de inducție a ulcerului, animalele au fost sacrificate prin dislocare cervicală. Stomacul a fost disecat pentru examinarea macroscopică a ulcerelor. Scorul pentru ulcer a fost determinat folosind o metodă descrisă într-un studiu anterior.

Model de ulcer indus de piroxicam

Un alt set de șobolani au fost pre-tratați timp de 7 zile așa cum s-a descris mai devreme. Animalele au fost apoi postite 24 de ore în a opta zi. În ziua 8, piroxicam (30 mg/kg) a fost administrat șobolanilor [4]. După 6 ore de inducție a piroxicamului, animalele au fost sacrificate prin dislocare cervicală. Șobolanii au fost disecați și stomacul lor a fost tăiat de-a lungul curburii mai mari. Lumenul gastric a fost clătit cu ser fiziologic normal și examinat. Scorarea ulcerului a fost efectuată folosind o metodă descrisă într-un studiu anterior.

Șobolani legați de pilor

Animalele au fost tratate în prealabil pentru o perioadă de șapte zile, așa cum s-a descris mai devreme, iar șobolanii au fost posti 24 de ore în a opta zi pentru a se asigura golirea completă a stomacului și apa a fost permisă ad libitum. În ziua 8, animalele au fost anesteziate prin injecție intraperitoneală de pentobarbiton sodic (35 mg/kg) [24, 25]. După anestezie, abdomenul a fost deschis și ligarea pilorului a fost efectuată fără a provoca vătămări ale sângelui. Apoi, stomacul a fost înlocuit cu atenție și peretele abdominal a fost închis în două straturi cu suturi întrerupte, urmate de un tampon umed de ser fiziologic normal. După 4 ore, fiecare stomac a fost disecat și tăiat de-a lungul curburii mai mari [26, 27]. Indicele ulcerului (IU) a fost determinat utilizând scalarea scorului Minano și colab. [20].

Măsurarea volumului sucului gastric, a acidității totale, a pH-ului și a conținutului de mucus gastric

După disecție și îndepărtarea stomacului, s-a colectat suc gastric. Decât a fost centrifugat timp de 5 minute la 3000 × g, în timp ce supernatantul a fost separat și utilizat pentru a analiza pH-ul, volumul de suc gastric și aciditatea totală. Acidul total a fost estimat prin titrarea împotriva hidroxidului de sodiu 0,01 N folosind reactivul Topfer ca indicator pentru a obține aciditatea totală, exprimată ca mEq/l [28]. Conținutul de mucus gastric a fost determinat folosind metoda descrisă de Corne și colab. [29] cu modificare. Stomacul a fost îndepărtat, deschis de-a lungul curburii mai mici și clătit cu soluție salină rece.

Analiză

Testul enzimei antioxidante

Nivelurile de superoxid dismutază (SOD), glutation reductază (GR), glutation peroxidază (GP), catalază (CAT), malondialdehidă (MDA) și nitrit au fost determinate folosind un kit ELISA disponibil în comerț (Cayman, SUA) [30].

Determinarea sintezei prostaglandinei E2

Nivelul de prostaglandină a fost determinat folosind setul de prostaglandină E2 (PGE2) Monoclonal Enzyme Immunoassay (ELISA) (R&D Systems, SUA) [31].

analize statistice

Tabelul III

Efectele anti-ulcerare ale uleiului de cocos virgin (VCO) asupra șobolanilor induși de piroxicam

Tratament Indicele ulcerului Procentul de inhibare (%)
Control negativ3,67 ± 0,21-
Control pozitiv (omeprazol - 30 mg/kg)1,50 ± 0,2259
VCO (10 ml/kg)1,00 ± 0,2672.7

Valorile sunt exprimate ca medie ± SEM; n = 6.

Efectele uleiului de cocos virgin asupra modelului de ulcer indus de ligatura pilorului

Tabelul V

Efectele anti-ulcerare ale uleiului de cocos virgin (VCO) asupra testelor antioxidante

Tratament GP [proteină U/mg] SOD [proteină U/mg] MDA [proteină U/mg] CAT [proteină U/mg] GSH [proteină U/mg] Nitrit [nmol/g]
Control negativ0,97 ± 0,124,15 ± 0,300,70 ± 0,0411,53 ± 0,354,62 ± 0,1778,60 ± 2,53
Control pozitiv (omeprazol - 30 mg/kg)0,62 ± 0,07 *1,85 ± 0,1 *** 0,32 ± 0,02 *** 7,00 ± 0,12 *** 7,13 ± 0,18 *** 141 ± 4,21 ***
VCO (10 mg/kg)0,20 ± 0,061,02 ± 0,130,17 ± 0,024,66 ± 0,1610,27 ± 0,24171,2 ± 4,47

Tabelul VI

Efectul anti-ulcer al uleiului de cocos virgin (VCO) asupra sintezei prostaglandinei E2 (PGE2)

Tratament PGE2 [pg/mg țesut]
Control negativ50,50 ± 2,93
Control pozitiv (omeprazol - 30 mg/kg)110,70 ± 5,77
VCO (10 mg/kg)158,3 ± 5,27

Valorile sunt exprimate ca medie ± SEM; n = 6.

Discuţie

Omeprazolul este un medicament anti-ulcer utilizat pe scară largă, aparținând inhibitorilor pompei de protoni (IPP), pentru a trata boala ulcerului peptic cauzată de stres, antiinflamatoare nesteroidiene și de infecții cu H. pylori [34]. În general, se știe că IPP-urile acționează prin inhibarea secreției de acid și provocând interacțiuni ireversibile cu pompa de protoni H + K + - ATPază. Cu toate acestea, un alt studiu a dezvăluit că omeprazolul acționează ca un puternic antioxidant pentru eliminarea radicalilor liberi de oxigen și previne daunele oxidative prin creșterea peroxidării lipidelor și a oxidării proteinelor, într-un experiment realizat folosind trei modele diferite de ulcer, stresul, indometacina și ligarea pilorului. modele [35]. Astfel, în prezenta investigație, omeprazolul a fost ales ca medicament standard pentru grupul tratat cu control pozitiv.

Ulcerul indus de stres poate fi cauzat de secreția de histamină de către celulele parietale. În plus, prezența speciilor reactive de oxigen (ROS) din cauza stresului poate provoca, de asemenea, leziuni ale stomacului, ducând la ulcerații. În afară de aceasta, factorii asociați cu acidul și pepsina joacă, de asemenea, un rol în patogeneza ulcerului indus de stres. Creșterea generației de ROS în timpul stresului va duce la deteriorarea oxidativă și va provoca leziuni ale stratului mucoasei. Ulcerul indus de stres duce, de asemenea, la o scădere a producției de mucus. În studiul actual, VCO în mod semnificativ (p Arrieta J, Benitez J, Flores E, Castillo C, Navarrete A. Purificarea triterpenoidelor gastroprotectoare din coaja stem a astringenților Amphipterygium: rolul prostaglandinelor, sulfhidrilelor, oxidului nitric și neuronilor sensibili la capsaicină. Planta Medica 2003; 69: 905-9 [PubMed] [Google Scholar]