Alix Barbe

1 INRAE ​​UMR85 Physiologie de la Reproduction et des Comportements, Nouzilly, Franța

maternă

2 CNRS UMR7247 Physiologie de la Reproduction and des Comportements, Nouzilly, Franța

3 Universitatea François Rabelais din Tours, Tours, Franța

4 IFCE Nouzilly, Nouzilly, Franța

Namya Mellouk

1 INRAE ​​UMR85 Physiologie de la Reproduction et des Comportements, Nouzilly, Franța

2 CNRS UMR7247 Physiologie de la Reproduction and des Comportements, Nouzilly, Franța

3 Universitatea François Rabelais din Tours, Tours, Franța

4 IFCE Nouzilly, Nouzilly, Franța

Christelle Ramé

1 INRAE ​​UMR85 Physiologie de la Reproduction et des Comportements, Nouzilly, Franța

2 CNRS UMR7247 Physiologie de la Reproduction and des Comportements, Nouzilly, Franța

3 Universitatea François Rabelais din Tours, Tours, Franța

4 IFCE Nouzilly, Nouzilly, Franța

Jeremy Grandhaye

1 INRAE ​​UMR85 Physiologie de la Reproduction et des Comportements, Nouzilly, Franța

2 CNRS UMR7247 Physiologie de la Reproduction and des Comportements, Nouzilly, Franța

3 Universitatea François Rabelais din Tours, Tours, Franța

4 IFCE Nouzilly, Nouzilly, Franța

Karine Anger

5 INRAE ​​- Unitatea experimentală din domeniul de experimentare Avicole de Tours UEPEAT, 1295, Nouzilly, Nouzilly, Franța

Marine Chahnamian

5 INRAE ​​- Unitatea experimentală din domeniul de experimentare Avicole de Tours UEPEAT, 1295, Nouzilly, Nouzilly, Franța

Patrice Ganier

5 INRAE ​​- Unitatea experimentală din domeniul experienței Avicole de Tours UEPEAT, 1295, Nouzilly, Nouzilly, Franța

Aurélien Brionne

6 INRAE, UMR0083 Biologia Oiseaux și Avicultura, Nouzilly, Franța

Antonella Riva

7 INDENA, Tours, Franța

Pascal Froment

1 INRAE ​​UMR85 Physiologie de la Reproduction et des Comportements, Nouzilly, Franța

2 CNRS UMR7247 Physiologie de la Reproduction and des Comportements, Nouzilly, Franța

3 Universitatea François Rabelais din Tours, Tours, Franța

4 IFCE Nouzilly, Nouzilly, Franța

Joëlle Dupont

1 INRAE ​​UMR85 Physiologie de la Reproduction et des Comportements, Nouzilly, Franța

2 CNRS UMR7247 Physiologie de la Reproduction and des Comportements, Nouzilly, Franța

3 Universitatea François Rabelais din Tours, Tours, Franța

4 IFCE Nouzilly, Nouzilly, Franța

Date asociate

Toate datele relevante se află în hârtie și în fișierele sale de informații de suport.

Abstract

Compoziția dietelor

De la o săptămână până la a patra săptămână, puii crescători de sex feminin au primit o dietă ad libitum (acces gratuit la alimente), numită dietă inițială. În săptămâna 4, toate animalele au primit o dietă restricționată în conformitate cu recomandarea Hendrix Genetics. De la 4 săptămâni la 40 de săptămâni, animalele au primit trei diete diferite: în creștere (de la 4 la 18 săptămâni), înainte de ouat (de la 18 săptămâni la 21 săptămâni) și ouat (de la 21 săptămâni la 40 săptămâni). Am efectuat două experimente în funcție de momentul suplimentării cu GSE, așa cum este descris mai jos. Pentru ambele experimente, furajul rămas a fost cântărit. Compoziția GSE utilizată pentru acest studiu a fost analizată prin HPLC (High Performance Liquid Chromatography). Cea mai importantă componentă a fost procianidinele (> 90%). Suplimentul a fost amestecat manual cu dieta la concentrația adecvată a dietei totale. Compoziția dietelor este prezentată în tabelul S1 și o schemă a proiectului experimental este prezentată în S1 Fig.

Experimentul 1

În experimentul 1, animalele au fost împărțite în trei grupe: grupa A (martor, n = 92), grupa B și C suplimentate cu GSE la 0,5% (n = 80) și 1% (= 80) din compoziția totală a dietei, respectiv, de la vârsta de 4 săptămâni până la vârsta de 40 de săptămâni.

Experimentul 2

În experimentul 2, am folosit două grupuri de animale: grupul A (martor, n = 92) și grupul D (suplimentat cu 1% GSE de la eclozare până la vârsta de 40 de săptămâni, n = 72).

Măsurarea producției și calității ouălor

În fiecare experiment, din a 24-a săptămână, ouăle din fiecare stilou au fost colectate de două ori pe zi, numărate și ponderate folosind o balanță (Ohauss, Pionner). Au fost colectate și numărate ouăle normale și duble (ouă cu doi gălbenușuri). . S-au determinat greutatea albuminului, a gălbenușului de ou și a cojii deshidratate. La începutul perioadei de ouat (a 26-a săptămână), lățimea și lungimea ouălor depuse pentru fiecare grup de animale au fost măsurate folosind un etrier digital (Mitutoyo, CD-20DCX). Folosind un instrument Instron (Instron, UK527), am analizat rigiditatea statică (Sd, N/mm), rezistența la tracțiune (F), modulul elastic (Eshell, N/mm 2), rezistența (Kc, N/mm 3) din ouă. Greutatea și grosimea învelișului au fost, de asemenea, măsurate. Acești parametri au fost evaluați pentru 30 de ouă din fiecare grup de animale din fiecare experiment.

Determinarea greutății și a numărului de foliculi

În fiecare experiment, la vârsta de 40 de săptămâni, au fost selectate 10 găini pe grup și foliculii preovulatori (de la 1 la 4) au fost colectați, definiți ierarhic și cântăriți. Celulele granuloase și celulele theca au fost colectate din F1.

Parametrii de fertilitate

Pentru inseminarea artificială, am folosit semințele a 48 de coci (Cobb500), colectate și combinate pentru a forma o singură probă. Pentru fiecare experiment, găinile au fost inseminate cu 2 x 108 spermatozoizi, la 28 și 33 săptămâni. Ouăle au fost colectate și numărate zilnic timp de 3 săptămâni după inseminarea artificială și incubate la fiecare șapte zile. Am evaluat numărul de ouă nefertilizate, mortalitatea embrionară timpurie (EEM) și tardivă (LEM) prin spargerea ouălor și lumânarea în ziua a 7-a (EEM) și a 14-a (LEM) de incubație. Diferitele procente (EEM, LEM, eclozabilitate, eclozabilitate a ouălor fertile și fertilitate) au fost calculate folosind următoarele formule:

Măsurarea depunerii de progesteron, androstendionă, testosteron și estradiol în gălbenuș de ou

În fiecare experiment, am evaluat concentrația de steroizi de la 30 de gălbenușuri de ouă pe grupă. Steroizii au fost extrasați cu dietil eter după agitație intensă și centrifugare. Faza dietil eter care conține steroizi a fost decantată după congelarea tuburilor în azot timp de 10 secunde. Solvenții organici au fost apoi evaporați și extractele preluate în tampon fosfat. Hormonii steroizi (progesteron, estradiol, testosteron și androstendion) au fost apoi măsurați în extracte folosind teste ELISA. Pentru progesteron, testul ELISA a fost efectuat așa cum este descris de [22]. Sensibilitatea testului a fost de 0,4 ng/ml. Concentrațiile de estradiol și testosteron au fost determinate folosind teste ELISA comerciale de la Cayman Chemicals și sensibilitatea acestor teste a fost de 0,01 ng/ml. Nivelurile de androstendionă au fost analizate folosind un test ELISA de la Abcam, iar sensibilitatea testului a fost de 0,01 ng/ml. Coeficienții de variație (CV) intra-test și inter-test pentru fiecare test au făcut media -ct. Apoi, expresia relativă a genei de interes a fost legată de expresia relativă a mediei geometrice a celor trei gene de referință (GAPDH, ACTB și EIF3).

Cultura in vitro a celulelor granuloase de găină

În fiecare experiment, celulele granuloase din foliculii preovulatori 1 (F1) de găini hrănite cu supliment alimentar GSE sau cu o dietă martor au fost colectate de la 7 animale pentru fiecare grup. Apoi, celulele au fost dispersate în 0,3% colagenază tip A (Roche Diagnostic, Meylan, Franța) în mediu F12 conținând 5% ser fetal bovin (FBS), la 37 ° C. Celulele au fost peletizate prin centrifugare, spălate de două ori cu mediu proaspăt și numărate într-un hemocitometru. Viabilitatea celulelor granuloase a fost estimată prin excluderea Trypan Blue. Celulele au fost cultivate într-un mediu compus din DMEM suplimentat cu 100 U/ml penicilină, 100 mg/L streptomicină, 3 mmol/L L-glutamină și 5% FBS. Celulele au fost inițial cultivate timp de 24 de ore fără tratament. După privarea serică peste noapte, celulele colectate de la găinile Rhode Island au fost stimulate cu GSE (0,01, 0,1, 1, 50 și 100 μg/ml) sau lăsate netratate timp de 48 de ore. Celulele colectate de la găinile hrănite cu supliment de GSE au fost stimulate cu IGF1 (10 -8 M), LH (10 -8 M), IGF1 + LH (10 -8 M) sau lăsate netratate. Toate culturile au fost menținute sub o atmosferă saturată de apă de 95% aer/5% CO2 la 37 ° C.