Abstract

Scop

Nu se cunoaște folatul necesar pentru a obține concentrațiile de folat de globule roșii din sânge (RBC) în decurs de 4-8 săptămâni înainte de sarcină. Am studiat efectul suplimentării cu 400 sau 800 µg/zi folat în obținerea foliatului RBC ≥906 nmol/L.

Metode

Femeile care nu sunt însărcinate au fost randomizate pentru a primi suplimente cu mai mulți nutrienți care conțin 400 µg/zi (n = 100) sau 800 µg/zin = 101) folat [acid folic și (6S) -5-CH3-H4folat-Ca (1: 1)]. Modificările biomarkerilor de folat au fost studiate după 4 și 8 săptămâni la 198 de femei care s-au întors cel puțin pentru vizita 2.

Rezultate

La momentul inițial, 12 din cei 198 de participanți (6,1%) aveau folat RBC

Introducere

Suplimentarea preconcepțională cu folat crește statutul de folat matern și previne un număr semnificativ de nașteri cu defecte ale tubului neural (NTD) [1,2,3,4], chiar și atunci când femeile nu au deficit de folat. Prin urmare, se recomandă ca femeile care planifică sarcina sau care pot fi însărcinate să realizeze un aport suplimentar de 400 µg/zi de acid folic prin suplimente și/sau alimente fortificate cu cel puțin 1 lună înainte de sarcină [5, 6]. Această recomandare suplimentară pentru femeile tinere este, așadar, cu mult peste concentrația dietetică recomandată de populație (ADR) de folat (300-400 µg/zi) care intenționează să prevină consecințele severe ale deficitului de folat, cum ar fi anemia [5,6,7].

Practicarea suplimentării cu folat rămâne scăzută în general, în special în timpul sarcinii neplanificate [8]. Din acest motiv, peste 70 de țări din întreaga lume au implementat fortificații obligatorii cu cantități minore de acid folic. Această strategie nu este aplicată în Europa, inclusiv în Germania, unde aportul de folat din dietă nu este suficient pentru a obține statutul optim de folat, iar fortificarea voluntară cu acid folic nu a reușit să îmbunătățească markerii statutului folatului [9]. Într-o țară precum Germania, aproximativ 500 de nașteri cu NTD ar putea fi prevenite în fiecare an dacă toate femeile tinere pot obține statutul optim de folat înainte de concepție [10].

Organizația Mondială a Sănătății (OMS) a recomandat recent un prag de populație optim pentru celulele roșii din sânge (RBC) -folate (> 906 nmol/L) la femeile care nu sunt însărcinate, în vârstă de reproducere [11]. Acest prag este derivat dintr-un studiu observațional cu privire la riscul de foliac-RBC și riscul de NTD [12], pe lângă o modelare matematică a riscului de foliac-RBC și riscul de NTD [13]. Pragul minim de 906 nmol/L a fost atins în țările care aplică fortificarea acidului folic; în timp ce optimizarea statutului de folat la populațiile care nu sunt expuse fortificației rămâne o provocare majoră. Creșterea statutului de folat prin suplimentare depinde de doza de folat [14,15,16], de starea inițială de folat [17] și de durata suplimentării. Cu toate acestea, doza zilnică de folat necesară pentru a atinge niveluri de folii RBC ≥906 nmol/L în 4-8 săptămâni nu este bine stabilită. Studiul actual a investigat efectul a 2 doze de folat (acid folic plus (6S) -5-CH3-H4folat-Ca, 1: 1) în creșterea concentrațiilor de folii RBC la femeile germane aflate la vârsta fertilă în decurs de 4 sau 8 săptămâni. Am folosit 400 sau 800 µg/zi folat timp de 8 săptămâni și am studiat modificările folatului seric, folatului RBC și homocisteinei totale plasmatice (tHcy).

Subiecte și metode

Setarea studiului, participanții și proiectarea

Acesta este un studiu controlat randomizat, deschis, care a fost realizat între ianuarie și mai 2016 la BioTeSys GmbH, Esslingen am Neckar, Germania. Rezultatul principal al studiului a fost modificări ale vitaminei serice D după suplimentarea a două doze diferite de vitamină D, furnizate ca suplimente cu mai mulți nutrienți [18]. Rezultatele secundare au fost modificări ale concentrațiilor de folat (ser și RBC-folat) și tHcy plasmatic. Prezenta lucrare se referă la markerii secundari de rezultat.

Femeile participante au fost randomizate pentru a primi fie 400, fie 800 µg/zi folat ca suplimente orale de multinutrienți conținând acid folic 1: 1 și [(6S) -5-metiltetrahidrofolat-Ca [(6S) -5-CH3-H4folat-Ca]. Randomizarea a fost efectuată utilizând software-ul Randist.exe. Suplimentarea a fost efectuată timp de 8 săptămâni începând de la vizita de recrutare 1 (Diagrama fluxului de studiu, Fig. Suplimentară 1).

Criteriile de incluziune au fost: femeile sănătoase, cu vârsta cuprinsă între 18 și 45 de ani și IMC între 17 și 30 kg/m 2. Criteriile de excludere au inclus administrarea de suplimente care conțin folat sau vitamina D în ultimele 2 luni, boli vasculare, antecedente de cancer, diabet sau contraindicația suplimentării cu iod. Tulburările gastrointestinale care afectează absorbția folatului, cum ar fi boala Crohn, boala celiacă, colita ulcerativă, boala inflamatorie a intestinului și ulcerul peptic au fost, de asemenea, criterii de excludere. Criteriile de excludere și istoricul medical s-au bazat pe informații auto-raportate, dar au fost măsurați mai mulți markeri de laborator pentru a asigura starea generală de sănătate (de exemplu, markeri hepatici, creatinină și hemoleucogramă). Deoarece vitamina D a fost principalul rezultat al studiului, un criteriu de excludere a fost călătorirea în țările sudice în timpul intervenției (a se vedea proiectul studiului sub DRKS-ID: DRKS00009770).

Anunțurile din ziarele și mass-media locale au fost folosite pentru a invita voluntari. Femeile interesate (n = 403) au fost examinate preliminar printr-un interviu telefonic structurat. Femeile care au fost susceptibile de a îndeplini criteriile de includere și niciunul dintre criteriile de excludere (n = 213) au fost invitați la centrul de studiu și toți au participat la vizita de screening. După vizita de screening, 12 femei au trebuit excluse din cauza cel puțin unuia dintre criteriile de excludere. Celelalte 201 de femei au fost randomizate și au început intervenția (100 de femei în grupul de 400 µg/zi și 101 în grupul de 800 µg/zi). O femeie din grupul de 400 µg/zi și 2 din grupul de 800 µg/zi nu s-au întors pentru următoarele vizite, 1 femeie din grupul de 400 µg/zi și 1 din grupul de 800 µg nu s-au întors pentru vizita 3, astfel lăsând 98 de femei în fiecare dintre grupurile de studiu după 8 săptămâni (Suplimentar Fig. 1).

Un protocol jurnal alimentar de 3 zile, inclusiv consumul de alcool, a fost obținut înainte de vizită 1 și din nou 8 săptămâni mai târziu (înainte de vizita 3). Nivelurile medii de aport au fost calculate din ambele perioade de evaluare.

Participanții au primit taxe de studiu ca plată unică la finalizarea studiului pentru a spori motivația și a compensa timpul și transportul la locul de studiu. Studiul a fost realizat în conformitate cu principiile etice pentru cercetarea medicală care implică subiecți umani, menționate în Declarația de la Helsinki. Protocolul de studiu a fost revizuit și aprobat de către comisia de etică medicală din regiunea Baden-Württemberg (număr de aprobare: F-2015-102). Toți participanții au acordat un acord semnat studiului.

Completați compozițiile, conformitatea și siguranța

Participanții au fost randomizați pentru a primi o capsulă zilnică conținând 400 folat de ceață [acid folic și (6S) -5-CH3-H4folat-Ca (1: 1)] (Elevit® gynvital) sau o tabletă conținând 800 µg folat [acid folic + ( 6S) -5-CH3-H4folat-Ca (1: 1)] (Femibion® 1). Compozițiile preparatelor multinutrienților sunt prezentate în tabelul suplimentar 1. Conformitatea cu suplimentul de studiu a fost documentată prin numărarea tabletelor sau capsulelor la fiecare vizită, în plus față de înregistrarea aportului într-un jurnal de studiu. Participanții au fost rugați să documenteze orice evenimente adverse suspectate în jurnalele voluntarului.

Probe și prelucrare de sânge

Probele de sânge au fost colectate la momentul inițial (vizita 1), săptămâna 4 (vizita 2) și săptămâna 8 (vizita 3). Pentru a evita un efect acut cauzat de ultima doză suplimentară asupra biomarkerilor plasmatici și serici, participanții au fost instruiți să se abțină de la produsele studiate cu 24 de ore înainte de colectarea sângelui (vizitele 2 și 3). Sângele a fost colectat după ≥ 10 ore de post în tuburi fără anticoagulant și cele care conțin K + EDTA sau K + EDTA plus NaF (pentru glucoza plasmatică). Serul și sângele integral K + EDTA au fost centrifugate și separate în 30 de minute de la recoltarea de sânge. Pentru măsurarea folatului de sânge integral, hemolizatele de sânge integral au fost preparate imediat prin diluarea sângelui integral cu 0,5% acid ascorbic și incubare timp de 3 ore la temperatura ambiantă. După separare (plasmă, ser) sau preparare (hemolizate de sânge), probele au fost imediat congelate la -70 ° C până la analiza biomarkerilor. Probele de la același participant au fost măsurate la sfârșitul studiului în aceeași perioadă. Toți markerii au fost măsurați folosind alicote care nu au fost dezghețate înainte.

Analize biochimice

Concentrațiile de ser și folat din sânge integral au fost măsurate folosind imunotestul cu chemoluminiscență (IMMULITE®). Concentrațiile de folat RBC (nmol/L) au fost calculate în conformitate cu recomandarea Centrelor pentru Controlul și Prevenirea Bolilor prin ajustarea pentru hematocrit și folat seric măsurată la același individ https://www.cdc.gov/nchs/data /nhanes/nhanes_03_04/l06_c_met_folates-b12.pdf:

Concentrațiile de tHcy au fost măsurate în plasma EDTA utilizând reactivi disponibili comercial (Chromsystems Instruments & Chemicals GmbH) și o cromatografie lichidă cu presiune de fază inversată conectată la un detector de fluorescență. Coeficienții de variație între zile (CV%) pentru testul de folat au fost de 8,8% la 3,6 nmol/L și 5,2% la 24,9 nmol/L. CV-urile% pentru testul tHcy au fost ≤8,2% la 10,0 µmol/L și 20,6 µmol/L.

S-au măsurat numărul de sânge (în sângele integral K + EDTA), glucoza (în NaF-plasmă) și markerii funcțiilor hepatice și renale (în ser). Măsurătorile markerilor de rutină au fost efectuate în aceeași zi de recoltare a sângelui (vizite 1, 2, 3) folosind analizoare automate (Advia 2120i și Advia 2400).

Studiați puterea și analizele statistice

Markerii folatici (RBC și folatul seric) au fost rezultate secundare în acest studiu. Dimensiunea probelor (n = 100 per grup) s-a efectuat calculul pentru variabila rezultatului primar, vitamina D. Pe baza studiilor anterioare efectuate la femei tinere din aceeași țară [14, 19], am prezis o medie [deviație standard (SD)] de bază a folatului seric aproximativ 18,0 (9,0) nmol/L și cel al folicilor RBC să fie de 600 (250) nmol/L Pentru markerul de folat prioritar, RBC-folat, se aștepta ca diferențele dintre grupurile de intervenție să fie de cel puțin 15% după 4 sau 8 săptămâni [diferență medie = 170 (250) nmol/L]. Utilizând diferite scenarii, am estimat că 100 de participanți din fiecare grup vor fi suficienți pentru a detecta diferențele în folia RBC între grupurile cu putere 0,95 și α = 0,05.

Analizele datelor au inclus 198 de femei care s-au întors cel puțin pentru vizita 2 (intenția de a trata). Pentru cei doi subiecți care au oprit studiul înainte de vizita 3, datele lipsă au fost imputate de principiul LOCF. Distribuțiile variabilelor continue au fost testate folosind testul Shapiro-Wilk. Următoarele variabile au prezentat o distribuție normală; creatinină, glucoză de post, hemoglobină și hematocrit, în timp ce toți markerii de folat nu au fost distribuiți în mod normal.

Testarea diferențelor în variabilele continue între două grupuri independente a fost efectuată utilizând nepereche t-test pentru variabilele cu distribuție normală și testul sumelor de rang Wilcoxon pentru variabilele care nu au fost distribuite în mod normal. Testul Chi-pătrat a fost utilizat pentru a testa diferențele în variabilele categorice între grupurile independente. Comparațiile din cadrul grupului (în timp) au fost testate prin testul Friedman cu testul post Dunn. Rezultatele variabilelor continue sunt exprimate ca medie ± SD. Modificările markerilor de sânge au fost calculate ca concentrații post-minus înainte de tratament. Diferențele au fost calculate pentru primul interval după 4 săptămâni (vizita 2 - vizita 1) și pentru întreaga durată de 8 săptămâni (vizita 3 - vizita 1). Testul Spearman a fost utilizat pentru a studia corelațiile dintre diferite variabile.

Toate testele statistice au fost bilaterale și p valori

Rezultate

Caracteristici de referință și markeri de folat

Tabelul 1 prezintă principalele caracteristici ale participanților în funcție de alocarea tratamentului. Grupurile de studiu nu au diferit în ceea ce privește vârsta medie, IMC, creatinină, markeri ai funcției hepatice, glucoză sau hemoglobină. Prevalența fumatului, utilizarea hormonilor anticoncepționali, activitatea fizică, nivelul de educație și numărul femeilor cu copii nu au diferit între grupuri (Tabelul 1).

Concentrațiile inițiale de folat seric, foliat RBC și tHcy plasmatic nu au diferit între grupurile de studiu (Tabelul 2). Doisprezece din cei 198 de participanți (6,1%) au prezentat folii RBC în intervalul de deficiențe.

Postați markeri de folat de intervenție și modificările acestora

După 4 săptămâni, grupul de 800 pg/zi a avut folat seric semnificativ mai mare (medie = 52,3 vs. 37,0 nmol/L; p Tabelul 3 Modificări ale concentrațiilor biomarkerilor de folat în decurs de 4 și 8 săptămâni în funcție de alocarea tratamentului în subgrupul de femei cu concentrații inițiale de folii RBC-folat

Femeile care au început studiul cu niveluri inițiale de RBC-folat Fig. 1

suplimentării

În grupul de 400 µg/zi, nu a existat o corelație semnificativă între RBC-folat inițial și RBC-folat delta la 4 săptămâni (corelație Spearman r = −0,05, p = 0.641) sau asta la 8 săptămânir = 0,04, p = 0,670). Modificările foliei RBC în grupul de 800 µg/zi au arătat o corelație negativă slabă, dar semnificativă, cu RBC-folatul inițial la 4 săptămâni (r = −0,22, p = 0,033), dar nu la 8 săptămânir = −0,10, p = 0,318). Astfel, doza și timpul suplimentar pe suplimente au avut o influență mai puternică asupra modificărilor RBC-folat comparativ cu influența concentrațiilor inițiale de RBC-folat.

RBC-folat ca o funcție a folatului seric sub suplimentare

Concentrațiile post-intervenție de folat RBC au fost stratificate în intervale care diferă cu 100 nmol/L (Fig. Suplimentare. 3 și 4). Răspunsul concentrațiilor serice de folat la tratament a fost puternic, iar concentrațiile nu au fost proporționale cu nivelurile de folii RBC după suplimentare. La 8 săptămâni, folatul seric ≥47,0 nmol/L în grupul de 400 µg/zi sau ≥61,2 nmol/L în grupul de 800 µg/zi a corespuns concentrațiilor de folat RBC> 940 nmol/L.

Zece cazuri de intoleranță au fost documentate și considerate legate de suplimentele studiate (în cea mai mare parte intolerabilitate gastro-intestinală), dar într-un singur caz, participantul a renunțat (în grupul de 400 µg/zi). Nu s-au raportat evenimente adverse grave (inclusiv lipsa decesului) și nu s-au raportat diferențe între evenimentele adverse raportate între grupurile de studiu.

Discuţie

Eliminarea deficienței de folat nu este suficientă pentru a reduce riscul de defecte congenitale. O populație RBC-folat optimă de ≥906 nmol/L pentru definirea suficienței folatului la femeile tinere nu este realizabilă în țările care nu aplică fortificație. Prezentul studiu a arătat că 6,1% dintre femeile participante ar fi considerate deficitare în conformitate cu definiția clasică (RBC-folat