Laboratorul de biochimie a acizilor nucleici, Institutul de biologie chimică și medicină fundamentală SB RAS, Novosibirsk, Rusia.

Laboratorul de biochimie a acizilor nucleici, Institutul de biologie chimică și medicină fundamentală SB RAS, Novosibirsk, Rusia.

Laboratorul de chimie al ARN, Institutul de biologie chimică și medicină fundamentală SB RAS, Novosibirsk, Rusia.

Laboratorul de biochimie a acizilor nucleici, Institutul de biologie chimică și medicină fundamentală SB RAS, Novosibirsk, Rusia.

Laboratorul de chimie al ARN, Institutul de biologie chimică și medicină fundamentală SB RAS, Novosibirsk, Rusia.

Laboratorul de biochimie a acizilor nucleici, Institutul de biologie chimică și medicină fundamentală SB RAS, Novosibirsk, Rusia.

Laboratorul de biochimie a acizilor nucleici, Institutul de biologie chimică și medicină fundamentală SB RAS, Novosibirsk, Rusia.

Adresa corespondenței către: Elena L. Chernolovskaya, DSc, Institutul de Biologie Chimică și Medicină Fundamentală, Laboratorul de Biochimie a Acizilor Nucleici, SB RAS, Bulevardul Lavrentiev, 8, Novosibirsk 630090, Rusia

Laboratorul de biochimie a acizilor nucleici, Institutul de biologie chimică și medicină fundamentală SB RAS, Novosibirsk, Rusia.

Abstract

Obiectivul acestui studiu a fost de a analiza efectele fluoroforilor asupra acumulării intracelulare și asupra activității biologice a ARN-ului cu interferență mică (siARN) și a conjugaților săi de colesterol. În acest studiu, am folosit curbe de calibrare în timp real PCR și buclă de calibrare pentru acumularea cantitativă de ARNm celular. Atașarea fluoroforilor a afectat semnificativ atât acumularea, cât și activitatea biologică a conjugaților siARN. Severitatea acestui efect depindea semnificativ de structura conjugatului; fluoroforii (Cy5.5 sau Alexa-488) atașați la ARNsi, orientați spre partea duplexului opusă colesterolului, au îmbunătățit acumularea intracelulară neproductivă a conjugatului atunci când sunt livrate în modul fără purtător. Acumularea celulară sporită de conjugate de siARN nu a dus la o activitate biologică sporită a conjugatului. Mai mult, atașarea unui fluorofor hidrofob, cum ar fi Cy5.5, la ARNsi convențional și-a îmbunătățit acumularea intracelulară aparentă, dar nu și activitatea sa biologică. Astfel, utilizarea etichetelor fluorescente pentru studiul acumulării intracelulare de ARNsi și conjugații săi formați cu molecule diferite este posibilă numai pentru o gamă limitată de structuri și necesită verificare folosind metode alternative.

  • Cifre
  • Referințe
  • Legate de
  • Detalii