De la Departamentul de Cercetare pentru Nutriție Umană, Universitatea Regală Veterinară și Agricolă, Frederiksberg (P.M.) și Institutul pentru Cercetarea Trombozei, Centrul Universitar South Jutland, Esbjerg (E.-M.B., J.J.), Danemarca.

dietetic

De la Departamentul de Cercetare pentru Nutriție Umană, Universitatea Regală Veterinară și Agricolă, Frederiksberg (P.M.) și Institutul pentru Cercetarea Trombozei, Centrul Universitar South Jutland, Esbjerg (E.-M.B., J.J.), Danemarca.

De la Departamentul de Cercetare pentru Nutriție Umană, Universitatea Regală Veterinară și Agricolă, Frederiksberg (P.M.) și Institutul pentru Cercetarea Trombozei, Centrul Universitar South Jutland, Esbjerg (E.-M.B., J.J.), Danemarca.

Abstract

În studiul de față, am examinat efectul încorporării uleiului de pește (4 g zilnic) într-o margarină pe bază de ulei de floarea soarelui pe o serie de markeri de risc cardiovascular importanți. Studiul a inclus măsurători ale lipidelor din sânge, FVII de coagulare a sângelui și a sistemului fibrinolitic în starea de post și postprandial și oferă o impresie cuprinzătoare a impactului fiziologic al unui consum moderat crescut de n-3 VLCPUFA. În plus, a fost elucidată legătura dintre grăsimile dietetice, trigliceridele plasmatice și activarea postprandială a FVII de coagulare a sângelui.

Metode

Cincizeci de bărbați sănătoși neobezi au fost recrutați pentru studiu. Toți au avut un consum obișnuit de pește (criteriu de includere; adică, mesele calde de pește nu mai mult de o dată pe săptămână sau fără topping zilnic de sandwich cu pește sau produse din pește). Niciunul nu a luat capsule de ulei de pește sau a folosit produse farmaceutice în mod regulat (criterii de excludere). Doi indivizi au renunțat din cauza bolii intercurente și unul a fost exclus din cauza concentrațiilor serice crescute de CRP (indicator al bolii inflamatorii). Vârsta medie a celor 47 de persoane rămase a fost de 41 de ani (SD 9, cuprinsă între 29 și 60 de ani). Greutatea corporală a fost în medie de 77,7 kg (SD 8,8, intervalul 55,6-95,7) și indicii de masă corporală 24,1 kg/m 2 (SD 2,5, intervalul 18,4-29,3). Opt participanți au fost fumători ușori (în medie, 3 țigări pe zi, intervalul 1-7). Protocolul a fost aprobat de Comitetul de Etică din Frederiksberg și Copenhaga, iar consimțământul informat a fost obținut de la voluntari, conform declarației de la Helsinki.

Două margarine au fost produse pentru studiu și livrate în unități de 15 g cu un capac de codare a culorilor. SUN a fost o margarină convențională pe bază de ulei de floarea-soarelui cu un conținut de apă de 16%. FISH a fost similar cu SUN, cu excepția înlocuirii a 2 g de ulei de floarea soarelui la 15 g de margarină cu 2 g de ulei de pește (Aarhus Olie). Compoziția de acizi grași a celor două margarine este prezentată în Tabelul 1 .

Design de studiu

Studiul a fost paralel, randomizat și dublu orb. Durata sa totală a fost de 7 săptămâni: o perioadă de run-in de 3 săptămâni și o perioadă de intervenție de 4 săptămâni. Participanții au mâncat 30 g (2 unități) de margarină pe zi, toate cele 7 săptămâni și au fost instruiți să o folosească numai ca unt. SUN a fost singura margarină utilizată în perioada de rodaj. Voluntarii au fost alocați aleatoriu la margarina SUN (n = 24) sau FISH (n = 23) în timpul perioadei de intervenție. Fiecare 30 g de FISH conținea 0,91 g de n-3 VLCPUFA (C20: 5 + C22: 5 + C22: 6). Probele de sânge de post au fost extrase de la toți participanții imediat înainte și după intervenția de 4 săptămâni. Un subgrup de voluntari a participat la testele de masă în ultima săptămână a perioadei de rodaj și de intervenție. Pe lângă consumarea margarinelor, participanții au fost liberi să mănânce conform preferințelor lor personale. Cu toate acestea, li s-a cerut să nu efectueze modificări dietetice conștiente în timpul perioadei de studiu.

Mese de testare

Nouăsprezece participanți au participat la testele de masă (9 din grupul SUN, 10 din grupul FISH). În fiecare dintre cele două zile de testare apropiate de sfârșitul perioadelor de intervenție și de intervenție, micul dejun a fost servit la 9 dimineața (trebuie consumat în 20 de minute) și prânzul la 11 dimineața (trebuie consumat în 30 de minute).

Micul dejun a constat din pâine albă (90 g), marmeladă de coacăze negre (20 g), brânză tare (40 g), lapte integral (150 g), margarină de testare (30 g SUN/PEȘTE) și apă ad lib. Conținutul total de energie a fost de 3,3 MJ, 56% provenind din grăsimi (49 g). Acizii grași saturați au contribuit cu 44%, monoenele 30%, iar polienele 26% din toți acizii grași.

Prânzul a fost compus din pâine albă (75 g), unt (45 g), pastă de ficat (50 g), brânză tare (40 g), brânză tartinată (30 g), castraveți, salată verde, roșii și piper verde total 90 g), înghețată de vanilie (100 g), frișcă (30 g), marmeladă de coacăze negre (25 g) și apă ad lib. Conținutul total de energie a fost de 5,6 MJ, iar conținutul total de grăsimi 99 g, sau 67% din energie. Acizii grași saturați au contribuit 64%, monoenele 30%, iar polienele 6% din toți acizii grași.

Participanții au fost sângerați la 0800 (post), 1030, 1200, 1315, 1430 și 1600 ore în zilele de testare. Li s-a permis să părăsească departamentul între activitățile programate, dar nu au fost permise alimente sau băuturi în afară de ceea ce am servit de noi. Participanții s-au abținut de la cafea, ceai și tutun în zilele de testare.

Prelevarea de sânge

Subiecții s-au abținut de la utilizarea oricăror medicamente ocazionale, inclusiv aspirină și alte medicamente antiinflamatoare nesteroidiene, timp de cel puțin o săptămână înainte de prelevarea de probe de sânge. Consumul de alcool și participarea la sport nu au fost permise în timpul zilei înainte de prelevare. În cele din urmă, voluntarii au postit (fără alimente, băuturi sau tutun în afară de 1/2 L de apă) începând cu ora 22 seara înaintea prelevării de probe.

După cel puțin 10 minute de repaus în decubit dorsal, s-a prelevat sânge într-o serie de tuburi evacuate umplute în aceeași ordine fixă ​​așa cum sunt menționate acum. Sângele a fost colectat în tuburi EDTA pentru analiza lipidelor plasmatice și a apolipoproteinelor, în tuburi stabilizate acidificate cu baie de gheață (Biopool) pentru variabilele fibrinolitice din plasmă, în Diatuburi cu baie de gheață (Becton Dickinson) pentru β-TG plasmatic, în citrat cu baie de gheață tuburi pentru vWF plasmatic și Lp (a), în tuburi EDTA de 5 ml scăldate în gheață la care s-au adăugat imediat 10 μL d-Ph-Pro-Arg clorometil cetonă (2,63 g/L) pentru plasma FbdP și F1 + 2, în tuburi citrate la temperatura ambiantă pentru plasma FVII și fibrinogen, în tuburi de heparină cu fluorură de sodiu (Becton Dickinson) pentru glucoză plasmatică, în tuburi fără aditivi pentru insulina serică și CRP și în tuburi EDTA pentru analiza compoziției acizilor grași LDL și a rezistenței la oxidare ( să fie prezentat separat).

Toate tuburile au fost filate la temperatura relevantă și 3000g timp de 15 minute și alicote de plasmă/ser au fost apoi înghețate rapid și depozitate la -80 ° C până la analiză. Plasma pentru analizele LDL a fost depozitată într-o atmosferă de azot.

Analize de sânge

Toate analizele au fost efectuate într-o serie pentru fiecare participant. Concentrațiile plasmatice de colesterol total, colesterol HDL și trigliceride au fost determinate prin metode enzimatice (Boehringer Mannheim GmbH) pe Cobas Mira + (Roche Diagnostic Systems, Inc.). Colesterolul HDL a fost estimat după precipitarea lipoproteinelor apolipoproteinei B cu acid fosfotungstic - MgCl2. Apolipoproteinele A-I și B au fost testate prin turbidimetrie (Roche) pe Cobas Mira+.

FVIIc plasmatic a fost măsurat într-un test de coagulare într-o etapă utilizând factorul de plasmă cu deficit de FVII (Biopool) și factorul țesutului cerebral uman. 5 În testul de cheag pentru FVIIa, a fost utilizat factorul mutant de țesut recombinant (Diagnostica Stago). Concentrațiile plasmatice de fibrinogen au fost evaluate printr-un test Clauss modificat. 6 Activitatea tPA plasmatică a fost determinată printr-un test de microtitrare cromogenă (Chromolize, Biopool). ELISA disponibil comercial a fost utilizat pentru evaluarea FVIIag și β-TG (ambele de la Diagnostica Stago) și pentru antigenul tPA și PAI-1 în plasmă (ambele de la Biopool). Plasma FbdP (Organon Technique), F1 + 2 (Behringwerke AG) și Lp (a) (Biopool AB) au fost, de asemenea, determinate prin metode ELISA. VWF plasmatic a fost evaluat cu un ELISA așa cum a fost descris anterior. 7 Glucoza plasmatică a fost măsurată prin metoda hexokinazei (Gluco-quant, Boehringer Mannheim GmbH) și insulina serică cu RIA (Insi-Pr, CIS). Concentrațiile serice de CRP au fost determinate prin imunoturbidimetrie. Probele cu niveluri crescute (> 10 mg/L) au fost permise din analizele statistice.

Conformitatea studiului a fost evaluată printr-o combinație de înregistrări ale consumului de margarină păstrate de voluntari și determinări ale conținutului n-3 VLCPUFA al lipidelor LDL. Conținutul de LDL n-3 VLCPUFA nu este cel mai bun marker plasmatic al aportului alimentar de n-3 VLCPUFA, dar a fost selectat deoarece era disponibil dintr-un substudiu de ulei de pește și oxidare LDL pe baza acelorași probe de sânge (pentru a fi prezentat separat ). S-a demonstrat o asociere pozitivă semnificativă între aportul de pește (grame pe zi), după cum a fost evaluat din interviurile din istoricul dietei și conținutul de DHA al LDL înainte de intervenție (r= .29, P 9 10 11 12 Orice efect protector al peștilor pare a fi atins la aporturi mici (1 până la 2 porții pe săptămână, corespunzând la 0,5 până la 1,0 g de VLCPUFA pe zi). 13 14 În studiul de față, am testat dacă 0,91 g/zi au avut vreun efect asupra componentelor cheie ale metabolismului lipidic și ale sistemului hemostatic. Aceste componente au o importanță patogenetică în IHD. Singurul efect n-3 VLCPUFA pe care l-am observat care ar putea contribui la efectele cardioprotectoare putative ale consumului moderat de pește a fost scăderea trigliceridelor postprandiale.

Uleiul de pește nu a avut efecte semnificative asupra concentrației plasmatice a lipidelor din sânge și a apolipoproteinelor AI și B. Am văzut scăderea așteptată a trigliceridelor și creșterea colesterolului HDL 21, dar tendințe similare au fost observate în grupul SUN, iar modificările nu au diferit în analize multivariate. Cu toate acestea, concentrațiile de trigliceride postprandiale au fost reduse dramatic de uleiul de pește. Scăderea atribuibilă a uleiului de pește s-a apropiat de 30%. Modificări ale acestei magnitudini au fost observate și în studiile anterioare care foloseau doze mai mari de ulei de pește sau perioade mai lungi de tratament. 22 23 24 25 26 Potrivit unor observații epidemiologice, o concentrație scăzută de trigliceride neduritoare poate implica un risc redus de IHD. 27 28 Este totuși dezbătut dacă trigliceridele care nu se fixează sunt legate independent de riscul IHD. 29 30 Coexistența trigliceridelor crescute cu hipercoagulabilitate și niveluri scăzute de colesterol HDL poate explica relația. 31 32 Alții susțin că lipoproteinele bogate în trigliceride și resturile lor sunt legate cauzal de aterogeneză. 33 34 35 36 37 Până în prezent, consecințele clinice ale scăderii trigliceridelor care nu fac fasting rămân controversate.

Cum sunt scăzute trigliceridele care nu se fixează de ulei de pește? O posibilitate este că uleiul de pește îmbunătățește eliminarea chilomicronilor prin lipazele hepatice și endoteliale. Acest efect ar putea fi explicat printr-o competiție redusă pentru enzimele lipolitice datorită unui debit hepatic atenuat de VLDL sau printr-o activitate specifică crescută a lipoproteinei lipazei cauzată de o compoziție modificată de acizi grași a membranelor celulare în care este încorporată enzima. 21 24 25 38 O scădere a intrării chilomicronului în piscina de plasmă ar putea explica, de asemenea, constatările, iar această posibilitate nu poate fi exclusă. 39 Greutatea corporală stabilă a participanților care consumă FISH argumentează împotriva unei reduceri induse de uleiul de pește în absorbția grăsimilor intestinale, ceea ce ar putea explica teoretic și scăderea trigliceridelor care nu fac fasting.

FVII de coagulare a sângelui, fibrinogen (ambii predictori ai IHD în studiile epidemiologice), 40 41 42 și F1 + 2 (un marker al activării coagulării) nu au fost afectați de uleiul de pește atunci când au fost măsurați în starea de repaus alimentar. De fapt, singura constatare semnificativă în cadrul sistemului de coagulare a sângelui a fost o scădere a concentrațiilor de FVIIag nedorite de uleiul de pește. Ultimul efect nu a fost suficient de puternic pentru a afecta activitățile de coagulare a FVII și poate să nu aibă niciun impact fiziologic. Descoperirile noastre actuale confirmă studiile anterioare privind dieta de pește și suplimentarea cu ulei de pește care raportează activitatea de coagulare a FVII și fibrinogenul nu trebuie să fie afectate. 43 44 45 Este puțin probabil ca vreun efect al consumului de pește asupra IHD să fie mediat prin modificări ale acestor markeri de risc hemostatic.

Consumul de diete de pește și suplimente de ulei de pește echivalent cu o doză zilnică de 1,8 g n-3 VLCPUFA sau mai mult este asociat cu o creștere a nivelurilor de PAI și o inhibare a sistemului fibrinolitic. 18 44 45 54 55 56 Acest efect protrombotic nu a fost observat cu aportul mai mic de VLCPUFA n-3 al prezentului studiu. Influența absentă asupra FbdP (un marker al fibrinolizei în curs) și Lp (a) sugerează, de asemenea, că fibrinoliza endogenă nu a fost afectată.

Mai multe studii au investigat efectul peștilor sau al uleiului de pește asupra agregării trombocitelor. 16 45 55 57 58 59 60 Astfel de studii au avut rezultate divergente care se pot datora unor dificultăți analitice. Plasma β-TG, o proteină eliberată din granulele de trombocite în timpul activării, poate fi un indicator mai fiabil al activării in vivo a trombocitelor. Prezentul studiu nu a arătat niciun efect asupra concentrațiilor de β-TG în plasmă și, astfel, nu susține un efect antitrombotic al consumului moderat de ulei de pește asupra funcției plachetare.

Au fost demonstrate asocieri puternice și consistente între unele dintre variabilele analizate. În acord cu un studiu finlandez recent, concentrațiile apolipoproteinei B s-au corelat pozitiv cu colesterolul total, trigliceridele și FVIIc. 61 Relația inversă observată între antigenul tPA și activitatea tPA se explică prin binecunoscuta inhibiție fibrinolitică mărită (niveluri ridicate de PAI-1) la concentrații plasmatice ridicate de antigen tPA. 62 Aceste asociații ajută la explicarea de ce concentrațiile de antigen tPA sunt asociate pozitiv cu riscul IHD. 62 63

În concluzie, acest studiu a arătat că consumul timp de 4 săptămâni de 0,91 g n-3 VLCPUFA pe zi scade trigliceridele care nu țin post la bărbații sănătoși de vârstă mijlocie. Alte aspecte mai critice ale metabolismului lipidic și o gamă largă de factori trombogeni nu au fost afectate. O scădere a trigliceridelor postprandiale a fost, așadar, singurul efect n-3 VLCPUFA care ar putea contribui la prevenirea primară a IHD, așa cum este evaluat prin markeri de risc lipidici și hemostatici bine măsurați și bine stabiliți în prezent. Este posibil ca beneficiul presupus al unui consum moderat de pește în prevenirea primară a IHD să provină mai degrabă din înlocuirea peștilor care sunt alimente aterogene și protrombotice decât din efectele specifice n-3 VLCPUFA. Impactul n-3 VLCPUFA în prevenirea secundară a IHD poate fi foarte diferit și nu poate fi determinat din prezentul studiu.