Endocrinologie experimentală

Editat de
Dr. Saumen K. Maitra

Universitatea Visva-Bharati, India

Revizuite de
Yicong Li

Johns Hopkins Medicine, Statele Unite

Asamanja Chattoraj

Institutul de resurse biologice și dezvoltare durabilă (IBSD), India

Afilierile editorului și ale recenzenților sunt cele mai recente oferite în profilurile lor de cercetare Loop și este posibil să nu reflecte situația lor în momentul examinării.

largă

  • Descărcați articolul
    • Descărcați PDF
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Suplimentar
      Material
  • Citarea exportului
    • Notă finală
    • Manager de referință
    • Fișier TEXT simplu
    • BibTex
DISTRIBUIE PE

Cercetare originală ARTICOL

  • 1 Centrul Medical al Universității Leipzig, IFB Adipozity Diseases, Leipzig, Germania
  • 2 Divizii de endocrinologie și nefrologie, Universitatea din Leipzig, Leipzig, Germania
  • 3 Departamentul de Chimie Farmaceutică și Bioanalitică, Institutul de Farmacie, Universitatea Martin-Luther Halle-Wittenberg, Halle, Germania
  • 4 Centrul de cercetare a imunologiei și a biologiei mucoasei, Spitalul General din Massachusetts –– Harvard Medical School, Boston, MA, Statele Unite
  • 5 Facultatea de Bioștiințe, Farmacie și Psihologie, Institutul de Biochimie, Universitatea din Leipzig, Leipzig, Germania

Fundal: Există dovezi în creștere pentru rolul afectării permeabilității intestinale în obezitate și a bolilor metabolice asociate. Zonulina este un marker seric stabilit pentru permeabilitatea intestinală și identic cu pre-haptoglobina2. Aici, ne-am propus să investigăm relația dintre zonulina circulantă și trăsăturile metabolice legate de obezitate.

Metode: Zonulina serică a fost măsurată utilizând un kit ELISA comercial utilizat pe scară largă la 376 de subiecți din cohorta de sorbi din Germania, bine caracterizată din punct de vedere metabolic. În plus, genotipul haptoglobinei a fost determinat în probe de ADN de la toți subiecții studiați.

Rezultate: Deoarece concentrațiile de zonulină nu s-au corelat cu genotipurile haptoglobinei, am investigat specificitatea testului ELISA de zonulină folosind experimente de captare a anticorpilor, spectrometrie de masă și analiză Western blot. Folosind probe de ser care au dat cele mai mari sau cele mai mici semnale ELISA, am detectat mai multe proteine ​​care sunt susceptibile de a fi capturate de anticorp în prezentul kit. Cu toate acestea, niciuna dintre aceste proteine ​​nu corespunde pre-haptoglobinei2. Am folosit concentrații în creștere de pre-haptoglobină2 recombinantă și complement C3 ca una dintre proteinele reprezentative capturate și kitul ELISA nu a detectat niciuna. Analiza Western blot utilizând atât anticorpii policlonali utilizați în acest kit, cât și anticorpii monoclonali crescuți împotriva zonulinei au arătat un model similar de recunoaștere a proteinelor, dar cu intensitate diferită de detectare. Proteina (proteinele) măsurată (e) utilizând trusa ELISA a (fost) crescută semnificativ la pacienții cu diabet și obezitate și s-a corelat puternic cu markerii metabolismului lipidelor și glucozei. Combinând spectrometria de masă și analiza Western blot folosind anticorpii policlonali utilizați în kitul ELISA, am identificat properdin ca un alt membru al familiei zonulinelor.

Concluzie: Studiul nostru sugerează că ELISA zonulină nu recunoaște pre-haptoglobina2, mai degrabă proteine ​​analogice structurale (și, eventual, funcționale) aparținând familiei serine proteazei asociată cu manoză, cu adecvat fiind cel mai probabil candidat posibil.

Introducere

Aici ne-am propus să caracterizăm relația dintre zonulina serică circulantă și trăsăturile legate de obezitate într-o cohortă de sorbi din Germania bine caracterizată din punct de vedere metabolic. Pentru a măsura zonulina, am folosit kitul ELISA disponibil comercial (Immundiagnostik, Bensheim, Germania). În plus, am determinat genotipurile HP în întreaga cohortă. Datorită lipsei de corespondență între concentrațiile de zonulină circulante observate și genotipurile HP în studiul nostru de cohortă, am investigat în continuare identitatea posibilă a produsului captat de testul ELISA comercial. Am constatat că trusa ELISA utilizată în prezentul studiu nu detectează pre-HP2 purificat, ci mai degrabă vizează una sau mai multe proteine ​​dintr-o gamă de molecule candidate, posibil legate structural și funcțional de zonulină. Datele noastre au arătat, de asemenea, că concentrațiile de proteine ​​măsurate prin acest ELISA s-au corelat cu parametrii obezității și trăsăturile metabolice conexe.

Materiale și metode

Subiecte de studiu

Toți subiecții fac parte dintr-un eșantion de la o populație larg caracterizată clinic din estul Germaniei, sorabii (22-24). Fenotiparea extensivă a inclus chestionare standardizate pentru a evalua istoricul medical trecut și istoricul familial, colectarea de date antropometrice [greutate, înălțime, raportul talie-șold (WHR)] și un test oral de toleranță la glucoză. Glucoza a fost evaluată prin metoda Hexokinase (Automated Analyzer Modular, Roche Diagnostics, Mannheim, Germania) și insulina serică a fost măsurată utilizând testul Insulinei AutoDELFIA (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Turku, Finlanda). Concentrațiile serice totale de colesterol și TG au fost măsurate prin metode enzimatice standard (CHOD-PAP și GPO-PAP; Roche Diagnostics). Concentrațiile serice de LDL-C și HDL-C au fost determinate folosind metode comerciale de măsurare directă omogene (Roche Diagnostics). Toate testele au fost efectuate într-un analizor automatizat de chimie clinică (Hitachi/Roche Diagnostics) la Institutul de Medicină de Laborator, Spitalul Universitar Leipzig.

Toate probele de sânge au fost prelevate dimineața după un post peste noapte și depozitate la -80 ° C până la analize. Din cei 1.040 de sorbi înscriși în cohortă, un subgrup de 376 de subiecți a fost genotipat pentru HP și a furnizat probe de sânge pentru măsurarea zonulinelor (Tabelul 1). Principalele caracteristici metabolice ale subiecților studiați sunt rezumate în Tabelul 2.

tabelul 1. Compoziția cohortei de studiu inclusă în măsurătorile zonulinelor.