Adăugați la Mendeley

sistemul

Repere

Am dezvoltat CRISPR - sistem bazat pe Cas9 pentru întreruperile genelor în drojdia industrială.

Am arătat o rată ridicată a eficienței perturbării la tulpinile industriale fără legătură.

Knock-in-ul genei poate fi efectuat simultan cu întreruperea genei.

Utilizarea sistemului descris pe bază de Cas9 are ca rezultat modificări genetice stabile fără markeri.

Metoda a fost aplicată pentru construirea într-o singură etapă a tulpinilor producătoare de acid lactic.

Abstract

Există o cerere de a dezvolta biorefinării de generația a 3-a care să integreze producția de energie cu producția de produse chimice de valoare mai mare din materii prime regenerabile. Aici, tulpinile industriale robuste și tolerante la stres ale Saccharomyces cerevisiae vor fi organisme de producție adecvate. Cu toate acestea, manipularea lor genetică este dificilă, deoarece sunt de obicei diploide sau poliploide. Prin urmare, este necesar să se dezvolte instrumente de inginerie genetică mai eficiente. Am aplicat un sistem CRISPR - Cas9 pentru editarea genomului diferitelor tulpini industriale și am arătat întreruperea simultană a două alele ale unei gene în mai multe tulpini fără legătură, cu eficiență cuprinsă între 65% și 78%. De asemenea, am obținut întreruperea simultană și knock-in a unei gene raportoare și am demonstrat aplicabilitatea metodei prin proiectarea de tulpini producătoare de acid lactic într-un singur eveniment de transformare, în care inserția unei gene heterologe și întreruperea a două gene endogene au avut loc simultan. Studiul nostru oferă o bază pentru ingineria eficientă a fabricilor industriale de celule de drojdie.

Anterior articolul emis Următorul articolul emis