Calorimetria izotermică de titrare (ITC) măsoară căldura interacțiunii dintre două molecule. În ITC, o seringă care conține un "ligand" este titrată într-o celulă care conține o soluție de "macromoleculă". Pe măsură ce cele două elemente interacționează, căldura este eliberată sau absorbită. Când macromolecula din celulă devine saturată cu ligand adăugat, semnalul de căldură se diminuează până când se observă doar căldura de diluție de fond. Un exemplu de date ITC colectate în resursa biofizică. O revizuire bună pentru aplicația ITC pentru studii de proteine ​​este dată de Pierce și colab. Resursa biofizică de la Keck Facility oferă VP-ITC de la MicroCal ca instrument de „acces deschis” care poate fi utilizat de către utilizatori instruiți.

resurse

Pentru a programa o sesiune de antrenament, vă rugăm să contactați Ewa Folta-Stogniew

Pentru programul ITC accesați Scheduler

ITC efectuează măsurarea pe molecule native în soluție; nu sunt necesare modificări și măsurarea nu necesită consumabile.

Ghidul general pentru cerințele eșantionului poate fi tipărit din „Cerințele eșantionului” (așa cum este sugerat de MicroCal- producătorul instrumentului ITC).
Ghidul detaliat de pregătire a eșantionului este dat în „ITC_sample_preparation”. Estimarea concentrației de proteine ​​și ligand necesară pentru experimentul ITC poate fi făcută în urma sugestiilor discutate în „Experimental Consideration_ITC”.

Pentru prețuri, accesați Taxe și pentru disponibilitatea sistemului accesați Scheduler

Instrumentul ITC din resurse biofizice are o seringă de titrare de 250 uL. Cerințele MINIMALE pot fi rezumate (PENTRU O SINGURĂ TITRARE):

(dacă este posibil, ar trebui să se utilizeze concentrații mai mari pentru a asigura un semnal mai bun)

ITC este un instrument universal pentru monitorizarea reacțiilor de legare, deoarece măsoară legarea de la schimbarea universală de căldură/entalpie asociată cu toate interacțiunile de legare. Analiza se efectuează la echilibru, în faza de soluție și fără nicio etichetare sau necesitatea unei sonde fluorescente sau de altă natură. Un experiment ITC oferă informații directe despre termodinamica legării. Entalpia de legare este măsurată direct și atunci când este combinată cu constanta de legare de echilibru (măsurată și direct) produce schimbarea entropiei. Dependența de temperatură a modificărilor de entalpie produce capacitatea de căldură care oferă o perspectivă asupra suprafeței îngropate în timpul legării. ITC poate fi, de asemenea, utilizat pentru a determina raportul de masă dintre speciile care interacționează; cu toate acestea, stoichiometria absolută a complexului final trebuie verificată prin alte metode.

Pentru a programa o sesiune de antrenament, vă rugăm să contactați: Ewa Folta-Stogniew

Vă rugăm să citiți „Pachetul de instruire” înainte de instruire.
Vă rugăm să aduceți „pachetul de instruire” pentru cursul de instruire.
Sunt disponibile, de asemenea, manualul ITC complet și manualul ThermoVac.

Pentru prețuri, accesați Taxe și pentru disponibilitatea sistemului accesați Scheduler

Utilizatorii pentru prima dată ai resursei urmează protocolul de rezervare și tarifare; vă rugăm să completați Formular de utilizare a resurselor biofizice conectați în caseta din stânga și trimiteți prin e-mail formularul de utilizare completat complet, cu e-mail Subiect: „Utilizarea resurselor biofizice” la Ewa Folta-Stogniew.

** Atenție Toți utilizatorii de Mac care folosesc „Previzualizare” în loc de „Acrobat”, vă rugăm să salvați PDF-urile după cum urmează: 1. Sub meniul derulant „Fișier”, selectați „Tipărire ...” 2. Faceți clic pe butonul „PDF” din colțul din stânga jos al fereastră. 3. În meniul derulant, selectați „Salvați ca PDF”. 4. Salvați PDF. **